曹国君
- 作品数：6 被引量：16H指数：2
- 供职机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>
- 发文基金：上海市科委重大科技攻关项目上海市科学技术委员会基础研究重点项目上海市闵行区卫生局科研课题更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 病毒microRNA研究进展被引量：2
- 2010年
- microRNA(miRNA)是一种含有约22个核苷酸的RNA分子,它可以介导基因表达的转录后调节,可调节细胞的生长、分化、凋亡、细胞周期和免疫反应等。已逐步发现多种病毒miRNA,该文就近年来病毒miRNA的研究进展作一综述。
- 曹国君孙佳彬季育华
- 关键词：病毒MICRORNA基因表达
- 人巨细胞病毒对更昔洛韦耐受性的基因型鉴别方法的建立和应用被引量：1
- 2009年
- 目的建立实验室检测人巨细胞病毒(HCMV)更昔洛韦(GCV)耐药的基因型分析的常规方法。方法采用巢式聚合酶链反应(PCR)直接扩增33例HCMV感染患者的外周血白细胞及前期实验同步获得的33例临床分离毒株的HCMV UL97基因片段,对扩增产物进行测序,与HCMV标准毒株AD169序列比对,参照国外报道的耐药相关的热点突变,判定各临床分离毒株的耐药基因型。结果除有1株为HCMV UL97呈M460V突变型外,余32株同标准株AD169的序列一致。同一患者的分离毒株与外周血白细胞中测得HCMV UL97基因序列完全一致。结论建立的实验室检测HCMV耐药的基因型分析完全可以替代传统的耐药表型分析,前者无需分离活病毒,不仅需时短,而且相对安全,其技术要点更适宜临床推广应用。
- 曹国君章莉华丽张玥方风琴季育华
- 关键词：人巨细胞病毒更昔洛韦耐药基因型
- 人巨细胞病毒耐药相关蛋白PUL97局部结构模拟和突变分析
- 2010年
- 目的初步探索人巨细胞病毒耐药相关蛋白PUL97局部序列(329～572aa)的三维模拟结构并进行突变的耐药分析。方法采用巢式PCR方法扩增UL97基因776 bp片段并测序,以此发现非同义突变;然后利用SWISS-MODEL结构模拟综合服务器和其他相关软件比对模式对野生型PUL97蛋白片段进行同源模建并优化,通过各种指标或服务器来评估模拟结构的优劣并作筛选。将筛选所得的最佳模拟结构用于非同义新突变型的初步耐药分析。结果最终筛选出的模拟结构是以1YDTE为模板,以L1.FASTA为比对文件所得的Model A。整个分子的能量最低,ProQ的预测分数最高。分子对接分析也发现了潜在的ATP和GCV结合口袋。利用已知的阴阳性耐药点突变验证了该结构的合理性。同时根据突变前后结构信息的改变,提示C518Y单点突变以及联合突变(E517G和C518Y)呈现高度可疑的耐药特性。结论 PUL97野生型蛋白计算机结构模拟和突变分析法是初步评估新突变型耐药特性的又一方便快捷的方法 ,可用于实验验证前的筛选;但模拟结构本身的准确性是成功运用该方法的前提。
- 方风琴谢琼张玥毛客自章莉陆怡德华丽曹国君季育华
- 关键词：人巨细胞病毒突变分析
- 真菌分子诊断技术应用的问题被引量：1
- 2010年
- 孙佳彬曹国君季育华
- 关键词：真菌DNA扩增
- 提高侵袭性烟曲霉感染痰标本病原学检出率的方法探讨
- 2011年
- 目的:探讨一种可提高临床痰标本的侵袭性烟曲霉感染检出率的培养基。方法:收集临床常规痰标本分离菌(包括白假丝酵母菌),分析其耐药性,并将其作为"干扰菌"与烟曲霉标准株的孢子以不同比例混合接种培养,模拟痰标本的混合感染,观察彼此的干扰情况。同时添加抗菌药物于MediumB培养基中,分析培养基对烟曲霉的生长选择性。结果:当铜绿假单胞菌浓度≥104CFU/mL时,即可完全抑制烟曲霉(103CFU/mL)的生长;金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌则必须在>105 CFU/mL时,才能完全抑制103 CFU/mL的烟曲霉生长;当白假丝酵母菌与烟曲霉以100∶1混合接种时,其基本抑制了烟曲霉的生长。根据"干扰菌"的耐药特性,同时添加亚胺培南和万古霉素至培养基,结果显示其能有效抑制上述3种细菌的生长;添加氟康唑5μg/mL可抑制白假丝酵母菌的生长,而上述3种药物对烟曲霉的生长均无影响。结论:在所研究的真菌分离培养基中添加适宜的抗细菌及抗真菌药物,可有效抑制"干扰菌",提高烟曲霉的检出率。
- 刘璐季育华曹国君周敏韩立中彭奕冰
- 关键词：侵袭性真菌感染烟曲霉
- 真菌基因组DNA的提取和通用PCR检测方法的建立被引量：12
- 2011年
- 目的改良真菌基因组DNA的提取方法,建立真菌通用聚合酶链反应(PCR),为目前临床真菌感染的早期诊断、预防和治疗提供有效工具。方法参考前人报道的多种真菌基因组DNA的提取方法,作改良以确立本研究中所采纳的手段,并应用真菌核糖体DNA(rDNA)通用引物,以实验室保存的标准菌株及临床分离菌株来建立临床真菌感染检测用通用PCR。结果白念珠菌和烟曲霉在75℃温度下分别作用60和80 min可以完全被灭活。经目前多种破壁方法的探讨,发现对于白念珠菌(单细胞真菌)选用酶消化法,破壁效率高达98.29%,而烟曲霉(多细胞真菌)则需要酶消化法与打击器振荡法联合应用,其破壁率也可达66.68%,进一步用酚氯仿法抽提其基因组DNA,能够获得相对纯度高且有一定得量。当选择真菌rDNA ITS2区间的一对通用引物,通过PCR反应体系的优化,使得本研究中建立的通用PCR,对于白念珠菌和烟曲霉的检测下限分别为5个和9.7个,其PCR产物测序结果与数据库比对完全一致,同时选择临床分离的或实验室保存的其他真菌、细菌和病毒株进行验证,该方法仅针对真菌群,结合测序分析可以实现种属水平的鉴定。结论改良真菌基因组DNA提取后所建立的针对真菌rDNA的通用PCR敏感且特异,适宜实验室操作。
- 曹国君赵缜彭奕冰季育华孙佳彬卫蓓文刘璐
- 关键词：真菌DNA提取
