梁龙
- 作品数：81 被引量：232H指数：7
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划军队医药卫生科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学理学更多>>
- 大肠杆菌O157∶H7 EDL933wz3672基因缺失突变体的构建被引量：1
- 2009年
- 目的:构建EHEC O157∶H7 EDL933wz3672基因缺失突变体。方法:根据已知的O157∶H7 EDL933基因组全序列,采用pKOBEG介导的Red重组系统,筛选卡那霉素抗性基因替换z3672基因的阳性克隆,然后FLP位点特异性重组去除两端带有FRT位点的卡那霉素抗性基因,最后通过PCR和测序手段证实。结果:获得了z3672基因缺失而且不含有卡那霉素抗性基因的EHEC O157∶H7 EDL933w突变菌株。结论:为进一步研究O157∶H7的致病机制奠定了基础。
- 马延高原周围张京生凌焱李玉霞梁龙
- 关键词：基因敲除RED重组系统
- 福氏志贺菌5a型M90T株GAPDH蛋白多克隆抗体的制备和鉴定被引量：6
- 2014年
- 目的制备高效的福氏志贺菌5a M90T3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)的多克隆抗体,并对其特异性进行评价。方法提取M90T的全基因组,采用PCR法扩增M90T中的基因gapA克隆到原核表达载体pET-24中,重组质粒转入到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,条件优化后纯化GAPDH-His融合蛋白。以纯化的融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,制备该蛋白的多克隆抗体。Western blot法、ELISA鉴定获得的抗血清。结果成功构建了原核表达载体pET24a-gapA,通过一系列诱导条件的优化,确定可溶性条件为30℃、1 mmol/L IPTG诱导2 h。用纯化的融合蛋白GAPDH-His作为抗原免疫小鼠制备多克隆抗体,Western blot法、ELISA证明多克隆抗体制备成功。结论成功制备了福氏志贺菌5a M90T特异性的小鼠多克隆抗体。
- 王羽廖翔岳俊杰周围梁龙呼和巴特尔
- 关键词：3-磷酸甘油醛脱氢酶多克隆抗体
- 系统发生分析发现牛病毒性腹泻病病毒新基因亚型被引量：12
- 2005年
- 本研究对我国首次分离获得的牛源牛病毒性腹泻病毒(BVDV)毒株Changchun 184(CC-184)和猪源牛病毒 性腹泻病毒ZM-95进行了遗传衍化关系研究。选择主要抗原E2基因为研究对象,首先应用RT-PCR及套式PCR 克隆得到CC-184和ZM-95的E2片段,通过序列测定发现CC-184和ZM-95 E2基因长度分别为1,122bp和1, 125bp,各自编码374和375个氨基酸残基。核酸序列同源性比较和系统发生分析表明2株病毒均属于BVDV-1, CC-184与Osloss亲缘关系最近,都属于已有的b基因亚型,其E2基因同源性达91．8％。而ZM-95的E2基因有 一个特征性的变异区,包含一个密码子序列插入,这一变异区编码了一段有别于其他瘟病毒的五肽氨基酸序列 HYKKK。结果还表明ZM-95与BVDV-1现有的5个基因亚型的亲缘关系均较远,E2基因同源性最高(与Oregon c24v)只有72．4％。而BVDV-1亚型内毒株间的同源性大于85％,亚型间的同源性在69％～75％之间,充分说明 ZM-95是BVDV-1中一个新发现的基因亚型。通常认为猪源BVDV来源于牛,应该与牛源BVDV有十分近的遗 传关系,但是本研究发现ZM-95与其他已知牛源BVDV较低的基因同源性说明猪源BVDV还具有独立的遗传衍 化与传播来源的可能性。
- 徐兴然肖昌梁龙余兴龙张青婵涂长春
- 关键词：猪源BVDVE2基因
- 应用适应性进化研究SARS病毒的起源问题
- 引发SARS世界流行的人类SARS病毒的起源问题一直受到广泛关注,本研究目的在于应用适应性进化研究方法来研究人类SARS病毒的起源问题,通过对SARS病毒Spike蛋白和N蛋白正选择位点的研究,来检验果子狸是否是人类SA...
