姚菊霞
- 作品数：17 被引量：39H指数：4
- 供职机构：青海省畜牧兽医科学院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项政府间科技合作项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 施毛虫半胱氨酸蛋白酶抑制因子TsCystatin1的克隆、表达及鉴定
- 旋毛虫是一种细胞内寄生性线虫,其生活史可以在同一宿主内完成,宿主感染谱极广,几乎所有的哺乳动物均可感染。旋毛虫感染引起的旋毛虫病是一种危害极其严重的食源性人兽共患寄生虫病。半胱氨酸蛋白酶抑制因子是一类广泛存在于生物体的半...
- 姚菊霞
- 关键词：旋毛虫基因克隆基因表达
- 文献传递
- 多头带绦虫脑多头蚴cDNA表达文库的构建及初步分析被引量：2
- 2011年
- 从甘肃景泰羊源脑多头蚴原头节提取总RNA，以Oligo（dT）纤维素柱纯化mRNA，利用LambdaZAPIIXR文库构建试剂盒构建了脑多头蚴eDNA表达文库。从构建的原始文库随机挑选单个噬菌斑进行PCR，确定文库重组率和插入外源基因片段大小，鉴定文库质量。结果表明脑多头蚴eDNA表达文库的原始库容量为1．0×10。pfu，扩增后文库滴度为1．6×10^9pfu／mL。随机挑选的165个噬菌斑克隆中，0．25kb以上的克隆155个，重组率为93．9％，对其中0．5kb以上的115个克隆测序共获得104个表达序列标签（EST），分析后得到96个单一EST序列（UniqueEST），其中20个EST与绦虫基因有同源性，38个EST与吸虫基因有同源性，4个EST与线虫基因有同源性，17个EST与其他物种有同源性，其余17个EST没有同源基因。这些EST编码的氨基酸序列有多头带绦虫六钩蚴Tml6抗原、猪带绦虫副肌球蛋白、猪带绦虫免疫原蛋白Ts76等绦虫抗原的同源蛋白以及烯醇化酶等一些酶类、热休克蛋白、肌动蛋白、核糖体蛋白等同源蛋白。
- 李文卉王建魁盖文燕姚菊霞曲自刚贾万忠罗建勋RaduBlaga付宝权
- 关键词：脑多头蚴CDNA表达文库表达序列标签
- 旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制因子基因的克隆与原核表达被引量：5
- 2010年
- 根据GenBank中旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制因子(Tsserpin)基因序列设计1对引物,从旋毛虫肌幼虫提取总RNA,应用RT-PCR扩增获得目的基因片段,进行限制性酶切后连接到表达质粒载体pET30a,构建重组表达质粒pET30a-Tsserpin,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,经PCR、限制性酶切分析及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG进行了诱导表达。SDS-PAGE分析表达产物,表达产物纯化后用Western-blotting鉴定Tsserpin重组蛋白的抗原性。PCR与酶切鉴定结果显示,构建的重组表达质粒pET30a-Tsserpin与预期结果一致。测序结果表明,插入片段为1122bp,编码373个氨基酸,与GenBank中旋毛虫Tsserpin基因的相似性为99%。含有pET30a-Tsserpin重组表达质粒的大肠杆菌BL21(DE3)诱导后得到了高效表达,SDS-PAGE分析结果显示,表达产物的分子质量约为48.5ku,而且主要以包涵体形式存在。Western-blot分析结果表明Tsserpin重组蛋白可以被旋毛虫感染猪阳性血清特异性识别,提示其具有良好的抗原性,可以作为猪旋毛虫病免疫诊断的候选抗原。
- 盖文燕李文卉王鸿盛姚菊霞曲自刚王艳华张德林付宝权
- 关键词：旋毛虫重组蛋白抗原性
- 寄生性线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂研究进展被引量：8
- 2012年
- 半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cysteine protease inhibitor,CPI或cystatin)是半胱氨酸蛋白酶可逆性紧密结合的天然抑制剂。寄生性线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂不仅具有独特的半胱氨酸蛋白酶抑制活性,而且还可以调节宿主免疫反应,在寄生虫逃避宿主免疫应答,适应寄生生活中起着重要作用。本文综述了半胱氨酸蛋白酶抑制剂的基本类型、结构特征和作用机制,以及寄生性线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂的研究进展。
- 姚菊霞付宝权
- 关键词：寄生性线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂免疫调节
- 旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因的表达及抗原性分析
- 根据GenBank中旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂(TsSerPIN)基因序列设计引物,从中国河南猪旋毛虫分离株肌幼虫总RNA应用RT-PCR扩增获得目的基因片段,克隆到pMD-18T载体并测序鉴定。对重组质粒pMD-18T-...
