李胜富
- 作品数：185 被引量：980H指数：16
- 供职机构：四川大学华西医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 中国钩端螺旋体强毒株017膜蛋白基因的质粒载体构建及表达被引量：5
- 1999年
- 目的构建表达我国钩体强毒赖型０１７株外膜蛋白的重组质粒。方法用ＰＣＲ方法扩增并回收０１７株钩体外膜蛋白基因片段ＯｍｐＬ１，将其与质粒ｐＢＫ－ＣＭＶ重组，通过菌落颜色和酶谱分析筛选出重组质粒。然后从该重组质粒切下ＯｍｐＬ１基因片段，重新克隆至质粒ｐＢＶ２２０中，酶谱分析和ＤＮＡ杂交鉴定出正向重组质粒。将含有正向重组质粒的宿主菌诱导表达生长后，提取全菌总蛋白进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析。结果筛选出４个与ｐＢＶ２２０正向重组的质粒，其中一株带重组质粒ｐＢＬＭ１的菌株表达了一相对分子质量为３３．５×１０３的新蛋白。结论重组质粒ｐＢＬＭ１的构建和表达成功说明扩增得的ＯｍｐＬ１基因具有完整的阅读框架，并使简便获得大量天然的０１７株钩体ＯｍｐＬ１蛋白成为可能。
- 晏菊芳鲍朗伍卫华万波李胜富
- 关键词：钩端螺旋体属重组质粒
- 免疫荧光检测p53与线粒体共定位的实验方法探索
- 2020年
- 目的探索研究p53与线粒体共定位的最佳免疫荧光条件,为检测蛋白质与线粒体共定位的研究提供参考。方法低氧处理HeLa细胞,免疫印迹检测p53表达;分别使用甲醇固定HeLa细胞、甲醇:丙酮混合液(体积比1∶1)固定HeLa细胞、4%多聚甲醛固定HeLa细胞,前二者不作通透处理,后者用0.1%聚乙二醇辛基苯基醚(Triton-X 100)通透,同时染色p53和线粒体;用4%多聚甲醛固定HeLa细胞后,降低Triton-X 100浓度至0.05%、0.025%、0.01%和0.005%,同时染色p53和线粒体;用4%多聚甲醛固定HeLa细胞后,Triton-X 100浓度降至0.01%和0.005%,通透标记p53后再次使用0.1%Triton-X 100重新通透细胞器膜染色线粒体。结果低氧后p53表达上调(P<0.01),可用于后续免疫荧光实验。使用甲醇和混合液固定组均可同时在细胞核及细胞质内观察到明显的p53信号,并可观测到其与线粒体的共定位,混合液组共定位更明显。多聚甲醛固定组用0.1%Triton-X 100通透后p53信号主要在细胞核内,未能观察到共定位;使用4%多聚甲醛固定后,降低Triton-X 100浓度至0.05%和0.025%在一定程度上削弱p53核内信号,增强共定位信号,但细胞核内信号仍强于细胞质,当降低至0.01%和0.005%,细胞质内检测到p53信号,细胞核内未检测到p53信号,提示此条件下核膜未被通透,但同样也未能通透线粒体膜,导致线粒体标记失败;二次通透完全规避p53核内信号,并成功标记线粒体,检测到p53与线粒体的共定位。结论使用甲醇或混合液固定可观察到p53与线粒体共定位,其中混合液效果更佳;使用4%多聚甲醛固定结合2次通透可有效避免核内信号,检测到p53和线粒体的共定位。
- 龙丹冯莉陈雪璐李胜富周彦妮
- 关键词：P53线粒体共定位免疫荧光
- 脑源性神经营养因子基因转染培养肌母细胞的表达被引量：1
- 2001年
- 目的 了解含脑源性神经营养因子 (BDNF)基因的表达质粒PSVCEPBDNF CAT在培养肌母细胞中的表达情况及LipofectAMINE阳离子脂质体介导的转染效率。 方法 按每 2 μg表达质粒PSVCEPBDNF CAT由 2 0 μlLipofectAMINE包裹后转染至细胞浓度为 2× 1 0 8个 /L的3 .5cm培养皿培养的肌母细胞中 ,连续观察细胞形态 ,48h后用免疫细胞化学和免疫电镜的方法来检测其表达情况。结果 培养肌母细胞在转染 6h吞噬脂质体最显著 ,转染 48h后 ,40 %的肌母细胞胞质内有BDNF基因表达 ,免疫电镜结果证实表达在细胞质近胞膜处。结论 含BDNF微基因的表达质粒PSVCEPBDNF CAT可以在培养肌母细胞中表达 ,脂质体转染的方法简便、有效。
