彭小莉 作品数:17 被引量:77 H指数:5 供职机构: 厦门出入境检验检疫局 更多>> 发文基金: 国家质检总局科技计划项目 厦门市科技计划项目 福建省自然科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 医药卫生 生物学 轻工技术与工程 更多>>
食源性变形杆菌簇致病菌的检测 被引量:3 2010年 为建立食源性变形杆菌簇致病菌的检测方法,对富集培养基、选择性平板分离培养基和生化特性进行了筛选比较。结果表明,肠杆菌富集肉汤培养基更有利于变形杆菌簇致病菌的检出,平板分离培养基可用EMB琼脂培养基和SS琼脂培养基(或麦康凯琼脂培养基),初筛方法为革兰氏反应和苯丙氨酸脱氨酶实验,最后用其他生化反应进行确认。该方法检出率高,检测范围较宽,可为建立变形杆菌簇致病菌的检验标准提供实验依据。 陈双雅 张永祥 陈伟玲 王群力 谢明星 刘棠 彭小莉关键词:致病菌 空肠弯曲菌的磁捕获_-荧光PCR检测方法的建立 被引量:22 2005年 为提高畜禽类食品中空肠弯曲菌的检出率和灵敏度 ,应用抗血清和磁性微珠首次制备弯曲菌免疫磁珠 ,利用弯曲菌免疫磁珠直接捕获检样中目的菌 ,不需要增菌培养 ;通过荧光PCR检测鞭毛蛋白A(flaA)基因和 或马尿酸酶 (hipO)基因 ,首次建立空肠弯曲菌的磁捕获_荧光聚合酶链反应 (IMC_FPCR)方法。IMC_FPCR法检测空肠弯曲菌方法简便易行 ,可在 2 4h内完成 ,特异性好 ,检测低限达到 10cfu mL ,抗干扰性强。IMC_FPCR方法可望解决非可培养状态的空肠弯曲菌检测难题 ,是一种适用于检验检疫、卫生防疫和农产品安全检验等领域的快速方法。 刘光明 苏文金 蔡慧农 谢明星 刘棠 彭小莉关键词:空肠弯曲菌 荧光PCR 冰淇淋中紫色色杆菌的分离鉴定 2009年 〔目的〕对进出口送检冷冻食品及市售冷冻食品进行食品安全调查。〔方法〕按《食品卫生微生物检验菌落总数测定》(GB/T4789.2-2003)进行菌落总数的测定。挑取平板上的紫色菌落纯培养,获得的菌株在VITEK微生物鉴定仪中进行鉴定。〔结果〕从1份冰淇淋样品中分离出1株紫色色杆菌。〔结论〕由于紫色色杆菌感染病死率极高,对食品中该菌的检测值得重视。 彭小莉 陈伟玲 陈双雅关键词:紫色色杆菌 冷冻食品 免疫金层析技术快速检测副溶血弧菌方法的初步研究 被引量:9 2012年 应用兔抗副溶血弧菌IgG-2包被硝酸纤维素膜检测线,山羊抗兔IgG包被对照线,胶体金标记兔抗副溶血弧菌IgG-1制成检测试纸条,建立了检测副溶血弧菌的免疫金层析试纸条法(IGCA)。结果显示,阳性者试纸条检测线和对照线均出现红色线,试验过程仅需5~15min即可判断结果,该法对副溶血弧菌的最低检测量为3.592×104 CFU/mL,与溶藻弧菌、霍乱弧菌、美人鱼弧菌、麦氏弧菌、弗氏枸橼酸杆菌和沙门氏菌等常见肠道菌不发生交叉反应。将试纸条4℃存放6个月,常温存放3个月,37℃存放1个月,检测结果无差异。结果表明,建立的试纸条检测方法操作简便快速、灵敏度高、特异性强和稳定性好,非常适于基层养殖部门应用。 孔繁德 刘阳 徐淑菲 彭小莉 吴德峰 林立关键词:副溶血弧菌 胶体金 免疫层析 荧光定量PCR技术检测副溶血弧菌方法的建立与初步应用 2013年 目的:建立副溶血弧菌SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法。方法:根据副溶血弧菌(VP)的toxR基因序列,应用primer6.0设计了1对特异性引物,进行了最佳引物浓度的确定,建立了标准曲线和溶解曲线,对所建立方法进行了特异性、灵敏度和稳定性测试,并进行了临床样本检测。结果:副溶血弧菌SYBR Green I荧光定量PCR的最佳引物浓度为0.2 µmol/L,标准曲线循环阈值和模板浓度呈良好的线性关系,相关系数R2为0.996,扩增效率E接近100%,溶解曲线特异,最低检出量为2.14个拷贝,特异性和重复性较好。临床检测结果与常规细菌分离鉴定方法符合率100%。结论:建立了特异灵敏的副溶血弧菌实时荧光定量PCR检测方法,对于加强进出口水产品中VP的检验检疫具有十分重要的意义。 孔繁德 吴玉娟 黄新新 黄标敏 彭小莉 徐淑菲 林立关键词:副溶血弧菌 荧光定量PCR 免疫金层析技术快速检测副溶血弧菌方法的初步研究 2012年 本研究应用兔抗V.parahaemolyticus IgG-2包被硝酸纤维素膜检测线,羊抗兔IgG包被对照线,胶体金标记兔抗V.parahaemolyticus IgG-1,建立了检测副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)的免疫金层析试纸条法(IGCA)。