杨延周
- 作品数：19 被引量：31H指数：4
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- 小鼠卵巢玻璃化冻存全程添加FSH、FSH+LH对Cx43表达的影响
- 2015年
- 目的通过在玻璃化冻存全程给予小鼠卵巢组织促卵泡刺激素(FSH)、FSH和促黄体生成素(LH)共同干预,观察FSH及FSH+LH干预对冻存卵巢卵泡缝隙连接蛋白(connexin-43,Cx43)表达的影响,从而判断最佳的激素保护方法。方法将4周龄C57BL/6J小鼠卵巢组织分为新鲜对照组(CG),玻璃化冻存对照组(VCG),0.3IU·m L^(-1)FSH全程干预玻璃化冻存组(OG-FSH),以及0.15IU·m L^(-1)FSH+0.15IU·m L^(-1)LH全程干预玻璃化冻存组(OG-FSH+LH)。通过免疫组织化学法、Western blot技术及荧光定量PCR检测,观察并分析各组卵巢组织Cx43蛋白表达量。结果免疫组织化学及Western blot检测结果表明Cx43蛋白表达量在OG-FSH+LH组最高,其次为OG-FSH组、CG组及VCG组(P<0.05),各组间两两比较差异均有统计学意义(P均<0.05);荧光定量PCR检测结果显示Cx43mRNA表达量从高到低依次为OG-FSH+LH组、OG-FSH组、CG组及VCG组(P<0.05),且各组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论玻璃化冻存全程添加FSH+LH的干预方式更有利于冻融卵巢组织缝隙连接蛋白Cx43蛋白的表达。
- 陈杰常青杨延周裴秀英马文智马会明马会明黑常春于佳孙苗
- 关键词：小鼠卵巢促卵泡刺激素促黄体生成素玻璃化冻存缝隙连接蛋白
- miR-23a-3p通过调控靶基因Gja1参与调控大鼠卵泡闭锁及颗粒细胞凋亡被引量：4
- 2021年
- 目的探讨miR-23a-3p在大鼠卵泡闭锁及卵巢颗粒细胞凋亡过程中的作用机制。方法分别在SD大鼠卵巢囊中注射miR-23a-3p模拟物/抑制剂,转染72 h后,采用HE染色法检测大鼠卵巢组织形态变化及闭锁卵泡数变化情况;采用生物信息学及荧光素酶报告系统预测并验证miR-23a-3p的靶基因及其结合位点;体外分离培养大鼠卵巢颗粒细胞,并分别转染miR-23a-3p模拟物及抑制剂,采用荧光定量PCR(RT-PCR)法检测转染72 h后颗粒细胞中miR-23a-3p及其靶基因缝隙连接蛋白43(Gja1)的表达情况;Gja1干扰慢病毒转染大鼠颗粒细胞,转染72 h后,采用RT-PCR和Western blot检测大鼠卵巢颗粒细胞中Gja1在mRNA和蛋白水平的表达情况;用流式细胞术检测转染miR-23a-3p模拟物/抑制剂、Gja1干扰慢病毒后卵巢颗粒细胞的凋亡情况。结果HE染色结果显示,大鼠卵巢囊注射miR-23a-3p模拟物后卵巢中的闭锁卵泡数量显著增高于模拟物对照组(P<0.05);双荧光素酶报告实验发现,转染miR-23a-3p模拟物组显著降低了荧光素酶活性(P<0.05);RT-PCR结果显示,转染miR-23a-3p模拟物后卵巢颗粒细胞中miR-23a-3p的表达显著增加,Gja1则显著降低(P<0.05),而转染miR-23a-3p抑制剂后对内源性miR-23a-3p和Gja1的表达无显著影响(P>0.05);用Gja1慢病毒干扰载体/对照载体分别转染大鼠卵巢颗粒细胞72 h后,RT-PCR和Western blot结果显示,Gja1干扰组Gja1在mRNA水平及蛋白水平均显著低于对照组(P<0.05);Western blot检测结果显示,转染miR-23a-3p模拟物后卵巢颗粒细胞中Gja1的表达显著降低(P<0.05);流式细胞术检测发现,转染miR-23a-3p模拟物后显著促进了卵巢颗粒细胞凋亡,下调Gja1后卵巢颗粒细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。结论miR-23a-3p通过调控靶基因Gja1参与调节大鼠卵泡闭锁及卵巢颗粒细胞的凋亡。
- 杨延周陈敏慧裴承斌
- 关键词：颗粒细胞缝隙连接蛋白43
