孙志伟
- 作品数：119 被引量：316H指数：10
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学军事经济管理更多>>
- B型肉毒毒素保护性抗原Hc在大肠杆菌中的可溶性高表达被引量：8
- 2008年
- 目的:通过序列优化及表达条件改进,在大肠杆菌中高效可溶性表达B型肉毒毒素保护性抗原Hc(Bont/B-Hc)。方法:对Bont/B-Hc基因片段优化,用大肠杆菌常用密码子替换稀有密码子,并将(G+C)含量由76.2%降至56.3%;人工合成多条具有重叠互补序列的寡核苷酸片段,采用重叠延伸PCR方法获得了Bont/B-Hc的全长基因,并构建了原核可溶性表达载体;将经酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导Bont/B-Hc的表达并进行纯化及Western印迹鉴定。结果和结论:目的蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了可溶性高表达,占菌体裂解液上清总蛋白的26.7%,表达量达到30mg/L,是目前国内外已知表达的最高水平;经Ni柱一步纯化后,目的蛋白纯度可达到80.3%,为肉毒毒素中和抗体的制备及亚单位疫苗的研究奠定了基础。
- 于蕊王双余云舟俞炜源孙志伟
- 关键词：B型肉毒毒素
- 定点整合人Bcl-2基因的CHO/dhfr-细胞株的建立被引量：1
- 2005年
- 构建重组载体质粒pMCEfrt-Bcl-2,利用FIp-InTM定点重组系统,在CHO-dhfr-细胞内定点整合人Bcl-2基因,通过Western印迹检测重组细胞Bcl-2蛋白的表达。通过流式细胞仪和DNALadder检测在高NH4Cl条件下细胞的凋亡情况;用台盼蓝染色检测在无血清IMDM培养基中细胞的活细胞数目和活细胞比例。结果获得了稳定表达Bcl-2基因的细胞株CHO-Bcl-2,该细胞株能高水平表达Bcl-2蛋白。在无血清培养过程中,CHO-Bcl-2细胞比对照细胞保持高约15%的活细胞比例,细胞总数高25%。CHO-Bcl-2在高NH4+(50mmol/L)培养条件下具有较低的凋亡水平。建立了能够高表达Bcl-2基因并具有一定的抗凋亡能力的重组CHO/dhfr-细胞株。
- 许凌峰刘志刚孙志伟林建波杜韫刘姗俞炜源
- 关键词：BCL-2基因细胞培养凋亡
- 重组人sIL-2Rα在HEK293细胞中的分泌性表达与鉴定
- 2010年
- 目的在HEK293细胞瞬时表达带有组氨酸标签的重组人sIL-2Rα的胞外功能区片段,并进行纯化与鉴定。方法对GenBank中IL-2Rα膜外区基因序列进行优化,并在3′端融合组氨酸标签序列的基因,人工合成该基因并将其克隆到表达载体pL-293;转染HEK293细胞瞬时表达sIL-2Rα;表达产物His标签纯化;SDS-PAGE和Western印迹对表达产物进行鉴定。结果表达产物中在相对分子质量为48 000处可见与目的蛋白相对分子质量相符的条带,该条带可被sIL-2Rα单克隆抗体识别。结论构建的重组sIL-2Rα质粒能够在HEK293细胞瞬时表达,表达量为1~1.5 mg/L。
- 王双陈燕侠王瑞琳孙志伟林建波俞炜源
- 关键词：SIL-2R
- 抗OX40治疗性单抗的研制简介
- 治疗性单抗作为肿瘤免疫治疗领域中的一支重要方向,本课题采用高通量噬菌体抗体库固相筛选技术，对多个抗体库进行多轮筛选，得到具有一定结合活性的单链抗体一株，并命名为OX40mab。其与抗原结合亲和力同OX40唯一配体OX40...
