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一种重组杆状病毒快速无缝克隆的方法: <正>昆虫杆状病毒因其极晚期基因(ph和p10)启动子可以强效驱动外源基因表达而常用于构建重组病毒高效表达目的蛋白,现发展出各种类型的杆状病毒载体表达系统(Baculovirus expression vector sy...; 钱月忠史翠萍郝雪敏陈健; 关键词：重组杆状病毒基因表达; 文献传递

基于RD-BmBacmid载体构建表达GFP蛋白的重组杆状病毒的方法: 2014年; 研究构建一种快速表达GFP蛋白的重组杆状病毒的方法。在复制缺陷型的家蚕杆状病毒(BmNPV)穿梭载体RD-BmBacmid基础上,利用PCR方法合成两端分别含有50bp左右同源臂的绿色荧光蛋白基因(AcGFP)片段和线性化的RD-BmBacmid共转染BmN细胞或家蚕幼虫,可以一步获得重组病毒,表达绿色荧光蛋白。实验结果表明,含有AcGFP基因的重组杆状病毒构建成功,在BmN细胞和家蚕幼虫中分别表达了绿色荧光蛋白。因而,本研究成功建立了一种快速构建重组杆状病毒并能够表达GFP蛋白的新方法。; 梅文枫钱月忠史翠萍陈健; 关键词：杆状病毒共转染绿色荧光蛋白

杆状病毒表达系统表达猪流行性腹泻病毒S1蛋白及其免疫原性的研究: 猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是全球流行的极具威胁性的猪病之一，由具有高致死率的猪流行性腹泻病毒(Porcineepidemic diarrhea virus,PEDV)引起。...; 史翠萍; 关键词：猪流行性腹泻杆状病毒 S1蛋白免疫原性

一种快速稳定构建重组杆状病毒的方法: 2016年; 快速稳定地将外源基因插入杆状病毒基因组获得重组杆状病毒,是提高昆虫杆状病毒表达系统应用效率的关键技术之一。在Ac Bacmid的基础上,通过λRed同源重组技术敲除病毒基因组lef2和orf1629基因的3＇端部分序列获得RDAc Bacmid-DualKo,并用Bsu36Ⅰ线性化之后,经重叠PCR获得5＇端和3＇端各含有50 bp同源臂及以绿色荧光蛋白（GFP）基因作为外源基因的表达盒片段,再将线性化杆状病毒载体片段与表达盒片段共转染sf9细胞,3~4 d即可获得重组杆状病毒rvAcBacmid-GFP。SDS-PAGE和Western blot结果表明,被rvAcBacmid-GFP感染的sf9细胞能高效表达绿色荧光蛋白。该方法通过线性化复制缺陷型杆状病毒载体和携带有同源臂及外源基因的重叠PCR片段,在胞内完成同源重组获得重组杆状病毒,避免了繁琐的病毒空斑纯化和分子克隆操作,获得的重组杆状病毒中无不稳定因子BAC及影响下游应用研究的抗性基因,为快速构建重组杆状病毒高效表达外源基因及相关研究应用提供了新的技术平台。; 郝雪敏钱月忠史翠萍陈健; 关键词：重组杆状病毒同源重组绿色荧光蛋白

一种基于无缝克隆构建重组杆状病毒的方法: 2017年; 一些病毒复制过程涉及到断裂双链DNA的修复,主要有同源重组和非同源的末端连接2种修复形式。基于这种修复机制建立了构建重组杆状病毒的无缝克隆方法,采用该方法构建重组病毒的2个主要元件是:线性化的复制缺陷型杆状病毒载体和重组拯救DNA片段。杆状病毒载体经Bsu36Ⅰ酶切后产生2个末端,即切短了的orf1629 3'末端和细菌人工染色体(BAC)末端。其中,含克隆目的基因的重组拯救DNA片段通过同源臂同源重组修复病毒载体orf1629缺失的3'端序列,并通过细胞内的非同源末端连接修复细菌人工染色体片段(BAC)Kanr末端,从而使载体环化产生重组杆状病毒。应用该方法构建重组杆状病毒无需构建重组载体,无需进行重组后筛选,具有成本低、效率高的特点。; 钱月忠郝雪敏史翠萍陈琴何玉龙陈健; 关键词：线性化重组杆状病毒

表面展示猪流行性腹泻病毒纤突蛋白S1的重组杆状病毒及其免疫效果研究被引量：5: 2016年; 猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)纤突蛋白S1能够介导宿主抵御PEDV感染的中和抗体的产生,是PEDV基因工程疫苗研究的重要靶抗原。将PEDV的S1基因克隆至杆状病毒基因组中,构建包含PEDV S1基因的重组杆状病毒,使S1蛋白表面展示表达。以该重组病毒作为活载体疫苗皮下接种BALB/c小鼠,验证S1蛋白在重组杆状病毒中的表达及其免疫原性。Western blotting分析被重组杆状病毒感染的Sf9细胞中,PEDV S1蛋白能有效表达且呈现大小分别约120 k D和150 k D的2条带,其中前者至少比预期大30 k D左右,推测重组S1蛋白在Sf9细胞中被高度糖基化修饰。重组杆状病毒的胶体金免疫电子显微镜观测结果显示S1蛋白展示于杆状病毒表面;间接ELISA试验结果证明重组杆状病毒可以诱导产生PEDV特异性抗体,抗体效价达到1∶5 000。血清中和试验及淋巴细胞增殖试验结果证明,该重组杆状病毒能够激发有效的体液免疫及细胞免疫反应,S1蛋白在重组杆状病毒表面展示表达并具有免疫原性。; 史翠萍严婷婷崔康乐陈琴陈琴陈健; 关键词：猪流行性腹泻病毒免疫原性

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史翠萍