- 小鼠卵巢玻璃化冻存中FSH干预对移植卵巢VEGF和VEGFR-2表达的影响被引量：1
- 2014年
- 目的通过在玻璃化冻存液中给予重组人促卵泡刺激素(rhFSH),观察冻存卵巢异体异位移植后VEGF和VEGFR-2表达的变化,探索卵巢玻璃化冻存中的FSH干预对移植卵巢血流重建相关因子的影响。方法对4周龄C57BL/6J小鼠卵巢进行异体肾被膜下移植,实验分为新鲜移植组(FCG)、单纯玻璃化冻存移植组(VCG)和0.3IU·mL-1FSH干预玻璃化冻存移植组(VG-FSH)。通过监测受体小鼠动情周期的变化、卵巢组织切片中正常卵泡百分比、移植后2、7、14、28d卵巢VEGF及其受体VEGFR-2的表达,判断FSH干预效果。结果 FSH干预冻存组的正常卵泡数、VEGF及VEGFR-2的表达均高于单纯玻璃化冻存组(P<0.05),且均低于新鲜移植组;FSH干预冻存组动情周期恢复所需时间明显低于冻存组(P<0.05),而明显长于新鲜移植组(P<0.05)。结论玻璃化冻存全程添加FSH干预,有利于冻存卵巢移植后的卵泡存活及功能恢复,可能与上调促血管生成的VEGF、VEGFR-2蛋白的表达有关。
- 颜贝单园园蒲静王燕蓉高玉婧张淑雅杨延周裴秀英
- 关键词：小鼠卵巢FSH玻璃化冻存VEGFVEGFR-2
- 小鼠卵巢玻璃化冻融过程中FSH联合S1P干预对血管内皮生长因子和缝隙连接蛋白表达的影响被引量：2
- 2020年
- 目的研究小鼠卵巢玻璃化冻融过程中重组人促卵泡刺激素(rhFSH)和1-磷酸鞘氨醇(S1P)联合干预对卵泡形态、血管内皮生成相关因子(VEGF)及其受体(VEGFR-2)、缝隙连接蛋白(CX43、CX37)表达的影响。方法将21日龄ICR雌性小鼠卵巢分为新鲜组、冻存组、0.3 IU·mL^-1FSH干预玻璃化冻融组、2μmol·L^-1S1P干预玻璃化冻融组、不同浓度FSH(0.3、1、0.5、0.2、0.1 IU·mL^-1)+2μmol·L^-1S1P干预玻璃化冻融组、不同浓度S1P(4、10、20、40μmol·L^-1)+0.3 IU·mL-1FSH干预玻璃化冻融组。通过TUNEL检测冻融卵巢的卵巢凋亡率、形态学卵泡计数分析各组正常卵泡百分比及免疫组织化学法观察卵巢组织VEGF、VEGFR-2、CX43、CX37蛋白表达情况。结果除0.1 IU·mL^-1FSH+2μmol·L^-1 S1P组及0.3 IU·mL^-1 FSH+4、10μmol·L^-1S1P组,各组闭锁卵泡数均低于冻存组(P均<0.05);添加FSH及S1P后各组卵巢凋亡率均低于冻存组(P均<0.05);除0.5、0.1 IU·mL^-1 FSH+2μmol·L^-1S1P组及0.3 IU·mL^-1FSH+40μmol·L^-1SIP组,各组VEGF表达均高于冻存组(P均<0.05);2μmol·L^-1S1P组及0.3 IU·mL^-1FSH+10、40μmol·L^-1SIP组VEGFR-2表达均高于冻存组(P均<0.05);0.3、0.5、0.2 IU·mL^-1FSH+2μmol·L^-1S1P组及0.3 IU·mL^-1FSH+4、20μmol·L^-1S1P组CX43蛋白表达均高于冻存组(P均<0.05);除0.3 IU·mL^-1FSH+40μmol·L^-1SIP组,各组CX37表达均高于冻存组(P均<0.05)。联合干预结果显示1IU·mL^-1FSH、0.1 IU·mL^-1FSH及40μmol·L^-1SIP不能维护较好的卵泡结果及相关蛋白的表达。结论玻璃化冻存过程FSH联合S1P的干预可抑制卵泡闭锁,但过高的FSH及S1P导致卵泡激活成熟;0.3 IU·mL^-1FSH与2μmol·L^-1S1P干预可维持较高数目的原始卵泡池,该作用与提高VEGF、VEGFR-2、CX43及CX37蛋白表达有关。
- 田媛杨延周秦天俞晓丽王燕蓉裴秀英
- 关键词：促卵泡刺激素1-磷酸鞘氨醇
- 小鼠卵巢玻璃化冻融过程中FSH干预对血管生成相关因子表达的影响被引量：2
- 2015年
