付伟
- 作品数：12 被引量：18H指数：3
- 供职机构：解放军第44医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人IL-3基因原核表达载体的构建及表达
- 2011年
- 目的:构建人IL-3基因原核表达载体pET32a-IL-3,并在大肠杆菌中诱导表达。方法:通过佛波酯(TPA)和植物球血凝素(PHA)刺激人T淋巴细胞系Jurkat细胞,增加IL-3mRNA表达水平,提取mRNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)获得cDNA,以Jurkat细胞cDNA为模板,通过PCR方法扩增得到人IL-3基因,将其克隆入原核表达载体pET32a(+)中,将重组质粒转化入大肠杆菌宿主菌株BL21中,以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白表达,并通过改变IPTG浓度,诱导时间,诱导温度等条件最终实现蛋白的可溶性表达。表达产物用SDS-PAGE检测表达情况。结果:酶切鉴定和测序结果证明成功构建了原核表达载体pET32a-IL-3。SDS-PAGE检测结果证明实现了人IL-3基因在大肠杆菌中的可溶性表达。结论:成功构建了人IL-3基因的原核表达载体并在大肠杆菌中获得了良好的表达。
- 严学倩尹郸丹付伟韩骅梁英民
- 关键词：白细胞介素3造血干细胞原核表达
- LIM结构域蛋白FHL1C抑制Notch信号途径的转录激活研究被引量：1
- 2011年
- 目的:克隆人表达FHL1C基因以及建立真核表达载体和慢病毒载体。方法:从人的骨骼肌细胞来源的cDNA中扩增并克隆人FHL1C基因的编码区,连接至pMD-18T载体酶切鉴定后测序。序列测定确认后,双酶切pMD18T-FHL1C回收片段,插入真核表达载体,构建真核表达载体pCMV-Myc-FHL1C酶切鉴定正确后,转染Hela细胞及Cos7细胞,用Western Blot检测其在转染细胞中的表达,用双荧光素报告基因系统检测其对Notch信号作用。构建FHL1C-IRES-GFP表达单元,建立慢病毒表达载体plen-ti6/V5-FHL1C-IRES-GFP,包装慢病毒后感染培养的细胞,用免疫荧光显微镜、Western Blot检测分析其在被感染的细胞中的表达。结果:通过PCR方法成功扩增了人FHL1C基因的编码区。通过转染Hela及Cos7细胞,使用Western Blot检测其蛋白水平表达,双荧光报告基因系统分析均能够下调激活的Notch信号。成功构建了FHL1C慢病毒表达载体pLenti6/V5-FHL1C-IRES-GFP,包装慢病毒,把获取的慢病毒感染细胞后通过荧光显微镜证实被感染的细胞绿色荧光蛋白正确表达,Western Blot检测证实其表达。结论:成功建立起FHL1C真核表达载体及慢病毒表达系统,为研究急性T淋巴细胞白血病与Notch信号转导通路之间的关系奠定了基础。
- 付伟秦鸿雁严学倩于恒超韩骅梁英民
- 关键词：急性T淋巴细胞白血病慢病毒NOTCH信号途径
- 应用基因芯片筛选伊马替尼和尼洛替尼处理K562细胞表达差异基因
- 付伟高晓彤梁英民
- SCL-tTA/BCR-ABL转基因慢性髓系白血病小鼠模型的建立及鉴定被引量：2
- 2017年
- 目的:建立能由Tet-off调控的慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)动物模型,为深入研究CML的发病机制、寻找治疗新方法提供实验工具。方法:通过撤除饮水中的DOX以诱导SCL-tTA/BCR-ABL双转基因小鼠的BCR-ABL在造血干/祖细胞的表达;鉴定小鼠基因型正确后检测小鼠外周血象及脾脏指数,并利用流式细胞术观察小鼠骨髓、脾脏及外周血中各系细胞的分布水平。结果:BCR-ABL实验组小鼠血象中可检测到粒细胞增多,脾脏指数明显升高;且这些双转基因小鼠的骨髓、脾脏及外周血中均可检测到髓系细胞(Gr-1^+Mac-1^+)扩增,以及T系细胞(CD3^+)、B系细胞(B220^+)的减少。结论:通过Tet-off诱导表达系统成功诱导双转基因小鼠BCR-ABL的表达,成功建立了类似于人类CM L慢性期的疾病模型。
- 林燕付伟梁英民
- 关键词：慢性髓系白血病
- Notch信号通路与白血病干细胞的关系及研究进展被引量：1
- 2015年
