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李健: 作品数：181 被引量：699H指数：13; 供职机构：广西农业职业技术学院更多>>; 发文基金：国家质检总局科技计划项目国家高技术研究发展计划广西壮族自治区自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>

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入境黄鳝颚口线虫检疫及虫种鉴定被引量：11: 2011年; 目的检查进口黄鳝（Monopterus albus）体内的颚口线虫Ⅲ期幼虫,并鉴定虫种。方法对2010年1月至2011年3月间从上海口岸入境的10批黄鳝进行颚口线虫寄生情况检疫。采样52尾,3-10尾/批,分别来自菲律宾（25尾）、印度尼西亚（24尾）和孟加拉国（3尾）,分尾解剖、切碎、蛋白酶消化后,悬液用10目铜筛过滤,取滤液沉淀。体视镜下挑出完整虫体,进行形态学鉴定,并计算感染率和感染度。提取颚口线虫基因组DNA,PCR扩增核糖体DNA第二内转录间隔区（internal transcribed spacer region 2,ITS2）和线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ（cytochromec oxidase subunit 1,cox1）基因,对产物进行电泳和测序。测序结果与GenBank相应序列进行多重序列比对。结果从菲律宾和印度尼西亚进口的黄鳝中均检出有颚口线虫Ⅲ期幼虫寄生,阳性率分别为36.0%（9/25）和50.0%（12/24）,平均感染度分别为7.8（70/9）和2.8（34/12）。孟加拉国进口的黄鳝采样中未检出虫体。镜下显示,检获的虫体有头球,头球上有4环小钩,体表有横纹和小棘,体前部棘明显大而密,体后部棘渐小而疏。有1对颈乳突和4个颈囊。形态学特征与棘颚口线虫（Gnathostoma spinigerum）Ⅲ期幼虫相似。PCR结果显示,ITS-2和cox1扩增产物的长度分别为647 bp和441 bp,与预期大小一致。经测序后比对分析结果显示,2个扩增产物分别与棘颚口线虫ITS-2（GenBank登录号为AB181155和Z97175）和cox1（GenBank登录号为AY501388、AB180099和AB551552）基因片段序列一致性为99%~100%。结论从菲律宾和印度尼西亚进口黄鳝中检出的颚口线虫均为棘颚口线虫。; 李树清李雯雯陈志飞李健陈韶红张永年黄维义王巧全; 关键词：棘颚口线虫黄鳝虫种鉴定

罗非鱼源Ia和Ib血清型无乳链球菌可溶性蛋白差异分析被引量：1: 2015年; 前期研究表明,罗非鱼Oreochromis niloticus Ia和Ib血清型无乳链球菌Streptococcus agalactiae疫苗之间缺乏交叉保护力,为了从蛋白分子水平探讨其免疫原性差异的原因,在提取罗非鱼Ia和Ib血清型无乳链球菌可溶性蛋白后应用二维差异凝胶电泳(two dimension-Difference Gel Electrophoresis,2D-DIGE)分析其表达差异蛋白点,应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定这些差异蛋白,并使用DAVID生物学数据库预测经鉴定后获得的蛋白功能。结果表明:在2D-DIGE电泳上,Ia和Ib两种不同血清型无乳链球菌具有167个表达差异蛋白点,对这些蛋白点进行质谱分析获得32种蛋白,这些蛋白主要与氧化还原反应、代谢与能量前体物产生、糖代谢反应等生物学过程有关,主要参与糖解和糖异生作用、丙酮酸代谢与脂肪酸生物合成等通路;对蛋白功能的预测表明,GAPGH、半胱氨酸合成酶和锰依赖性锰超氧化物歧化酶的功能与免疫和疫苗研发相关。本研究首次证实,罗非鱼Ia和Ib血清型无乳链球菌存在较多的表达差异蛋白,部分表达差异蛋白的功能与免疫和疫苗研发相关,这可能与链球菌免疫原性有直接关系,但需要进一步地研究和证实。; 石云良李莉萍王瑞梁万文甘西黄婷李健黄维义陈明; 关键词：罗非鱼无乳链球菌可溶性蛋白

小鼠肝炎病毒核酸快速检测方法的建立和应用被引量：11: 2013年; 为满足口岸对入境噬齿类动物快速检疫的需要,建立小鼠肝炎病毒(Mouse hepatitis virus,MHV)快速核酸检测方法。方法使用引物和TaqMan荧光探针设计软件,针对MHV保守基因设计引物和探针,建立了RT-PCR和Real-time RT-PCR方法检测噬齿类动物临床样本中MHV的方法。结果本研究建立的RT-PCR和Real-time RTPCR检测MHV方法具有良好的特异性和敏感性,通过将建立的方法应用于MHV阳性鼠临床样品的检测,证实两种MHV核酸检测方法具有良好的稳定性。结论本研究建立的RT-PCR和Real-time RT-PCR检测MHV的方法,适用于动物粪便、尿液等易于获得样本的检测。; 熊炜蒋静张强刘俊平魏晓锋黄忠荣李健胡建华; 关键词：小鼠肝炎病毒 RT-PCR REAL-TIME RT-PCR

猫冠状病毒和猫传染性腹膜炎病毒RT-PCR检测方法的建立被引量：12: 2006年; 本文利用A-72细胞繁殖猫冠状病毒(FCV)和猫传染性腹膜炎病毒(FIPV),用蔗糖密度梯度离心纯化,根据病毒S基因序列设计引物,初步建立了检测FCV和FIPV的RT-PCR方法。采用此方法对人工攻毒猫组织进行检测,结果特异灵敏。; 李健陈沁王权张建武胡永强