- 目的在小鼠卵巢玻璃化冻融过程中给予重组人卵泡雌激素(r FSH)干预,通过观察其对卵泡刺激素受体(follicle-stimulating hormone receptor,FSH-R)及与血管生成相关的Integrinαvβ3、Angpt-2、Kindlin-2蛋白表达的影响,提供FSH干预对卵巢血管生成相关因子影响的依据。方法将4周龄C57BL/6J小鼠卵巢随机分为新鲜对照组(FCG)、玻璃化冻存对照组(VCG)、0.3IU·m L-1FSH干预玻璃化冻存组(FSH-VG)。对3组卵巢内各级卵泡进行计数;通过免疫组化方法观察并分析各组FSH-R、Angpt-2、Kindlin-2在卵巢不同细胞中的定位;观察粘附分子Integrinαvβ3在各组卵巢细胞中表达,并进行亚基表达量的分析。结果FSH-VG组的原始卵泡、初级卵泡、正常卵泡及总卵泡数均高于VCG组,但低于FCG组(P均<0.05),闭锁卵泡数VCG组高于FCG及FSH-VG组(P均<0.05);FSH-R与Angpt-2阳性表达呈现FSH-VG与VCG组均低于FCG组(P<0.05),但FSH-VG组高于VCG组(P<0.05);Kindlin-2阳性表达在FSH-VG组与FCG组之间差异无统计学意义(P>0.05),但均高于VCG组(P<0.01或<0.05);Integrinβ3蛋白表达量FCG与FSH-VG组间差异无统计学意义(P>0.05),但均高于VCG组(P<0.05),Integrinαv的表达3组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论玻璃化冻融过程中添加FSH可以上调FSH-R及粗血管生成的相关因子Integrinβ3、Angpt-2和Kindlin-2蛋白的表达,提高正常卵泡数。
- 张红马文叶杨延周裴秀英常青马会明马文智孙苗于佳蔡玉芳王红燕黑常春赵承军孔斌王燕蓉
- 关键词：小鼠卵巢RFSH玻璃化冻存ΑVΒ3
- 烷化剂联合应用建立小鼠卵巢早衰模型的初步研究被引量：6
- 2013年
- 目的探索烷化剂联合应用在构建小鼠卵巢早衰(POF)模型的作用及效果。方法以6～7周龄ICR雌性小鼠为研究对象,造模组(MG)为一次性腹腔注射150 mg·kg-1的环磷酰胺和20 mg·kg-1的白消安,对照组(CG)为同体积溶媒DMSO腹腔注射。通过检测小鼠动情周期、血清FSH和E2水平、早期发育卵泡数的变化及抗苗勒管激素(AMH)和生长分化因子9(GDF9)表达水平变化,以判断造模效果。结果 MG组小鼠动情周期紊乱,POF造模成功率为37.5%,造模60 d后与同期对照组比较模型组小鼠血清FSH显著升高(P<0.05),早期发育卵泡数明显减少(P<0.05),卵巢组织AMH表达减少。结论 150 mg·kg-1的环磷酰胺和20 mg·kg-1的白消安一次性腹腔注射后可引起小鼠卵巢内分泌功能紊乱和卵巢组织的明显损伤,导致卵巢早衰。
- 孙苗于佳马文智马会明杨延周蒲静曹秀琴张宁裴秀英王燕蓉
- 关键词：环磷酰胺白消安卵巢早衰小鼠模型
- 妇科养荣胶囊改善化疗所致小鼠卵巢功能损伤的效果被引量：3
- 2016年
- 目的:观察妇科养荣胶囊(Fu Ke Yang Rong capsule,FKYRC)对卵巢损伤小鼠卵巢储备功能和生育力的保护作用。方法:通过成年雌性小鼠一次性腹腔注射120 mg/kg环磷酰胺和10 mg/kg白消安建立卵巢损伤小鼠模型,于造模前7 d至造模后60 d每日对卵巢损伤小鼠用高、中、低剂量(6 g/kg、4 g/kg和2 g/kg)FKYRC(H组、M组、L组)连续灌胃给药;同时,于造模前7 d一次性皮下注射给予Gn RHa(38 mg/kg)作为阳性对照组(Gn RHa组),用生理盐水(0.2 m L/d)代替FKYRC连续灌胃作为卵巢损伤对照组(模型组),另设正常对照组:非卵巢损伤正常小鼠腹腔注射给予等体积DMSO(NC组)。分别于造模后30 d和60 d取材,计数卵巢组织中各级卵泡数量,检测血清E2、FSH、抑制素B(INHB)和抗苗勒氏管激素(AMH)水平,检测卵巢组织中翼状螺旋/叉头转录因子2(FOXL2)和AMH蛋白的表达水平。并观察造模60 d后各组妊娠率和窝仔数。结果:各给药组和模型组小鼠血清E2低于NC组(P<0.05),但FSH水平组间无统计学差异(P>0.05)。造模各组卵泡数明显低于NC组(P<0.05),且H组和Gn RHa组造模后60 d时卵巢组织中窦前卵泡与窦卵泡数较高,但各干预组与模型组比较无统计学差异(P>0.05)。模型组小鼠卵巢组织中FOXL2和AMH蛋白表达水平显著低于各FKYRC干预组(P<0.05),H组的妊娠率(80.00%)显著高于模型组(36.36%)(P<0.05)。结论:连续FKYRC(6 g/kg)给药60 d后可明显改善烷化剂所致卵巢损伤小鼠的卵巢储备功能和生育能力,其机制可能与上调颗粒细胞中FOXL2和AMH的表达水平相关。
