黎亮
- 作品数：8 被引量：15H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- JTV1对K562细胞增殖和凋亡的影响及其机制被引量：4
- 2011年
- 目的观察上调JTV1基因的表达对人白血病K562细胞系增殖与凋亡的影响并探讨其机制。方法将携带有JTV1基因的pcDNA3.1-JTV1载体转染人K562细胞作为阳性转染组,转染pcDNA3.1空载体作为空载体转染组,未转染的K562细胞为未转染组。通过集落形成实验检测各组K562细胞的增殖能力,采用流式细胞术与Annexin-PI双染色结合分析细胞周期和细胞凋亡率,同时采用RT-PCR法检测JTV1基因及凋亡相关基因Bcl-2、Bax、C-myc mRNA水平的变化,采用Western blotting检测基因JTV1及凋亡相关基因Bcl-2、Bax、C-myc蛋白水平的变化。结果集落形成实验结果显示上调JTV1基因表达后K562细胞的增殖能力明显降低。流式细胞术与Annexin-PI双染色检测结果显示,与空载体转染组及未转染组相比,阳性转染组K562细胞的G期细胞比例明显升高(P<0.05);阳性转染组中Bax基因的mRNA水平和蛋白水平较空载体转染组及未转染组均明显上升,而Bcl-2基因和C-myc基因的mRNA水平和蛋白水平则明显下调(P<0.05)。结论 JTV1基因过表达可能通过抑制基因Bcl-2和C-myc的表达增强基因Bax的表达,从而抑制K562细胞系的增殖并促进其凋亡。
- 吴燕刘北忠王翀钟梁朱丹王春光金丹婷高艳军黎亮
- 关键词：基因基因BCL-2基因C-MYC基因BAXK562细胞
- GINS2基因siRNA真核表达质粒的构建及其对NB4细胞凋亡的影响被引量：3
- 2012年
- 目的构建GINS2基因siRNA真核表达质粒,并检测其对NB4细胞凋亡的影响。方法人工合成针对GINS2基因的4组siRNA干扰序列和1组无同源性的序列,测序鉴定后转染低传代人早幼粒细胞系NB4细胞,经G418筛选后,通过QRT-PCR、Western blot检测重组质粒对NB4细胞中GINS2基因mRNA转录水平和蛋白表达水平的影响;流式细胞术检测NB4细胞的凋亡情况。结果 5组重组质粒经测序证明构建正确,4组干扰质粒转染NB4细胞后,细胞中GINS2基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平均有所降低,其中干扰组1基因干扰率达50%,蛋白相对表达量为56%;干扰组1细胞凋亡率为32.54%,较正常对照组和NC组明显上升(P<0.01)。结论成功构建了GINS2基因siRNA真核表达质粒,抑制GINS2基因的表达可促进NB4细胞的凋亡,为进一步研究GINS2基因在白血病中的作用奠定了基础。
- 高艳军刘北忠钟梁初晨吴秀娟黎亮张曦高远梅胡秀秀
- 关键词：RNA干扰NB4细胞细胞凋亡
- JTV1基因siRNA重组表达质粒的构建及其对K562细胞增殖的影响
- 2012年
- 目的构建JTV1基因siRNA重组表达质粒,转染K562细胞,鉴定其干扰作用。方法人工合成靶向JTV1基因的siRNA干扰序列,克隆至载体pGeneSil-1上,构建重组表达质粒pGeneSil-1-JTV1-1.1 siRNA,转染人K562细胞,经G418稳定筛选后,采用RT-PCR及Western blot法分别检测重组表达质粒对K562细胞中JTV1基因转录和翻译的影响;MTT法检测抑制JTV1基因的表达对K562细胞增殖的影响。结果重组表达质粒pGeneSil-1-JTV1-1.1 siRNA经测序证明构建正确;其转染K562细胞后,细胞JTV1基因的转录和翻译水平均明显降低;抑制JTV1的表达可促进K562细胞增殖。结论已成功构建了pGeneSil-1-JTV1-1.1 siRNA质粒,并获得了稳定的JTV1基因表达受抑的K562细胞克隆,为进一步研究JTV1基因的功能及其与肿瘤的相关性奠定了基础。
- 吴燕刘北忠王翀钟梁朱丹王春光黎亮高艳军
- 关键词：RNA干扰K562细胞
- 抑制JTV1基因表达对大黄素引起的K562细胞凋亡的影响及其机制被引量：4
- 2011年
- 目的探讨抑制JTV1基因表达对大黄素引起的人白血病K562细胞系凋亡的影响及其机制。方法将pGene-Sil-1-JTV1-1.1 siRNA重组质粒、pGeneSil-1-N.1阴性对照质粒及pGeneSil-1空载体分别转染人K562细胞,通过集落形成试验检测细胞的增殖能力;各组转染K562细胞经80μmol/L大黄素处理后,流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡率,RT-PCR法检测细胞中凋亡相关基因Bcl-2、Bax、C-myc转录水平的变化,Western blot法检测Bcl-2、Bax、C-myc翻译水平的变化。结果抑制JTV1基因的表达后,K562细胞的增殖能力明显提高;抑制JTV1基因表达可使经80μmol/L大黄素处理的K562细胞G1期细胞比例下降,并减轻大黄素引起的细胞凋亡,同时,细胞Bax基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平均明显下降,而Bcl-2基因和C-myc基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平则明显上调。结论抑制JTV1基因表达可能通过上调Bcl-2和C-myc基因的表达,下调Bax基因的表达,促进K562细胞的增殖,并阻止细胞凋亡。
