常军亮
- 作品数：10 被引量：17H指数：3
- 供职机构：长春生物制品研究所更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组戊型肝炎病毒抗原ELISA检测方法的建立被引量：4
- 2011年
- 目的建立重组戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法,用于HE疫苗中HEV抗原含量的检测。方法以重组HEV病毒样颗粒作为免疫原,免疫母鸡,制备抗HEV-IgY多克隆抗体,纯化后作为包被抗体,HRP标记的抗HEV单克隆抗体作为检测抗体,建立HEV抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法,并对其进行验证。用建立的方法检测3批HE疫苗成品的HEV抗原含量,计算HEV抗原对氢氧化铝的吸附率。结果建立的ELISA方法线性范围为2～128 ng/ml,最低定量限为2 ng/ml;该方法检测冻干甲肝减毒活疫苗、重组人白介素-2(IL-2)、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、人血白蛋白、小牛血清及健康人血清均无交叉反应;该方法检测3个浓度的HEV抗原内部参考品的回收率在95.13%～104.50%之间,试验内及试验间变异系数均<15%;包被抗HEV-IgY的酶标板于37℃放置5 d,其检测HEV抗原内部参考品的A450值及敏感性均未发生显著变化;3批HE疫苗成品中HEV抗原对氢氧化铝的吸附率均大于95%,符合相关质控要求。结论已成功建立了HEV抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法,可用于HEV抗原含量的检测。
- 陈子杨吴业红张健锋常军亮时成波贾媛郭立君李春晖
- 关键词：肝炎病毒戊型病毒样颗粒IGY酶联免疫吸附测定
- 甲型H1N1流感病毒佐剂疫苗小鼠免疫效果
- 2010年
- 为了探讨甲型H1N1流感病毒氢氧化铝佐剂疫苗对小鼠的免疫作用及对小鼠繁殖性能的影响,以不同剂量、不同免疫程序免疫小鼠后定期采血;用血凝抑制(HI)方法检测血清H1N1流感病毒HI抗体滴度,观察H1N1流感病毒佐剂疫苗对小鼠受孕、产仔、哺乳的影响;比较孕鼠及非孕鼠的抗体滴度,免疫后孕鼠所产仔鼠的体重及H1N1胎传抗体水平。结果显示,以0.5μg组开始的不同剂量、不同免疫程序均可使小鼠产生90倍以上水平的H1N1流感病毒抗体;免疫后的小鼠不影响受孕、产仔及哺乳;仔鼠保护性抗体可持续1个月以上。H1N1流感病毒佐剂疫苗是一种高免疫原性的制剂,用低剂量免疫,即可产生90倍以上持续时间较长的保护性抗体。这种佐剂疫苗对小鼠的繁殖性能无明显影响,免疫产生的抗体经胎盘可垂直传递给仔鼠。
- 常军亮陈维金李春晖吴业红王莹徐军王伟善郭立君郭凤云
- 关键词：甲型H1N1流感病毒佐剂疫苗免疫原性繁殖性能
- HEV ORF2截短融合蛋白的原核表达及其免疫原性
- 2020年
- 目的原核表达3型戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)第2个开放阅读框(open reading frame 2,ORF2)截短融合蛋白(HEV3-179-Fe),并检测其免疫原性。方法分别扩增HEV3-179和Fe蛋白基因片段,经Overlap PCR法连接并扩增,克隆至载体pET-28a,构建重组表达质粒pET-28a-HEV179-Fe,将其转化感受态E.coli BL21(DE3),取阳性菌株,IPTG诱导表达融合蛋白HEV3-179-Fe,进行10%SDS-PAGE分析。目的蛋白经镍离子金属鳌合亲和层析纯化后,加入硫酸铵进行病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)重构,置电镜下观察。HEV3-179-Fe蛋白VLPs与氢氧化铝佐剂吸附后免疫小鼠,ELISA法测定效价,以评价HEV ORF2截短融合蛋白的免疫原性。结果重组表达质粒pET-28a-HEV3-179-Fe构建正确。目的蛋白HEV3-179-Fe相对分子质量约40000,主要以包涵体形式存在,表达量均达35%以上,纯度约95%,可与鼠抗HEV 3多抗发生特异性反应。硫酸铵重构后于电镜下可见直径约20 nm的VLPs,其免疫小鼠的血清效价达1∶4800000以上。结论原核表达了HEV3-179-Fe,且在小鼠体内具有较好的免疫原性。本实验为以HEV ORF2-179蛋白为基础的VLPs基因工程疫苗的研发奠定了基础。