- 刘艳辉毛伯镛陈俊杰王若菡高立达程永忠张杰李胜富
- 关键词：脑源性神经营养因子基因转染免疫细胞化学BDNF
- 周围神经组织工程材料的预构被引量：59
- 2000年
- 目的 研究具有雪旺细胞 (SC)活性的组织工程周围神经修复材料的构建方法。方法 1采用干 /湿相转化纺丝法 ,将分子量为 730 k D的聚乳酸 (PL A)制成外径为 2 .3m m、内径为 1.9m m、壁厚 0 .4mm、长4cm、孔隙率为 70 %、孔径为 2 0～ 40 μm的中空纤维管和孔径为 10 0～ 2 0 0 μm、孔隙率为 85 %的 PL A无纺纤维布。2将 SC置入细胞外基质 (ECM)凝胶中 ,观察 SC在 ECM凝胶中的生长。 3SC/ ECM悬液浸入 PL A无纺纤维布中 ,观察 SC在 PL A支架材料中的生长。 4将 SC、SC/ ECM和 SC/ ECM/ PL A置入 PL A中空纤维管中 ,桥接大鼠坐骨神经长 10 mm缺损 ,观察 SC移植后存活情况。结果 1SC在 ECM凝胶中 ,细胞生长良好 ,1天后开始有细胞伸出两极 ,形态开始展开 ,3天后几乎全部细胞恢复成双极梭形状细胞 ,并开始分裂、增殖 ,直到 14天后随着凝胶的溃解 ,SC开始死亡 ,降解成碎片 ;当 ECM凝胶溃解后 ,加入 DMEM培养基 ,SC游出 ,贴壁生长。2 SC/ ECM悬液浸入 PL A无纺纤维布后 ,大部分细胞随 ECM凝胶状态的形成 ,滞留于 PL A纤维网孔中 ,1天后开始伸出两极 ,3天后可见网孔中大量双极梭形细胞 ,部分细胞沿着纤维生长 ,仅少数细胞脱落于培养瓶底贴壁生长。 3SC移植术后2 1天 ,Brd U免疫组织化学染色发现大量
- 王光林杨志明解慧琪王翠莹李胜富
- 关键词：雪旺细胞周围神经缺损
- 成年兔关节软骨创伤模型中软骨细胞的分离及体外培养观察被引量：5
- 2007年
- 目的：观察成年兔关节软骨损伤模型中能获得的关节软骨和软骨细胞数量，探讨不同浓度的Ⅱ型胶原酶在不同时间段分离软骨细胞的能力及体外培养所获得的软骨细胞的生物学活性。方法：建立成年兔关节软骨损伤模型，用0.1％-0．2％Ⅱ型胶原酶消化4小时，每小时收集消化下来的兔膝关节软骨细胞，计数细胞收获率和细胞存活率。体外培养原代及传代细胞，观察细胞形态和生长规律，绘制生长曲线，榆测细胞合成Ⅰ、Ⅱ型胶原、蛋白多糖能力。结果：成年兔膝关节软骨细胞的收获率平均为3603．6×10^4个／克，细胞存活率平均为97．3％，胶原酶浓度与细胞的获取率无显著关系，但与细胞的存活率相关，在消化时间超过3h后细胞的存活率显著降低，在培养过程中出现易老化现象，原代细胞贴壁时间为48—72h，甲苯胺蓝异染反应较强，Ⅱ型胶原免疫组化染色反应呈强阳性，Ⅰ型胶原免疫组化染色为阴性，传3代细胞形态由卵圆形、多角形变为梭形，甲苯胺蓝染色异染反应较弱，免疫组化工型胶原为强阳性而Ⅱ型胶原表达极弱。结论：0．1～0．2％Ⅱ型胶原酶消化、分批收取细胞具有较高的细胞收获率和存活率，体外培养时，从创伤后关节软骨中获得的原代细胞和1代细胞具有良好的软骨表型，第3代及以后的细胞生物学活性低下。
- 郝鹏李胜富裴福兴龙丹
- 关键词：软骨细胞胶原酶成年兔
- 版纳猪骨髓间充质干细胞体外培养最佳条件探索被引量：1
- 2006年