- 盖文燕李文卉王鸿盛姚菊霞曲自刚王艳华张德林付宝权
- 关键词：旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制剂重组抗原抗原性
- 文献传递
- 多头带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的克隆及序列分析被引量：1
- 2011年
- 从自然感染的羊脑内采集脑多头蚴原头节,提取总RNA。根据亚洲牛带绦虫的TaHc2-D11 mRNA序列设计特异引物,采用RT-PCR技术扩增多头带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(TmTPx)基因。PCR产物连接到pMD18-T载体构建重组质粒pMD-TmTPx,转化大肠埃希菌DH5α后筛选阳性克隆,经限制性酶切及测序鉴定后进行序列分析。扩增获得大小为614bp的TmTPx基因cDNA,该基因的完整开放阅读框架(ORF,591bp)编码196个氨基酸,编码蛋白的相对分子质量为Mr 21690,等电点为7.61。生物信息学分析结果表明TmTPx具有一个典型的2-Cys Prx保守功能结构域。绦虫已知TPx的分子进化分析发现,多头带绦虫与亚洲牛带绦虫的亲缘关系最近,与猪带绦虫和肥头绦虫的亲缘关系次之,与细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫的亲缘关系最远。
- 李永光李文卉盖文燕姚菊霞曲自刚贾万忠Radu Blaga付宝权
- 关键词：脑多头蚴克隆
- 旋毛虫半胱氨酸蛋白酶抑制因子TsCystatin1的克隆、表达及鉴定
- 旋毛虫是一种细胞内寄生性线虫,其生活史可以在同一宿主内完成,宿主感染谱极广,几乎所有的哺乳动物均可感染。旋毛虫感染引起的旋毛虫病是一种危害极其严重的食源性人兽共患寄生虫病。半胱氨酸蛋白酶抑制因子是一类广泛存在于生物体的半...
- 姚菊霞
- 关键词：旋毛虫克隆
- 文献传递
- 羊流产嗜性衣原体MOMP基因的克隆与原核表达被引量：1
- 2015年
- 为了对羊流产嗜性衣原体MOMP基因片段进行原核表达,试验采用PCR方法扩增出去信号肽序列的MOMP基因片段,将其克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,转化E.coli感受态细胞BL21(DE3),用IPTG诱导表达该基因片段,并对重组质粒表达产物进行Western-blot检测。结果表明:重组质粒pGEX-4T-MOMP构建成功,并成功表达出蛋白质相对分子质量约为66 ku的重组质粒表达产物,该重组质粒表达产物主要以包涵体形式存在;经Western-blot检测,该重组质粒表达产物可与羊流产嗜性衣原体阳性血清反应。说明试验成功表达了羊流产嗜性衣原体MOMP基因片段。
- 姚菊霞王光华李秀萍王戈平马利青
- 关键词：克隆重组质粒原核表达反应原性
- 多头带绦虫Tm16与Tm18抗原基因的克隆及原核表达被引量：1
- 2011年
- 为原核表达Tm16和Tm18重组蛋白,本研究以自然感染羊源脑多头蚴原头节基因组DNA为模板分别扩增Tm16和Tm18抗原基因全基因片段,测序鉴定后合成其开放阅读框架DNA片段,将基因组序列中的内含子去除并对其稀有密码子进行改造优化,构建重组表达质粒pGEX-Tm16和pGEX-Tm18。转化大肠杆菌BL21后以IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析表达产物并进行纯化。结果显示:在大肠杆菌中表达出带有GST标签的大小约为39.6 ku和39.4 ku的重组蛋白,经谷胱甘肽琼脂糖树脂纯化得到高纯度的可溶性的GST-Tm16及GST-Tm18重组蛋白,western blot分析表明重组蛋白均能够被兔抗GST单克隆抗体特异性识别。
- 李文卉盖文燕姚菊霞曲自刚贾万忠罗建勋BLAGA R付宝权
- 关键词：原核表达
- 旋毛虫TsP53重组蛋白对小鼠的免疫保护性被引量：1
- 2010年
- 将旋毛虫TsP53重组蛋白以20μg/只的剂量免疫小鼠3次后攻击感染旋毛虫肌幼虫200条/只。检查小鼠肠道旋毛虫7日龄成虫数、雌虫体外产新生幼虫数和感染35d后的肌幼虫数,并计算减虫率,同时用间接ELISA检测血清中抗TsP53重组蛋白的抗体应答。结果显示,TsP53重组蛋白免疫小鼠旋毛虫7日龄成虫、雌虫产新生幼虫的减虫率分别为14.34%和16.93%,与感染对照组和佐剂对照组相比差异不显著(P>0.05);感染35d后肌幼虫减虫率为38.68%,与感染对照组和佐剂对照组相比差异显著(P<0.05)。TsP53重组蛋白免疫小鼠在首次免疫后第7天出现抗体应答,可检测到抗TsP53重组蛋白的抗体,第3次免疫后第7天达到峰值,攻击感染后略有下降,但直到试验结束时仍然维持在较高水平,TsP53重组蛋白可诱导小鼠产生部分抗旋毛虫的免疫保护性。
- 王鸿盛李文卉盖文燕姚菊霞曲自刚王艳华张德林薛慧文付宝权
- 关键词：旋毛虫重组蛋白免疫保护性