结果表明,阳性者试纸条检测线和对照线均出现红色线,实验过程仅需5~15min即可判断结果,该法对V.parahaemolyticus的最低检测量为3.60×104cfu/mL,与溶藻弧菌、霍乱弧菌、美人鱼弧菌、麦氏弧菌、弗氏枸橼酸杆菌和沙门菌等常见肠道菌不发生交叉反应。将试纸条4℃存放6个月、常温存放3个月,37℃存放1个月,检测结果无差异。说明建立的试纸条检测方法操作简便快速、灵敏度高、特异性强、稳定性好,结果容易观察和判断,非常适于基层养殖部门应用。 孔繁德 刘阳 徐淑菲 彭小莉 吴德峰 林立关键词:副溶血弧菌 胶体金 免疫层析 纳米PCR技术检测溶藻弧菌的建立与初步应用 被引量:3 2012年 本研究根据溶藻弧菌(VA)的特异性基因toxR基因序列,应用primer6.0设计了1对特异性引物,并建立了纳金米金PCR方法,并对该方法的最佳反应条件、特异性和灵敏度进行了测定,采用2.0%琼脂糖电泳进行检测,结果表明本实验能扩增得到与实验设计相符的159bp(VA)的特异性条带;与副溶血弧菌、霍乱弧菌、麦氏弧菌、沙门氏菌、枸橼酸杆菌无交叉反应;纯培养细菌检测灵敏度可达22cfu/反应体系,同条件下比普通PCR的灵敏度高10倍。经临床检测,从120份带鱼、鱿鱼和鱼粉中检出8份阳性样品,与常规细菌分离鉴定方法符合率100%。本试验方法的建立对于加强进出口水产品中VA的检验检疫具有十分重要的意义。 刘阳 孔繁德 彭小莉 徐淑菲 吴德峰 林立关键词:溶藻弧菌 空肠弯曲菌的磁捕获-荧光PCR检测技术研究 被引量:2 2004年 空肠弯曲菌是世界卫生组织列为最常见食源性传染病菌之一的人兽共患病原菌,传统的分离鉴定方法需要耗费大量工时,并存在敏感性低、难以检出非可培养状态细菌和易出现假阴性结果等问题。本研究首创了空肠弯曲菌的磁捕获-荧光PCR快速检测方法,无需增菌培养即可直接捕获检样中的弯曲菌,利用实时荧光PCR进行鉴定,可在24h内完成检测,检测低限达到10cfu/mL,提高了非可培养状态空肠弯曲菌的检出率。 刘光明 方元炜 陈伟玲 周昱 孔繁德 王根芳 刘棠 彭小莉关键词:空肠弯曲菌 格林-巴利综合症 人兽共患病 纳米金PCR技术检测副溶血弧菌方法的建立与初步应用 被引量:13 2012年 纳米金PCR是在普通PCR基础上发展起来的新技术,它能够明显提高普通PCR的灵敏度和特异性。根据副溶血弧菌(VP)的toxR基因序列,应用primer6.0设计一对特异性引物,建立了纳米金PCR方法,并对该方法的最佳反应条件、循环数、特异性和灵敏度进行测定。采用2.0%琼脂糖电泳进行检测,结果表明能扩增得到与试验设计相符的208bp(VP)的特异性条带;与溶藻弧菌、霍乱弧菌、麦氏弧菌、沙门氏菌、枸橼酸杆菌没有交叉反应;纯培养细菌检测灵敏度为3cfu/反应体系。与普通PCR法进行比较,该方法检测灵敏度比普通PCR高10倍。经临床检测,从150份带鱼、鱿鱼和鱼粉中检出5份阳性样品,与常规细菌分离鉴定方法符合率100%。该试验方法的建立对于加强进出口水产品中VP的检验检疫具有十分重要的意义。 刘阳 孔繁德 彭小莉 徐淑菲 吴德峰 林方关键词:副溶血弧菌 对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒衣壳蛋白基因在毕赤酵母中的表达 2012年 对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒是"须向OIE申报的甲壳动物重要疾病"之一。将该病毒主要结构蛋白基因克隆至毕赤酵母穿梭表达质粒pPIC9K,构建重组表达载体(命名为pPIC9K-IV),限制性内切酶BglⅡ对其进行酶切线性化,采用电穿孔法转化到毕赤酵母GS115宿主菌。采用PCR方法分析和G418筛选来鉴定重组的毕赤酵母,诱导表达的产物分别进行ELISA分析或Western blot免疫印迹鉴定,分泌表达产物分子量大小为40ku左右,原核表达时制备的兔抗对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒衣壳蛋白的血清可与真核表达的目的蛋白发生特异性反应。 彭小莉 谢明星 刘棠 陈双雅 王群力 陈伟玲 王景明 张其清关键词:衣壳蛋白 毕赤酵母 真核表达