张寒莹
- 作品数：8 被引量：39H指数：4
- 供职机构：南京农业大学更多>>
- 发文基金：教育部“春晖计划”国家科技支撑计划江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 盘羊供体细胞对异种核移植效率的影响被引量：7
- 2008年
- 【目的】利用核移植技术生产异种重构胚,研究供体细胞对异种核移植效率的影响。【方法】以新疆盘羊和绵羊耳皮肤组织建立成纤维细胞系,进行细胞遗传学分析;以来自不同个体、不同代次、不同汇合度和不同保存方式的盘羊成纤维细胞为核供体,当地绵羊卵母细胞为受体,进行异种重构胚的构建。【结果】来自3只盘羊耳皮肤成纤维细胞的异种重构胚的卵裂率与囊胚率均无显著差异;采用10代以内的细胞作为核供体,细胞代次不会影响重构胚的发育率;生长到70%～80%汇合的供体细胞重构胚的囊胚率显著高于刚完全汇合组和汇合2～4d组;将供体细胞4℃保存2d,虽降低了卵裂率,但囊胚率没有受到显著影响;盘羊的染色体数目为2n=56,核型式为4(M)+50(T),XY(T,M);绵羊的染色体数目为2n=54,核型式为6(M)+46(T),XY(T,M)。【结论】利用本试验中的3只盘羊耳成纤维细胞,培养到10代以内、70%～80%汇合后用于构建异种重构胚,能得到较高的早期胚胎发育率。
- 潘晓燕杨梅张寒莹王正朝汪立琴陈童郭志勤王锋
- 关键词：盘羊体细胞核移植染色体核型胚胎发育
- 睾丸网注射法建立转基因小鼠被引量：7
- 2008年
- 目的为了研究睾丸网注射法建立转基因小鼠的可行性。方法本试验应用显微注射仪将脂质体包裹的质粒pEGFP-N1通过睾丸网注射到4周龄昆明(KM)小白鼠睾丸生精小管内。注射后6周,与自然发情雌鼠交配,用PCR法检测仔鼠基因组中的外源DNA。结果共注射4只雄性小鼠,3只存活,并且具有交配,受精能力,共获仔鼠63只,其中2只为PCR阳性仔鼠。结论用睾丸网注射法制备转基因动物是可行的。
- 丁晓麟张寒莹许欣石国庆王锋
- 关键词：小鼠转基因
- 小鼠精原干细胞冷冻保存被引量：4
- 2009年
- 目的探索小鼠精原干细胞（SSCs）冷冻保存方法以及解冻后体外快速增殖的条件。方法实验以6d龄雄性昆明小白鼠为材料,两步酶消化法分离小鼠睾丸生殖细胞,Percoll非连续密度梯度离心法富集小鼠精原干细胞,随后加入不同的冷冻液以及采用不同的降温速率冷冻小鼠精原干细胞。以MEMα为基本培养基,加入10%胎牛血清和100μg/L的胶质细胞源性神经营养因子,WST-8比色法分析培养SSCs复苏后的增殖率,运用碱性磷酸酶细胞化学染色和RT-PCR技术,对培养的SSCs进行鉴定。结果冷冻液中添加10%二甲基亚砜、10%胎牛血清0、.07mol/L蔗糖时,以1℃/min程控降温方式冷冻小鼠SSCs,细胞解冻后活率最高,达84%以上;采用非程控降温方式冻存SSCs,尽管细胞解冻后活率相对于程控降温方式略低,但具有方法简单、易于操作、无需昂贵仪器的优点,复苏后SSCs贴壁时间为8~12h,24h可见细胞分裂,48h细胞出现迅速增殖,96h可见较多含20~25细胞的细胞团,此时精原干细胞增殖近5倍。结论本实验所用培养条件,可以使经长期冷冻的SSCs短期快速增殖。
- 丁晓麟张寒莹王子玉张艳丽许欣石国庆王锋
- 关键词：冷冻保护剂细胞培养精原干细胞小鼠
- 长江三角洲白山羊GDF-9基因第一、第二外显子序列多态及生物信息学分析
- 生长分化因子9(growth differentiation factor9，GDF-9)是一种种属特异性生长因子，由卵母细胞分泌，能维持卵泡的正常生长和卵母细胞的发育，并在排卵周期的后期促进黄体的形成。本试验采用PCR...