- 蒲静杨延周谢人明马会明马文智常青孙苗于佳王燕蓉裴秀英
- 鞘氨醇-1-磷酸干预对小鼠玻璃化冻融卵巢移植后凋亡的影响被引量：3
- 2021年
- 目的探讨鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate,S1P)干预对小鼠玻璃化冻融卵巢移植后卵泡形态和凋亡的影响。方法取21日龄ICR雌性小鼠卵巢分为新鲜对照组、冻存对照组和2μmol·L-1 S1P干预组,新鲜卵巢及两组冻存卵巢解冻后移植于6~8周龄ICR雌性去势小鼠肾被膜下2 d、14 d后,通过HE染色观察移植后卵巢的卵泡形态,TUNEL检测移植后卵巢的凋亡率;实时荧光定量PCR检测卵巢移植后Caspase3、Bax、Bcl-2的基因表达情况。结果移植2 d和14 d后,与新鲜对照组相比,冻存对照组和S1P干预组卵泡形态的完整性较差,闭锁卵泡多,正常卵泡明显减少,卵泡凋亡率较高(P均<0.05)。与冻存对照组相比,S1P干预组卵泡形态较完整,闭锁较少,卵泡发育良好,原始卵泡较多,卵泡凋亡率降低(P均<0.05),促凋亡基因Bax和凋亡基因Caspase3表达降低(P均<0.05);抗凋亡基因Bcl-2表达增高(P<0.05)。结论小鼠玻璃化冻融卵巢移植后S1P的干预可维持较好的卵泡发育,抑制卵泡闭锁,降低移植后卵巢凋亡,抵抗玻璃化冷冻移植对卵巢的损伤。
- 秦天田媛杨延周杨延周张淑雅王燕蓉
- 关键词：凋亡
- ROCK抑制剂在促进卵母细胞基因Bmp15和Gdf9表达量上调中的应用
- 本发明公开了一种ROCK抑制剂在促进卵母细胞基因Bmp15和Gdf9表达量上调中的应用。其中，ROCK抑制剂Y27632可促进卵母细胞特异性基因Bmp15和Gdf9表达量上调，促进卵泡细胞增殖发育。本申请采用了无血清培养...
- 裴秀英俞晓丽张樱馨王燕蓉常青马会明杨延周马文智付旭锋何瑞蒲静刘心蕊邱意开张彦平
- 文献传递
- 小鼠动情周期卵巢、子宫及输卵管中氧化应激水平及意义
- 2021年
- 目的探讨小鼠动情周期不同阶段氧化应激(OS)的变化规律及对雌性生殖的作用。方法应用ELISA方法检测动情周期各阶段血清中的丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)及超氧化物歧化酶(SOD),应用免疫组化方法检测DNA修复蛋白8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1(OGG1)及超氧化物歧化酶1(SOD1)在动情周期各阶段输卵管和子宫角中的表达定位,实时荧光定量(PCR)及Western blot检测动情周期各阶段卵巢和子宫角中的OGG1及SOD1基因及蛋白表达水平。结果ELISA结果显示,动情期血清MDA和8-OHdG高于间情期、动情后期及动情前期(P均<0.05),动情前期血清GSH高于动情期、动情后期及间情期(P均<0.05),但是血清总SOD水平在动情周期四个阶段间差异无统计学意义(P均>0.05);PCR和Western blot结果显示,动情期卵巢和子宫角中的SOD1和OGG1 mRNA和蛋白水平低于间情期(P均<0.05),而免疫组化结果显示:OGG1和SOD1蛋白主要定位于子宫内膜腔上皮和腺上皮细胞,定位于输卵管上皮细胞,且SOD1和OGG1在动情期的输卵管中高表达。结论动情周期中OS水平的动态变化提示OS可能参与雌性生殖,特别是排卵、受精过程,且与动情周期雌孕激素的变化密切相关。
- 杨延周陈敏慧李可可
- 关键词：氧化应激活性氧动情周期卵巢子宫输卵管