- 梁龙王月兰
- 关键词：SARS病毒SPIKE蛋白病毒感染
- 文献传递
- 蛋白质相互作用的生物信息学研究进展被引量：13
- 2006年
- 生命过程的分子基础在于生物分子之间的相互作用,其中蛋白质分子之间的相互作用占有极其重要的地位。研究蛋白质相互作用对于理解生命的真谛、探讨致病微生物的致病机理,以及研究新药提高人们的健康水平具有重要的作用。用生物信息学的方法研究蛋白质的相互作用已经取得了许多重要的成果,但也有很多问题还需解决。本文从蛋白质相互作用的数据库、预测方法、可预测蛋白质相互作用的网上服务、蛋白质相互作用网络等几方面,对蛋白质相互作用的生物信息学研究成果及其存在的问题做了概述。
- 任仙文李北平王月兰岳俊杰梁龙
- 关键词：蛋白质相互作用生物信息学
- 节杆菌K1108乙内酰脲酶三维结构的模建和分析被引量：5
- 2003年
- 利用同源模建技术,以节杆菌DSM3745乙内酰脲酶的晶体结构为模板,模建了节杆菌K1108乙内酰脲酶的三维结构。模建的节杆菌K1108乙内酰脲酶结构由一个中心的(α/β)8桶状结构域和富含β-折叠的结构域两个区域组成,富含β-折叠的结构域在中心(α/β)8桶状结构域的侧面,由分子的N端和C端组成。根据K1108乙内酰脲酶和其它酶在结构和活性部位的保守性,确定了K1108乙内酰脲酶的底物结合部位,并对酶的活性中心的特征进行了分析,对L-Hyd的底物选择性进行了解释。
- 岳俊杰王月兰周秀菊张惟材梁龙黄培堂
- 关键词：节杆菌乙内酰脲酶活性部位
- 基于四环素调控系统的病毒载体在基因治疗中的应用被引量：2
- 2009年
- 基因治疗已经发展成为处理各种疾病的理想治疗模式。病毒载体是将基因递送到体内或体外的分裂和非分裂细胞的有效工具。病毒载体基因治疗在临床环境成功应用的一个重要问题是严谨和持续地调控基因表达。目前,已经报道的无毒且严谨的调控转基因表达系统中,四环素转录调控系统是在体内和体外研究最好而且高效的调控系统。Tet调控系统已经被编码在慢病毒属、腺病毒属、腺相关病毒属和逆转录病毒属,而且可以有效地对基因进行调控。将主要讨论已经在Tet调控系统调控下递送基因的主要载体系统及其在基因治疗上的应用。
- 张小男李玉霞凌焱梁龙陈珊陈惠鹏
- 关键词：四环素病毒载体基因治疗基因开关
- 基于“模块”的致病菌基因组进化研究
- 本文以研究细菌基因组和基因的进化事件为目的，提出即将一个蛋白序列转换成一个或多个“模块”，然后基于这些“模块”分析基因组和基因的进化事件。通过比较不同蛋白序列的“模块”构成及功能分析，结果表明构成致病相关毒力因子和共有毒...
- 喻东靳远李北平岳俊杰梁龙
- 关键词：致病菌基因组蛋白质序列
- 文献传递
- 胰岛素受体胞外区三维结构的模建及结构功能关系被引量：2
- 2002年
- 利用计算机辅助分子设计技术模建了人胰岛素受体α亚基N端三个结构域的空间结构。实验研究证明胰岛素受体结合胰岛素的主要决定要素在这三个结构域。在模建的结构中,三个结构域围成了一个很大的开放的空洞,这个空洞的体积大小足以容纳一个胰岛素分子,这个空洞可能就是胰岛素受体与底物的作用的部位。另外,突变实验研究表明在胰岛素受体中有一个结合底物的“footprint”,由4个在一级结构上不连续的片段组成。从三维结构角度看,这4个片段中,有3个出现在邻近的平行折叠股。在我们的模型中,胰岛素受体分子中有一个两性表面,这个表面位于L1结构域,并且面向三个结构域围成的空洞。这个表面可能就是受体识别胰岛素和与底物发生初始作用的部位。“foot-print”和两性表面的大部分残基是相同的。
- 岳俊杰梁龙王月兰俞炜源黄培堂
- 关键词：胰岛素受体
- 大肠杆菌O157:H7 sRNA基因E40缺失突变株的构建
- 2010年
- 目的:利用Red系统构建肠出血性大肠杆菌O157:H7的sRNA基因E40缺失突变株。方法:选取本实验室预测并经过实验验证的sRNA基因,根据NCBI上相应的序列,设计2对引物分别扩增该sRNA基因的上下游分别长464和455bp的同源臂,经PCR扩增,构建到相应的载体,最后以构建好的含上下游同源臂和卡那霉素抗性基因的长约2500bp的线性片段作为打靶片段,在Red重组系统的作用下与sRNA基因E40的上下游同源区域发生同组,从而把sRNA基因从基因组上置换下来,之后利用质粒pCP20将FRT位点间的卡那霉素抗性基因消除。结果与结论:构建了出血性大肠杆菌O157:H7的sRNA基因E40的缺失突变株,为进一步研究sRNA基因在出血性大肠杆菌O157:H7生长及致病过程中所起的功能奠定了良好的基础。
- 王刚王刚宋兰马延周围张德礼岳俊杰
- 关键词：肠出血性大肠杆菌O157:H7SRNARED重组系统