- 张寒莹
- 关键词：PCR-SSCP生物信息学山羊
- 文献传递
- 麋鹿耳皮肤成纤维细胞的分离、培养与核型分析被引量：10
- 2008年
- 为获得适合于克隆麇鹿的供体细胞，本试验对麋鹿耳皮肤成纤维细胞的分离、培养、纯化、生长特征、核型分析和冷冻保护剂等进行了研究。通过组织块培养法获得麋鹿皮肤成纤维细胞，用胰酶轻度消化后传代3～4次可得到较纯的皮肤成纤维细胞，并经过免疫荧光鉴定；麇鹿染色体数目为2n=68，核型式为2（M）＋64（A），XY（A，M）；含10％NCS的DMEM培养基最适宜细胞生长；复苏后可获得87．78％的贴壁率。
- 赵雪萍张寒莹王子玉许丹孙永成王锋丁玉华
- 关键词：麋鹿皮肤成纤维细胞体外培养核型分析冷冻保存
- 利用精原干细胞法生产转基因动物的研究进展被引量：2
- 2007年
- 综述了利用精原干细胞生产转基因动物的发展历程、方法以及最新研究进展.重点从精原干细胞移植法和曲细精管微注射法两个方面,系统分析了利用精原干细胞生产转基因动物的优缺点,以及当前存在的问题.
- 丁晓麟张寒莹石国庆王锋
- 关键词：精原干细胞转基因动物
- 江苏地方山羊品种GDF9基因第二外显子SSCP分析被引量：5
- 2008年
- 采用PCR-SSCP方法,检测了长江三角洲白山羊、黄淮山羊及波尔山羊等3个繁殖力不同品种的187只个体GDF9基因第二外显子的遗传多态性。结果表明,3个山羊品种群体GDF9基因第二外显子在引物3和引物4扩增片段中均发现多态性。引物3扩增片段中,3个山羊品种都出现AA、AB和BB 3种基因型,长江三角洲白山羊还出现了AC基因型。测序结果表明,引物3的扩增片段中,与AA基因型相比,BB基因型在第二外显子的562 bp处发生了A→C的单碱基突变,导致谷氨酰胺→脯氨酸的改变;AC基因型在第二外显子的421 bp处发生了C→T的单碱基突变,导致丙氨酸→缬氨酸的改变。引物4扩增片段中,3个山羊品种都出现DD和DE两种基因型,黄淮山羊还出现EE基因型,长江三角洲白山羊及波尔山羊还出现DF基因型。测序结果表明,与DD基因型相比,DE基因型在第二外显子的792 bp处发生了G→A的单碱基突变,导致缬氨酸→异亮氨酸的改变;DF基因型在第二外显子的791 bp、792 bp处均发生了G→A的单碱基突变,其中791 bp处的突变是沉默突变。
- 张寒莹丁晓麟应诗家王子玉庞训胜王瑞芳陈启康施健飞张浩王锋
- 关键词：PCR-SSCP山羊GDF9基因外显子繁殖力
- 哺乳动物早期胚胎表观遗传的非对称性研究进展
- 2008年
- 在哺乳动物发育早期,双亲基因组间及胚胎细胞系间均存在表观遗传非对称性,这对胚胎发育调控有重要意义。本文综述了受精卵、囊胚的表观遗传非对称性现象及目前对其机制的研究进展。克隆胚胎的表观遗传非对称性有所丢失,它们中的大部分有发育缺陷,尤其是胚胎和胚外组织发育失衡,这也说明了保持表观遗传非对称性对于胚胎发育的重要性。
- 张寒莹丁晓麟王锋石国庆
- 关键词：表观遗传早期胚胎