- 周永飞乔宏雷赵丹莹唐剑光常东英韩顺子常军亮张健刘玉林曹玉锋
- 关键词：戊型肝炎病毒基因重组原核表达免疫原性
- 猪旋毛虫病胶体金检测试纸条的制备被引量：3
- 2011年
- 目的制备猪旋毛虫病胶体金检测试纸条,并进行验证。方法采用免疫胶体金技术标记猪旋毛虫排泄-分泌(Excretory-secretory,ES)抗原,在AE98NC膜上点上兔抗猪IgG作为检测带,抗ES抗原抗体作为对照带,将NC印膜、胶体金抗原玻璃棉、吸水纸和支持板用胶膜组成试纸条,进行敏感性、特异性和重复性验证,并与ELISA检测方法进行对比。结果试纸条检测38头份猪旋毛虫阳性血清的敏感性为97.37%;检测33头份猪蛔虫阳性血清、26头份猪囊虫阳性血清、21头份猪细颈囊尾蚴阳性血清和98头份猪旋毛虫阴性血清的特异性为98.88%;重复性好;与ELISA检测方法的敏感性和特异性差异无统计学意义(P﹥0.05)。结论已制备猪旋毛虫病胶体金检测试纸条,该试纸条敏感、特异、简便、快速,可用于猪旋毛虫病的检疫及流行病学调查。
- 苑淑贤姚新华任科研李萌杨金生苑冬梅李煜洁常军亮杨淑苹
- 关键词：旋毛虫病排泄-分泌抗原胶体金试纸条
- HEV抗原ELISA检测方法的建立及初步应用
- 戊型肝炎(hepatitis E)是由戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)引起的病毒性肝炎,其在亚洲、非洲及中美洲等发展中国家是一种比较严重的传染病,占急性病毒性肝炎的50%,孕妇死亡率高达20%。...
- 吴业红陈子杨张健峰常军亮王莹迟春萍时成波徐军贾媛郭立君郭凤云
- 文献传递
- 戊型肝炎病毒重组蛋白P179抗原单克隆抗体及抗原检测试剂盒的制备被引量：1
- 2012年
- 目的制备戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)重组蛋白P179抗原单克隆抗体及抗原检测试剂盒。方法以4型HEV ORF2重组蛋白P179免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株,有限稀释法进行克隆化培养,制备腹水,并对杂交瘤细胞进行染色体计数,鉴定单抗亚类及特异性、并检测稳定性;经SDS-PAGE分析抗体纯度,以兔抗179抗原多抗作为包被抗体,HRP标记P179单抗作为酶标抗体,建立双抗体夹心ELISA法,制备试剂盒,并进行最佳线性范围测定、准确性、精密性和稳定性验证。结果获得4株能稳定分泌抗P179抗原单抗的杂交瘤细胞株,分别命名为3A10、3F8、4E9和5G6,腹水抗体效价分别为1∶10-7、1∶10-6、1∶10-6和1∶10-7,染色体数分别为96、98、101和99条;亚类分别为IgG2a、IgG2a、IgG1和IgG2b;4株单抗连续传代3个月,液氮冻存1年抗体效价未发生变化;制备的试剂盒有良好的线性(R2>0.950 0)、准确性、精密性,试验内变异系数为4.17%～6.26%,回收率在87.9%～114.8%之间,试验间变异系数为5.82%～8.01%,回收率在90.8%～108.9%之间;于37℃及4℃放置3 d,仍具有良好的稳定性。结论成功制备了戊型肝炎病毒P179抗原单克隆抗体及抗原检测试剂盒,可用于戊型肝炎疫苗生产中定量检测疫苗抗原。
- 王玉梅孟多佳时成波张宁常军亮迟春萍曹玉锋于爱东
- 关键词：肝炎病毒戊型抗体单克隆酶联免疫吸附测定
- 狂犬病病毒抗原定量双抗体夹心ELISA检测方法的建立及应用被引量：6
- 2012年