日本血吸虫表皮生长因子受体基因的鉴定和功能研究: 2020年; 目的鉴定日本血吸虫表皮生长因子受体基因(SjEGFR),并阐明其在日本血吸虫生长和生殖发育中的作用。方法通过5’-RACE和3’-RACE扩增、测序获取SjEGFR基因全长片段。采用荧光定量PCR(qPCR)技术检测该基因在日本血吸虫不同发育阶段(16、18、20、22、24、26 d)表达情况。使用整条虫体原位杂交法对感染24 d的日本血吸虫雌、雄虫SjEGFR基因转录本进行定位。通过体内持续RNA干扰(RNAi)技术特异性敲低SjEGFR基因,待虫体发育至30 d收集虫体。统计分析雌、雄虫回收数量以及虫体长度,通过明矾卡红染色观察虫体生长发育情况。结果首次鉴定了SjEGFR基因,其结构具有一个保守的酪氨酸激酶位点。整条虫体原位杂交定位显示该基因转录本在虫体各处均有表达,在雌、雄虫肠道部位呈现出明显着色的高表达。体内RNAi显示,SjEGFR基因表达被特异性敲低后,雌、雄虫生长受阻。RNAi组雌虫子宫内无虫卵,肠道内无色素沉积、卵黄腺发育迟滞、卵巢发育受阻;雄虫呈现睾丸个数减少、体积变小,出现了更多未成熟的精母细胞。结论特异性敲低SjEGFR基因表达可影响日本血吸虫生长和生殖发育,阻滞虫卵产生。; 相慢玉李健罗芳孙成松朱炳宽王吉鹏莫筱瑾张颋徐斌冯正胡薇; 关键词：日本血吸虫表皮生长因子受体生殖

口蹄疫病毒RT-LAMP检测方法的建立被引量：28: 2009年; 利用逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP),建立了口蹄疫病毒快速检测方法,同时评价了该方法的灵敏性和特异性。结果表明,根据口蹄疫病毒多聚蛋白基因保守区段设计的LAMP引物能够在65℃下,1 h内实现目标核酸区段的大量扩增,检测结果可直接用肉眼判断。该检测体系具有极高的特异性,只能检测到目标病毒,与其他类似病毒如猪水泡病病毒、猪瘟病毒、猪细小病毒等无交叉反应,可检测到10-5稀释度的目标病毒核酸量,比普通RT-PCR的灵敏性高100倍,比荧光PCR高10倍。; 李健陈沁熊炜方雪恩; 关键词：口蹄疫病毒

汉、英语作为第二语言教学比较论——以任务型教学法为例: 任务型教学法是以英语作为第二语言教学研究对象的一种外国交际语言教学方法的新探索,近些年来逐渐被引进我国,是一种全新的并且被提倡的教学方法。本文对任务型教学法的定义、课堂教学发展现状,任务型教学大纲等进行了简要介绍,将视角...; 李健; 关键词：任务型教学法汉语英语第二语言教学; 文献传递

副猪嗜血杆菌病的病理组织学观察被引量：4: 2009年; 本实验将具有典型副猪嗜血杆菌病症状猪的组织器官通过石蜡切片技术制作成病理组织切片,观察副猪嗜血杆菌病的病理组织变化特征,为临床诊断该病提供诊断依据。结果表明:患有副猪嗜血杆菌病的病猪剖检可见肝脏、脾脏、肺脏表面和心包的壁层、脏层有纤维素性渗出物。肝脏表面、脾脏和肺泡腔有数量不等的炎性渗出物。肺泡间隔增宽,显微镜观察发现心肌纤维断裂,肺小叶间质水肿,血管扩张充血,纤维结缔组织增生伴有局灶性细胞浸润。; 张清华付强房杰良房献忠李健; 关键词：副猪嗜血杆菌病理组织学

不同甘蔗品种叶片气孔对水分胁迫的响应: 干旱是甘蔗面临最主要的环境胁迫之一,为了解不同甘蔗品种在干旱胁迫时的气孔响应,该研究以F172、GT21、YT93/159和YL6四个抗旱性有显著差异的甘蔗品种为材料,采用桶栽,在伸长期进行四种不同程度的干旱胁迫(不浇水...; 张风娟李健杜成忠杨丽涛李杨瑞邢永秀; 关键词：甘蔗品种选育叶片气孔水分胁迫抗旱性

猴逆转录病毒RT-PCR和Real-time RT-PCR检测方法的建立被引量：2: 2013年; 猴逆转录病毒(Simian type D retrovirus,SRV)是引起猴获得性免疫缺陷综合征(Simian acquired immunodeficiency syndrome,SAIDS)的病原之一,其严重危害猴的健康,并威胁与猴接触人员的健康,是无特定病原体(SPF)猴必须排除的病毒之一。为了应对口岸对进出境野生及实验用灵长类动物SRV感染情况的监测和流行病学调查的需要,建立了RT-PCR和real-time RT-PCR检测SRV的方法,并对方法的特异性、敏感性和稳定性进行了验证。; 熊炜蒋静张强盘宝进李健魏晓锋黄忠荣胡建华; 关键词：RT-PCR REAL-TIME RT-PCR TAQ

李健

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