高继明
- 作品数：26 被引量：40H指数：3
- 供职机构：西北农林科技大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省自然科学基金山东省优秀中青年科学家科研奖励基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 非肌肉肌球蛋白重链II-A在PRRSV感染细胞过程中的作用研究
- 高继明
- 文献传递网络资源链接
- Ⅰ型鸭肝炎病毒SG株的分离鉴定及全基因组序列测定与分析
- 自2007年12月山东寿光某爆发Ⅰ型鸭肝炎养鸭场分离一株Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)，命名为SG株,对山东寿光地区的疑似鸭病毒性肝炎的病鸭肝组织进行病原分离，通过鸭胚尿囊腔接种分毒、血凝实验、标准血清中和实验、动物回归实...
- 刘标高继明辛英豪刘少宁王波姜世金
- 关键词：鸭病毒性肝炎基因组序列
- 文献传递
- 抗独特型抗体鉴定猪繁殖与呼吸综合征病毒新型细胞受体
- 研究背景:猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV]属于动脉炎病毒属有囊膜的单股正链RIgA病毒。病毒细胞受体是介导病毒感染宿主细胞的关键因素。目前已知的参与PRRSV感染的细胞分子有硫酸乙酰肝素蛋白多糖一类肝素分子,唾液酸粘...
- 高继明周恩民
- 关键词：抗独特型抗体细胞受体PRRSV
- 文献传递
- 敲低非肌肉肌球蛋白IIA表达对猪繁殖与呼吸综合征病毒感染Marc-145细胞的影响
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染宿主细胞是通过易感细胞上不同的病毒受体介导完成的。目前关于PRRSV细胞上受...
- 高继明马晓春孔宁张冲王向鹏周恩民
- 文献传递
- 非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A羧基端在PRRSV感染Marc-145细胞中的作用被引量：3
- 2011年
- 为研究非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A(NMHCⅡ-A)羧基端在猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染Marc-145细胞中的作用,本实验通过提取Marc-145细胞总RNA,RT-PCR方法扩增NMHCⅡ-A羧基端930 bp基因PRA,并进行核苷酸序列测定。将该基因连接到pEGFP-N1载体中,采用双酶切和PCR方法对重组质粒pEGFP-N1-PRA进行鉴定。将pEGFP-N1-PRA转染至Marc-145细胞后感染PRRSV,测定TCID50值及间接免疫荧光(IFA)检测PRA对PRRSV感染Marc-145细胞的影响。TCID50及IFA结果显示,与未转染的Marc-145细胞相比,转染pEGFP-N1-PRA的Marc-145细胞的PRRSV感染能力降低50%。本研究初步证明了PRA编码蛋白在PRRSV感染细胞中的作用,为PRRSV感染机制的研究提供了一定的依据。
- 刘宁宁张璐吕军华高继明吴海珍肖一红周恩民
- 关键词：克隆测序
- 猪波形蛋白对PRRSV感染Marc-145细胞的抑制作用被引量：3
- 2012年
- 为了研究波形蛋白在介导猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染细胞过程中的作用,利用RT-PCR方法从PRRSV非易感细胞系猪肾细胞系PK-15细胞中扩增目的基因,克隆入pET-28a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。表达的重组猪波形蛋白经SDS-PAGE和Western blot鉴定和纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。利用病毒抑制试验检测重组猪波形蛋白及多克隆抗体在PRRSV感染Marc-145细胞过程中的作用。结果表明,成功扩增猪波形蛋白基因并克隆入pET-28a载体,经诱导后得到高效表达,纯化后免疫兔子产生高价血清抗体(105)。病毒阻断结果表明,猪波形蛋白及多克隆抗体均能阻断PRRSV感染Marc-145细胞。这为以波形蛋白为基础的PRRSV受体阻断抑制剂的研究提供了实验依据。