- 白血病是造血干细胞恶性克隆疾病,多是由染色体畸变诱发,使得造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSCs)或更早期的多能祖细胞(multipotent progenitors,MPPs)遗传学发生改变。白血病在恶性肿瘤发病率排名前十位,死亡率高,且多发生在儿童及青年。目前白血病的治疗主要以化疗为主,随着新药的研发和造血干细胞的移植,白血病的缓解率较先前有所提高,但耐药和停药后复发成为治疗的一个难题。目前Notch已经成为公认的与白血病有关的癌基因之一,所以,以Notch为靶向治疗研究可能会给我们提供新的治疗方法。本文重点就Notch与白血病干细胞的关系及治疗进展作一综述。
- 胡彬付伟梁英民
- 关键词：NOTCH白血病干细胞
- 应用Surrogate报告载体提高CRISPR/Cas9对TMEM215基因的打靶效率
- 2016年
- 目的:构建Surrogate报告载体,并利用Surrogate报告载体提高CRISPR/Cas9对HEK293T细胞TMEM215基因打靶效率。方法:构建针对人TMEM215的CRISPR/Cas9表达载体及相应Surrogate报告载体,两者共转HEK293T细胞,通过流式分析、T7EI检测、TA克隆测序等明确Surrogate报告载体对不同sgRNA打靶效率的检测及对基因修饰细胞的筛选富集作用。结果:流式分析结果表明,Surrogate报告载体成功检测出不同sgRNA的打靶效率,并筛选出高效率sgRNA;T7EI检测及TA克隆测序显示,外加嘌呤霉素抗性筛选时,Surrogate报告载体可有效富集基因修饰细胞。结论:成功构建Surrogate报告载体,并利用Surrogate报告载体提高CRISPR/Cas9对HEK293T细胞TMEM215基因的打靶效率。
- 高晓彤付伟陈娟娟胡彬李丹慧黄斯勇李国辉张阳萍刘利梁英民
- 黑色素瘤抗原家族被引量：4
- 2006年
- 20世纪90年代以来,人们对肿瘤抗原的性质、结构、表位以及利用肿瘤抗原对肿瘤进行治疗等方面有了深入的认识,特别值得关注的是黑色素抗原(MAGE)的研究。MAGE基因主要表达于以黑色素瘤为主的恶性肿瘤组织中,人们可以利用MAGE及其产物的特异性,针对肿瘤进行治疗。
- 付伟陈广生
- 关键词：抗原基因表达MAGE基因免疫疗法
- 小鼠紧密连接蛋白ZO-2真核表达载体的构建和表达
- 2012年
- 目的:克隆小鼠紧密连接蛋白ZO-2(zonula occludens protein2)基因构建其真核表达载体,并验证其在293T细胞系中的表达,为进一步研究其功能奠定基础。方法:从小鼠淋巴结来源的cDNA中分三段分别扩增,通过基因克隆方法获得紧密连接蛋白ZO-2基因全长,连接至pMD-18T载体中,酶切测序正确后,插入pEGFP-C2载体中,构建真核表达载体pEGFP-C2-ZO2。酶切正确后,瞬时转染入293T细胞中,48h后荧光显微镜观察其绿色荧光GFP融合蛋白的表达,并用Western blot检测其在转染细胞中的蛋白水平表达。结果:通过酶切鉴定和测序结果证明成功克隆了ZO-2基因,western blot结果表明成功构建了真核表达载体pEGFP-C2-ZO2。结论:小鼠紧密连接蛋白ZO-2基因的获得和真核表达载体pEGFP-C2-ZO2的成功构建为下一步研究其生物学功能奠定了基础。
- 朱冰柯秦鸿雁付伟梁世倩曹秀丽韩骅梁英民
- 关键词：293T细胞真核表达
- LIM蛋白FHL1C对急性T淋巴细胞白血病的作用和机制研究
- 急性T细胞淋巴细胞白血病/(T-cell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL/)是来源于早期T淋巴细胞的高侵袭性恶性肿瘤。目前,治疗仍以化疗作为首选和基础疗法,但超过50/%患者出现复发...
- 付伟
- 关键词：NOTCH信号途径急性T淋巴细胞白血病细胞凋亡
- 文献传递
- Notch信号与急性T细胞淋巴瘤白血病关系的研究进展被引量：4
- 2012年
- T细胞急性淋巴细胞白血病（T—ALL）是小儿白血病常见的一种类型。研究发现超过50％的T—ALL患者存在Notchl突变激活，这使得人们对Notch信号致癌机制产生很大兴趣，并且提出针对Notch信号通路在T—ALL中作用而制备靶向药物的构想。小分子γ分泌酶抑制剂（GSI）是可以阻止Notchl激活的一个关键蛋白，但临床使用GSI治疗T—ALL疗效不佳。新的治疗策略旨在优化抗Notchl疗法，其中包括与分子靶向药物和糖皮质激素联合疗法等。重点回顾Notchl的分子基础、致癌作用机制及Notchl突变在T—ALL治疗中的临床意义。
- 付伟秦鸿雁梁英民
- 关键词：NOTCHL白血病T细胞分子靶向治疗
