李晓进
- 作品数：6 被引量：28H指数：3
- 供职机构：兰州生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：甘肃省中青年科技研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组抗狂犬病病毒抗体在HEK293 EBNA1细胞中的瞬时表达优化被引量：4
- 2015年
- 目的:优化重组抗体在悬浮无血清培养的HEK293 EBNA1瞬时表达,提高重组抗体表达量。方法:将HEK293 EBNA1细胞适应于无血清悬浮培养,筛选适宜的无血清培养基。使用PEI转染质粒进入细胞,瞬时表达重组抗体;使用Modde软件进行实验设计(DOE),优化转染质粒量、轻重链比例、PEI量等影响瞬时表达的条件。培养上清经亲和纯化,获得目标抗体,用快速免疫荧光灶抑制试验(RFFIT)测定抗体活性,用BCA法测定纯化抗体浓度。结果:293SFMII为适宜的HEK293 EBNA1细胞无血清悬浮培养基。对抗体表达影响最大的因素是轻重链比例(P=0.00000),其次为质粒浓度(P=0.00086),最后为PEI(P=0.00257)。优化的转染条件为:质粒用量0.61μg/106细胞,轻重链比例2:1,PEI 2.67μg/106细胞,优化后抗体表达量有显著提高(P=0.007)。结论:通过DOE优化获得了重组抗狂犬病病毒抗体的高水平表达,抗体表达量提高了至少50倍。
- 陈继军秦海艳安晨乔玉玲李晓进毛晓燕
- 关键词：HEK293EBNA1
- 应用双抗体夹心ELISA法定量检测人源破伤风毒素单克隆抗体中的IgG含量被引量：1
- 2003年
- 采用山羊抗人IgG作为包被抗体 ,辣根过氧化物酶标记的山羊抗人IgG作为标记抗体 ,建立一种双抗体夹心法用于定量检测人源破伤风毒素单克隆抗体的IgG含量。以纯化的IgG作标准 ,用平行线法测得亲和层析纯化的人源破伤风毒素单克隆抗体G2的含量为 0 .5 12 μg/ml,与分光光度法测得的结果基本一致。因而样品检测采用纯化G2作参考标准 ,制作标准曲线 ,测定了已知样品和未知样品的抗体含量。结果表明本法重复性好 ,特异性强 。
- 赵红桥爪秀一王棣李晓进龟井优德林卫王亚男马瑞
- 关键词：双抗体夹心ELISA法
- 不同色谱介质纯化人源破伤风毒素单克隆抗体的比较
- 从一株人源破伤风毒素单克隆抗体的培养上清中纯化抗体,对三种纯化方法的结果进行了比较.结果表明培养上清直接经一次亲和层析,纯度可达85﹪-90﹪,收率达82.5﹪-90﹪而经过两步离子交换层析后,纯化的单克隆抗体的纯度为8...
- 赵红王棣李晓进熊颖
- 关键词：破伤风毒素单克隆抗体亲和层析法
- 文献传递
- 单链抗体的研究进展被引量：18
- 2011年
- 单链抗体即单链抗体可变区片段(single-chain antibody variable fragment,or ScFv)是由抗体重链可变区和轻链可变区通过一段10-25个氨基酸的连接肽连接而成,其分子质量小,穿透力强,特异性好,免疫原性低,在免疫学和医学方面得到了广泛应用。本文就单链抗体的结构设计、展示系统、表达和应用方面做一综述。
- 秦海艳毛晓燕乔玉玲李晓进赵红
- 关键词：单链抗体
- 人源抗破伤风毒素单链抗体(ScFv)的原核表达、纯化及功能鉴定被引量：2
- 2009年
- 实验通过DNA重组技术从一株可中和破伤风毒素的人源单克隆抗体细胞(G6)中扩增出了抗体VH、VL的基因,通过重叠PCR使连接片段与VH、VL连接成单链ScFv。经测序证实VH、VL为抗体的可变区序列,命名为ScFv-G6。将ScFv-G6连接转化PET/26b质粒,构建了抗体的表达载体,被命名为PET/26b/ScFv-G6。以该载体在大肠杆菌中分泌表达产物经Ni-亲和柱纯化后的小鼠试验证实,可抵抗破伤风毒素的攻击,表明为中和抗体。具有组织穿透力强,不易过敏,可直接靶向于毒素等特点,适合于破伤风的防治,具有重要的应用价值。
- 熊颖李晓进乔玉玲毛晓燕龟井优德赵红
- 关键词：单链抗体原核表达中和活性
- 人源抗破伤风毒素单克隆抗体的中和活性和预防治疗作用被引量：3
- 2003年
- 目的 考察人源抗破伤风毒素单克隆抗体的中和活性及体内预防治疗作用。方法 对分泌人源抗破伤风毒素单克隆抗体(人源单抗)的两株细胞进行培养,并对其抗体进行纯化及检定。结果 人源单抗在小鼠体外具有中和活性。较高的剂量可完全中和毒素,延长小鼠生存时间。不同的人源单抗中和活性不同。单抗在小鼠攻毒实验中均具有一定的预防和治疗作用。结论 人源单抗可用于破伤风感染的预防治疗。
- 赵红王棣李晓进桥爪秀一龟井优德
- 关键词：人源单克隆抗体破伤风毒素中和活性