- 马晓春孔宁高继明王彤彤黄柏成赵钦肖一红周恩民
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒波形蛋白病毒抑制受体阻断
- 我国自然发病鸭群中鸭圆环病毒的流行病学调查被引量：20
- 2009年
- 为了解鸭圆环病毒(Duck circovirus,DuCV)在我国鸭群中的感染状态,从我国养鸭业比较集中的山东、江苏、四川、福建、广东5个省份36个鸭群采集临床有发病表现的343只病、死鸭的病理组织样品,以提取的组织DNA为模板通过特异性斑点杂交和PCR方法检测DuCV的感染情况。结果显示上述5个省份的鸭均检出了DuCV,病、死鸭中DuCV的个体阳性率为81.63%(280/343),群体阳性率为94.44%(34/36)。结果表明我国鸭群中已普遍存在DuCV的感染。
- 刘少宁张兴晓陈智高继明魏秀丽孔义波朱岩丽姜世金
- 关键词：鸭圆环病毒流行病学调查
- 高致病性PRRSV感染处于不同细胞周期Marc-145细胞的比较分析
- PRRSV有着比较严格的细胞嗜性,只有在PAM、CL2621、MA104及其克隆株Marc-145等细胞系上生长,而目前用于实验室研究PRRSV治病机理的基础细胞系为Marc-145。为了探讨高致病性PRRSV对Marc...
- 孔宁高继明马玉萍赵钦王承宝肖一红周恩民
- 关键词：PRRSV细胞周期MARC-145细胞
- 文献传递
- Ⅰ型鸭肝炎病毒LY0801株的分离鉴定及致病性研究
- I型鸭肝炎病毒是雏鸭一种急性和高度致死性传染病(Woolcock，P.R.et al.2003)，主要感染1～3周龄雏鸭，死亡率高达90％以上。该病1949年最早报道于美国长岛，并于1950年用鸡胚分离到DHV-I(Le...
- 高继明
- 关键词：克隆测序卵黄抗体鸭肝炎病毒
- 文献传递
- PRRSV细胞受体CD163 SRCR5-SRCR6多克隆抗体的制备被引量：2
- 2014年
- 【目的】制备鼠抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）细胞受体CD163 SRCR5-SRCR6多克隆抗体。【方法】提取PAM细胞总RNA，通过RT-PCR方法获得CD163 SRCR5-SRCR6（第1 417～2 136 bp，共720个bp）基因，将其克隆到pET-28a（＋）载体上，构建重组表达载体pET-28a（＋）-CD163，经酶切、PCR鉴定和测序验证后转化大肠杆菌，在BL21（DE3）中诱导重组目的蛋白表达，然后用Ni-NTA方法纯化目的蛋白，免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体，通过间接ELISA和IFA方法检测多克隆抗体效价，并初步鉴定多克隆抗体血清结合细胞及阻断PRRSV感染细胞的活性。【结果】克隆了720 bp的CD163 SRCR5-SRCR6基因，成功构建了pET-28a（＋）-CD163重组表达载体；SDS-PAGE结果表明，CD163 SRCR5-SRCR6重组蛋白被成功诱导并以包涵体形式表达；Western blot结果表明，重组蛋白具有良好的免疫原性，间接ELISA方法测得免疫Balb/c小鼠制备的抗CD163 SRCR5-SRCR6重组蛋白的多克隆抗体效价可达105；IFA试验结果显示，制备的抗CD163 SRCR5-SRCR6重组蛋白的多克隆抗体可与Marc-145细胞结合，且在1∶20、1∶40倍稀释时，能部分阻断高致病性PRRSV SD16毒株感染Marc145细胞。【结论】用大肠杆菌原核表达系统成功诱导表达了CD163 SRCR5-SRCR 6重组蛋白，用重组蛋白免疫小鼠获得了高效价多克隆抗体，其可以结合细胞并阻断PRRSV感染细胞。
- 马玉萍孔宁王向鹏高继明赵钦王承宝周恩民
- 关键词：PRRSV多克隆抗体