- 吴燕刘北忠王翀朱丹王春光金丹婷高艳军黎亮
- 关键词：K562细胞细胞凋亡BCL-2基因C-MYC基因BAX基因
- 干扰GINS2表达对HL60细胞增殖和凋亡的影响被引量：6
- 2013年
- 目的:探讨靶向抑制GINS2基因表达后对人早幼粒细胞白血病细胞株HL60增殖和凋亡的影响及其机制。方法:RT-PCR分别检测GINS2基因在三株白血病细胞HL60、U937、THP-1的表达。设计与合成针对GINS2基因的干扰序列,稳定转染高表达该基因的HL60细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达情况;RT-PCR和Western blot分别检测各组细胞转染后mRNA和蛋白质水平;MTT法检细胞的增殖和凋亡情况;流式细胞术分析细胞的凋亡率;Western blot检测凋亡相关蛋白的表达。结果:在三株白血病细胞株中,GINS2的表达量由低到高依次是:THP-1,U937,HL60。干扰质粒转染HL60细胞后,与阴性对照组及未处理组相比,干扰组GINS2的mRNA和蛋白质水平均显著降低,且细胞的增殖能力明显受抑。同时,凋亡相关蛋白Bax表达水平显著增高而Bcl2显著降低。结论:干扰GINS2基因表达后,其mRNA和蛋白质水平均显著降低,可通过上调Bax表达,下调Bcl2表达来抑制HL60细胞增殖并促进其凋亡。
- 张曦刘北忠高艳军黎亮高远梅胡秀秀马鹏鹏钟梁
- 关键词：细胞凋亡HL60细胞BAXBCL2
- RANBP9在早幼粒细胞白血病发生中的作用研究
- 第一部分: PML Coiled-coil结构域与RANBP9相互作用的验证 目的：早幼粒白血病基因的Coiled-coil结构域(PML-C)和Ran结合蛋白9(RANBP9)之间相互作用的体外验证。 方法：将pG...
- 黎亮
- 关键词：急性早幼粒细胞细胞凋亡白血病免疫共沉淀酵母双杂交
- JTV1基因真核表达质粒的构建及其在K562细胞中的表达
- 2011年
- 目的 构建JTV1基因真核表达质粒并稳定转染人白血病细胞系K562,检测转染细胞中JTV1基因mRNA和蛋白的表达水平及其对K562细胞增殖的影响。方法从人外周血单个核细胞中克隆JTV1基因,并将其插入pcDNA3.1表达载体中,构建真核重组表达质粒pcDNA3.1-JTV1,经脂质体介导转染K562细胞,采用RT-PCR和Western blot法鉴定转染细胞中JTV1基因mRNA和蛋白的表达水平;MTT法检测JTV1稳定表达对K562细胞增殖的影响。结果重组表达质粒pcDNA3.1-JTV1经双酶切及测序证实,目的基因已插入质粒中;人JTV1基因能在K562细胞中稳定表达;JTV1具有抑制K562细胞增殖的作用。结论已成功构建了JTV1基因真核表达质粒,并获得了稳定表达人JTV1基因的K562细胞克隆,为进一步研究人JTV1基因的功能及其与白血病细胞增殖及凋亡的相关性提供了细胞模型。
- 吴燕刘北忠王翀钟梁朱丹王春光金丹婷高艳军黎亮
- 关键词：真核细胞基因表达K562细胞细胞增殖
- PML coiled-coil结构域与RAN结合蛋白9相互作用的验证
- 2012年
- 目的验证前髓细胞性白血病的卷曲螺旋结构域（PML—C）和RAN结合蛋白9（RANBP9）之间的相互作用。方法构建分别表达诱饵蛋白PML—C和靶蛋白RANBP9的载体pGBKT7-PML-C和pACT2-RANBP9，然后转人酵母AH109，培养3～5d后对其是否有胞内相互作用进行检测。将目的片断PML-C和RANBP9再次构建于真核生物表达载体pCMV—HA和pCMV—myc里，然后共转染人胚肾293细胞里（HEK293），最后对其是否有体外相互作用通过免疫共沉淀和免疫印迹进行分析。结果在共转化了质粒pGBKT7-PML—C和pACT2-RANBP9的AH109酵母平板里观察到蓝色菌落生长。用抗HA多克隆抗体对共转染过重组质粒的HEK293细胞的蛋白提取物进行免疫共沉淀，再用抗myc单克隆抗体作为一抗进行免疫印迹，最终检测出融合蛋白myc—RANBP9条带。结论酵母双杂交实验验证了PML—C和RANBP9之间存在胞内相互作用，同时免疫共沉淀实验也从体外验证了它们之间的相互作用。
- 黎亮刘北忠钟梁朱丹王翀高艳军吴秀娟初晨
- 关键词：白血病蛋白质相互作用酵母双杂交系统免疫共沉淀
