付钰广
- 作品数：35 被引量：47H指数：5
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 鸭坦布苏病毒E蛋白膜外区的原核表达与鉴定被引量：5
- 2013年
- 为获得鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)E蛋白膜外区的表达产物,以DTMUV安徽分离株(AH10)E基因序列设计特异性引物,扩增E基因,将其克隆至原核表达载体pET-SUMO中,构建重组表达质粒pET-SUMO-E,然后将其转化至感受态细胞E.coli Rosetta(DE3)中,并以IPTG诱导表达。经SDS-PAGE检测,获得了70ku的表达产物,与预期结果相符。Western-blot分析表明,目的蛋白能与兔抗DTMUV E蛋白多克隆血清及DTMUV鸭阳性血清发生特异性反应,显示出良好的反应活性。结果表明,成功表达了E蛋白膜外区,这一成果为DTMUV疫苗制备和诊断试剂盒的研发奠定了基础。
- 刘宗梁付钰广吉艳红李郁魏建忠朱启运
- 关键词：原核表达
- VII型新城疫病毒L基因突变的减毒疫苗株及其制备方法
- 本发明涉及一种应用反向遗传操作技术生产的Ⅶ型新城疫病毒L基因突变的减毒疫苗株及其制备方法，属于生物制品和生物技术领域，VII型新城疫病毒L基因突变的减毒疫苗株毒力均明显减弱，同时在鸡胚上具有高滴度、遗传性能稳定、与流行病...
- 朱启运吉艳红付钰广
- 文献传递
- VII型新城疫病毒L基因突变的减毒疫苗株及其制备方法
- 本发明涉及一种应用反向遗传操作技术生产的Ⅶ型新城疫病毒L基因突变的减毒疫苗株及其制备方法，属于生物制品和生物技术领域，VII型新城疫病毒L基因突变的减毒疫苗株毒力均明显减弱，同时在鸡胚上具有高滴度、遗传性能稳定、与流行病...
- 朱启运吉艳红付钰广
- 文献传递
- 一种鸭坦布苏病毒检测试剂盒
- 本发明公开一种用于鸭坦布苏病毒的一步法SYBRGreen荧光定量PCR检测试剂盒。本发明的鸭坦布苏病毒检测试剂盒内包含有根据鸭坦布苏病毒E基因保守区设计的两条特异性引物SEQ1和SEQ2。采用本发明的试剂盒进行检测，简化...
- 朱启运付钰广刘宗梁吉艳红郭建宏才学鹏
- 一种鸭坦布苏病毒检测试剂盒
- 本发明公开一种用于鸭坦布苏病毒的一步法SYBRGreen荧光定量PCR检测试剂盒。本发明的鸭坦布苏病毒检测试剂盒内包含有根据鸭坦布苏病毒E基因保守区设计的两条特异性引物SEQ1和SEQ2。采用本发明的试剂盒进行检测，简化...
- 朱启运付钰广刘宗梁吉艳红郭建宏才学鹏
- 文献传递
- VII型新城疫病毒L基因突变的减毒疫苗株及其制备方法
- 本发明涉及一种应用反向遗传操作技术生产的Ⅶ型新城疫病毒L基因突变的减毒疫苗株及其制备方法，属于生物制品和生物技术领域，VII型新城疫病毒L基因突变的减毒疫苗株毒力均明显减弱，同时在鸡胚上具有高滴度、遗传性能稳定、与流行病...
- 朱启运吉艳红付钰广
- 文献传递
- 猪树突状细胞表面分子CD103的表达及其抗血清的制备
- 2021年
- 为制备抗猪树突状细胞表面分子CD103蛋白的多克隆抗体,首先从NCBI基因库中获取查找猪源CD103的基因序列,并设计引物;其次,采集猪呼吸道淋巴结样品,提取RNA反转录为cDNA,通过PCR的方法扩增得到CD103基因片段;然后将所获扩增的CD103基因克隆入原核表达载体pET-30a(+)并构建表达重组质粒pET-30a-CD103,将构建的重组质粒转化入BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG诱导蛋白表达,用NI-NTA亲和层析的方法纯化目的蛋白;最后,将纯化的目的蛋白与ISA206佐剂混合乳化后通过背部皮下免疫途径免疫BALB/c小鼠,经3次加强免疫后收集血清获得多克隆抗体。利用ELISA、Western blot和间接免疫荧光(IFA)试验评价制备的多克隆抗体的效价和反应性。结果表明,本研究成功扩增得到猪CD103基因并成功构建重组表达质粒;利用原核表达系统成功表达了猪CD103目的蛋白。Western blot以及IFA结果显示,本研究制备的多克隆抗体特异性高,能与CD103蛋白发生特异性结合;经ELISA滴定结果显示,制备的多克隆抗体在稀释至1∶25 600倍时依旧具有良好的反应性。综上表明,本研究成功制备抗猪CD103蛋白多克隆抗体,为后期制备抗CD103单克隆抗体及研究黏膜免疫过程中CD103阳性树突状细胞的相关研究奠定了基础。
- 张韬付钰广李宝玉王金泉刘光亮
- 关键词：树突状细胞多克隆抗体
- 猪博卡病毒VP1蛋白的多克隆抗体制备及初步应用被引量：1
- 2021年
- 旨在制备猪博卡病毒(porcine bocavirus, PBoV)VP1蛋白的多克隆抗体。利用PCR技术对PBoV VP1蛋白的基因进行扩增,将所获基因克隆入原核表达载体,将重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞中诱导表达。纯化后的目的蛋白与ISA206佐剂混合后通过背部皮下免疫日本大耳白兔,3次加强免疫后,收集兔血清,利用间接ELISA、Western blot与间接免疫荧光(IFA)的方法验证并评价多克隆抗体的效价与反应性。结果显示,成功获得PBoV VP1蛋白目的基因,利用原核表达系统大量表达了VP1蛋白,并制备多克隆抗体;ELISA滴定结果显示,该抗体在稀释至12 800倍时反应性依旧良好;Western blot检测结果显示,制备的多克隆抗体可与VP1蛋白条带发生特异性结合;将PBoV感染的猪肠道组织制备冰冻切片,IFA检测结果表明,该抗体与PBoV具有良好的反应性。上述结果表明,本研究成功制备了针对PBoV VP1蛋白的兔多克隆抗体,为深入研究PBoV的VP1蛋白生物学功能奠定了一定物质基础。
- 张韬李茂林邹抒洁Manita Aryal刘光亮付钰广
- 关键词：VP1蛋白多克隆抗体
- 一种鸭坦布苏病毒抗体固相竞争ELISA检测试剂盒
- 本发明公开一种用于鸭坦布苏病毒抗体的固相竞争ELISA检测试剂盒。本发明的鸭坦布苏病毒血清学检测试剂盒包含有包被鸭坦布苏病毒灭活抗原的ELISA板，兔抗鸭坦布苏病毒的阳性血清、鸭抗鸭坦布苏病毒的阳性对照血清和鸭阴性对照血...
- 朱启运付钰广吉艳红
- 一种猪病毒性腹泻病毒5重RT-PCR检测试剂盒
- 本发明公开一种“猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪札幌病毒和猪嵴病毒”的5重RT-PCR检测方法以及试剂盒。本发明的试剂盒中包括有10条特异性扩增引物，在其使用时以待检样品的总RNA，利用6碱基随机引物...
- 刘光亮李宝玉付钰广陈佳宁兰喜丁光明
- 文献传递