- 侯小娟王双仇玮祎孙志伟
- 关键词：药物设计抗肿瘤作用
- 复方蒿甲醚片和苯芴醇两种剂型治疗恶性疟临床对比试验被引量：6
- 2000年
- [目的 ]观察复方蒿甲醚及其组分之一苯芴醇两种剂型对恶性疟的疗效和安全性。 [方法 ]共收治 15 0例恶性疟患者 ,采用双盲 (复方蒿甲醚片组和苯芴醇片组 )、随机、对比方法 ,其中复方蒿甲醚组 (A) 5 1例、苯芴醇片剂组 (B) 5 0例、苯芴醇胶丸组 (C) 4 9例。病人住院后观察 2 8d。 [结果 ]A、B、C3组的平均退热时数分别为 (17.1±8.6 ) h、(34.0± 2 3.2 )和 (2 9.4± 2 4.9) h;平均原虫转阴时间分别为 (2 9.7± 8.9) h、(5 1.6± 14.1) h和 (5 4.7± 17.4) h;3组患者均达到临床治愈 ;观察期间无明显不良反应 ,化验检查亦无明显改变。 [结论 ]复方蒿甲醚和苯芴醇两种剂型对恶性疟均有良好的治疗作用 。
- 孙志伟单承启李国福丁德本刘光裕王京燕焦岫卿
- 关键词：复方蒿甲醚苯芴醇恶性疟药物疗法
- 全人源P选择素抗体在急性肺炎治疗中的应用
- P-selectin是细胞黏附分子选择素家族成员之一,通过与其配体相互作用参与体内多种生理和病理过程。P-selectin在诸多疾病如心血管疾病、炎症反应、自身免疫病、肿瘤等疾病的发生发展中发挥着重要作用。通过阻断P-s...
- 仇玮祎王双李鹤张畅俞炜源孙志伟
- 文献传递
- 稳定表达乙脑病毒结构蛋白的细胞系的建立被引量：2
- 2009年
- 以乙型脑炎病毒SA14-14-2疫苗株全长基因组克隆质粒pBR-JTF为模板,通过PCR分别扩增prM-E及C-prM-E基因片段,构建表达乙型脑炎病毒结构蛋白的真核表达质粒pCJE-ME及pCJE-CME。将这2种重组质粒用脂质体法转染BHK-21细胞后,质粒pCJE-ME表现明显的细胞毒性,转染细胞不能存活;质粒pCJE-cME可导致筛选到表达JEV结构蛋白的稳定细胞系,这种稳定表达JEV结构蛋白的细胞系通过PCR扩增细胞系基因组、ELISA、Western Blot、间接免疫荧光等方法得到鉴定。研究结果表明在C蛋白存在下,乙型脑炎病毒C-prM-E蛋白可以在BHK细胞中稳定表达,为研制JEV新型复制子颗粒疫苗提供了便利工具。
- 刘珊黄莺杨鹏孙志伟俞炜源
- 关键词：乙型脑炎病毒结构蛋白细胞系
- 共表达折叠调节因子对尿激酶功能性表达的影响被引量：1
- 2009年
- 目的研究共表达折叠调节因子对真核蛋白尿激酶(urokinase,UK)功能性表达的影响,改善大肠杆菌中UK表达产物的活性。方法通过分离分子伴侣DnaK、DnaJ、GroEL-S及二硫键异构酶DsbA、DsbC的基因,构建折叠调节因子表达载体,与UK表达载体双质粒共转化同一个菌株,观察共表达与单独表达时UK的表达产物活性变化。结果共表达分子伴侣DnaK、GroEL-S和二硫键异构酶DsbC、DsbA对UK表达产物的活性有明显的提高,最高的是GroEL-S。结论在大肠杆菌中共表达分子伴侣能协助尿激酶蛋白的正确折叠,提高尿激酶表达产物的活性。
- 白光兴孙志伟俞炜源李晋
- 关键词：共表达分子伴侣二硫键异构酶
- 人源抗人多亚型干扰素α抗体及其应用
- 本发明提供一种人源抗人多亚型干扰素α抗体及其编码基因与应用。运用X射线结晶学和计算机辅助药物设计方法对人源抗人干扰素α抗体AIA22进行分子设计与改造获得的干扰素α抗体能特异结合受体IFNAR2结合区；与抗原表位为受体I...
- 孙志伟王双杜鹏仇玮祎徐磊
- 文献传递
- 人CD20胞外区与噬菌体pⅢ融合基因在E.coli中的可溶性表达被引量：1
- 2004年
- 目的 :克隆人CD2 0胞外区基因 (cdw)和丝状噬菌体 (M13K0 7)G3蛋白N端结构域 (pⅢN1)基因 ,并在大肠杆菌中进行高效融合表达。方法 :利用逆转录PCR和PCR方法分别克隆CD2 0胞外区基因和pⅢN1基因 ,然后将二者融合克隆入pTIG Trx表达载体 ,在大肠杆菌中进行可溶性表达。结果 :可溶性表达产物占细菌可溶性蛋白的约2 5 % ,表达产物可被抗CD2 0分子的单克隆抗体识别。结论 :成功地表达并鉴定了人CD2 0胞外区蛋白 ,为利用噬菌体抗体库进行抗CD2 0抗体的筛选奠定了基础。
- 张效云孙志伟王双俞炜源
- 关键词：CD20抗原噬菌体抗体库