- 目的建立狂犬病病毒(Rabies virμs,RV)抗原定量双抗体夹心ELISA检测方法,以应用于疫苗生产过程中RV含量的监测。方法将RV aGV株纯化抗原经腹腔注射免疫BALB/c小鼠,制备抗RV单克隆抗体,纯化后以HRP进行标记,建立双抗体夹心ELISA检测方法。以狂犬病疫苗(效力检定用)国家标准品为定量标准,建立剂量-反应曲线,确定该方法的灵敏度,并对该方法的专属性、精密性及适用性进行验证。结果制备了2株针对不同抗原位点的单克隆抗体1E9和2H1,间接ELISA法测定腹水效价为1∶105～1∶107,纯化后蛋白含量分别为10.285和7.64 mg/ml。建立的ELISA法对RV抗原的最低检出限为1.03 mIU/ml,标准曲线的最佳线性范围为1.03～66 mIU/ml,相关系数为0.991 9。该方法对检测过程中可能遇到的杂质和添加物(人血清白蛋白、牛血清、Vero细胞培养上清)的检测结果均为阴性;检测3个浓度(20、12.50和3.13 mIU/ml)狂犬病疫苗(效力检定用)国家标准品的试验内和试验间变异系数的平均值分别为7.78%和14.0%;用该方法检测不同毒株、不同细胞生产的狂犬病疫苗的RV抗原含量的平均值在0.67～4.86 IU/ml之间。结论成功建立了RV抗原定量双抗体夹心ELISA检测方法,可对来自不同毒株、不同细胞的狂犬病疫苗的RV抗原进行快速定量检测,为疫苗生产中的质量控制提供了简便的监测手段。
- 崔文广杨屹常军亮井伟东张秀霞苗丽丁丽丽周长军郭秀侠
- 关键词：狂犬病病毒抗原酶联免疫吸附测定
- 抗戊型肝炎病毒重组蛋白P179单克隆抗体的制备及应用
- 目的:制备抗戊型肝炎病毒(HEV)重组蛋白179单克隆抗体,用于建立定量检测戊型肝炎病毒重组蛋白179抗原试剂盒。方法:以Ⅳ型HEV ORF重组蛋白P179为抗原免疫BALB/C小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细...
- 王玉梅孟多佳时成波常军亮张宁迟春萍曹玉锋于爱东
- 关键词：酶联免疫吸附测定
- 文献传递
- 人工种植人参对Wistar大鼠长期毒性研究被引量：1
- 2011年
- 目的研究人工种植人参全参的长期毒性,为其进入食品提供安全保障。方法按我国《保健食品安全性毒理学评价程序和检验方法规范》的要求,选用清洁级的Wistar大鼠,随机分为空白对照组及8.0、6.5、5.0g/kgBW三个剂量组(相当于推荐剂量的160、130、100倍),连续给药90d。试验结束后进行血液生化、脏器系数及组织病理学检查。结果三个剂量组大鼠的外观体征、行为活动、血液生化学、脏体比及病理组织学检查均未见异常,与对照组比较差异均无统计学意义(P<0.05)。结论人工种植人参全参长期服用无毒性反应。
- 宋昕恬隋自洁邹梅张晶莹张琨高峰常军亮
- 关键词：人参长期毒性
- 森林脑炎病毒包膜E蛋白的原核表达、纯化及其免疫原性初步评价被引量：2
- 2020年
- 目的原核表达及纯化森林脑炎病毒(tick-bome encephalitisvirus,TBEV)包膜E蛋白,并初步评价其免疫原性。方法采用RT-PCR法扩增TBEV E蛋白基因,克隆至载体pET-28a,构建重组原核表达质粒pET-28a-TBEV E,转化感受态E.coli BL21(DE3),挑取阳性克隆,扩增后经终浓度为0.1 mmol/L的IPTG诱导,表达产物经12%SDS-PAGE及Western blot鉴定。将鉴定正确的重组蛋白采用镍柱亲和法纯化,铝佐剂吸附后,经小鼠左侧腹腔注射,0.5 mL/只,间隔1周加强免疫1次,末次免疫后7、14、21、28、35、42、49 d,经小鼠眼眶采血,分离血清,ELISA法测定小鼠血清抗体水平。结果经双酶切及测序鉴定,重组质粒pET-28a-TBEV E构建正确。表达产物相对分子质量约55000,主要以包涵体形式表达,表达量约22.3%,且可与小鼠抗TBEV血清发生特异反应,纯化后纯度达90%。末次免疫后21 d,小鼠血清抗体效价达最高,为1∶6400。结论经原核表达系统成功表达并纯化了TBEV E蛋白,该蛋白具有较好的免疫原性,本实验为TBEV诊断制剂及基因工程疫苗的研发奠定了基础。
- 邴振虹王兰菊周永飞常东英张健锋王伟韩顺子常军亮孙宏亮曹玉锋邹勇
- 关键词：森林脑炎病毒基因重组原核表达免疫原性