- 目的探索近交系版纳微型猪(BannaMinipigInbred-line,BMI)骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSC)的最佳培养温度及血清种类。方法原代培养和永生化两种BMI-MSC细胞,96孔板中选用胎牛、猪、小牛三种不同血清;于37℃,38℃,39℃,40℃四种不同温度下进行培养,测定生长曲线。最终根据生长曲线确定最佳培养条件。结果10%胎牛血清较猪血清和小牛血清条件下生长速度快,差异具有统计学意义;37℃、38℃、39℃、40℃四个不同温度条件下生长速度无明显差异,差异不具有统计学意义。结论10%胎牛血清为BMI-MSC的最佳培养血清;37℃、38℃、39℃、40℃四个不同温度均适宜BMI-MSC细胞的生长。
- 王兰刘瑾陆燕蓉李胜富曾养志程惊秋
- 关键词：版纳微型猪骨髓间充质干细胞
- HIF-3α在线粒体的表达及意义
- 2019年
- 目的探究低氧诱导因子-3α(HIF-3α)定位至线粒体的现象及其生理、病理意义。方法①低氧(1%O2)或脯氨酸羟化酶抑制剂——二甲基乙二酰甘氨酸(DMOG)、氯化钴(CoCl2)模拟低氧处理人宫颈癌细胞系HeLa和人肾癌细胞系ACHN后,蛋白质免疫印迹(Western blot)和免疫荧光(IF)检测HIF-3α在细胞中的分布及其在线粒体中的表达;②通过酶敏感实验观察HIF-3α的线粒体亚结构定位;③采用Western blot检测HIF-3α在正常小鼠不同器官组织、人肝癌组织线粒体中的表达情况。结果①在检测的2种细胞系(HeLa和ACHN细胞)中,HIF-3α在常氧及缺氧条件下均可定位至线粒体,且缺氧组HIF-3α在线粒体中的表达高于常氧组;②HIF-3α的消化模式与线粒体外膜蛋白一致;③HIF-3α在小鼠多种器官组织中均可定位线粒体,HIF-3α在人肝癌组织线粒体中的表达高于正常及癌旁组织。结论 HIF-3α在常氧及缺氧条件下均可定位至线粒体外膜,低氧可促进其线粒体定位;该现象可能与肝癌的发生发展相关。
- 李露周彦妮李胜富龙丹李鸿生冯莉李幼平
- 关键词：线粒体低氧常氧
- 京尼平交联猪小肠黏膜下层的制备及评价
- 目的：猪小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)已成功应用于多种组织器官的损伤修复,但由于SIS主要由胶原蛋白构成,在酸性及酶解环境中易降解,因此限制了其在消化道黏膜修复中的应用.本研...
- 王昱龚梅陈曦李胜富解慧琪
- 大鼠脑微血管内皮细胞的分离、培养及不同纯化方法的比较被引量：15
- 2010年
- 目的对脑微血管内皮细胞分离、培养方法进行探索性研究,并对目前常用的纯化方法进行比较。方法首先采用两次酶消化、两次梯度离心法对大鼠脑血管内皮原代细胞进行分离,然后分别采用免疫磁珠和Thy1.1抗体杀伤法分别进行纯化。结果采用两次酶消化、两次梯度离心法可以成功分离到脑微血管内皮细胞,磁珠纯化法可得到纯度高但是数量较少的细胞,Thy1.1抗体杀伤法可得到纯度及得率均较高的内皮细胞。结论我们所摸索的方法能成功进行纯度较高的大鼠脑微血管内皮细胞原代培养。
- 田林郁李胜富周东
- 关键词：脑微血管内皮细胞原代细胞
- 兔骨髓间充质干细胞定向诱导分化为脂肪细胞及成骨细胞的研究被引量：16
- 2003年
- 用密度梯度离心和贴壁法分离和纯化兔骨髓间充干细胞 ,建立诱导兔 MSCs向脂肪细胞及成骨细胞表型转化的方法及条件。在成脂诱导剂或成骨诱导剂作用下 ,对原代和第 2代兔 MSCs进行成脂和成骨诱导培养 ,并鉴定成脂及成骨表型。结果表明 :原代及第 2代兔 MSCs均有一定的成脂、成骨能力 ,且第 2代细胞的分化能力较原代低。在诱导培养条件下 ,原代及第 2代兔 MSCs均能分化 ,成脂诱导 2 1d,75 %的兔 MSCs转化为脂肪细胞 ;成骨诱导 2 1d,75 %的兔 MSCs转化为成骨细胞。兔
- 李胜富黄定强卢晓风刘瑾孙明菡李幼平程惊秋步宏梁传余
- 关键词：骨髓间充质干细胞细胞分化脂肪细胞成骨细胞
