陈大玮
- 作品数：10 被引量：44H指数：5
- 供职机构：深圳大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：深圳市科技计划项目国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学环境科学与工程医药卫生农业科学更多>>
- 点带石斑鱼抗菌肽hepcidin基因克隆及其成熟肽的原核融合表达被引量：2
- 2011年
- 目的克隆点带石斑鱼hepcidin前体cDNA序列,构建其成熟肽pET-32a融合表达载体。结论根据已报道的硬骨鱼类hepcidin cDNA序列设计简并引物,以点带石斑鱼(Epinephelelus malabaricus)肝脏为材料,通过RT-PCR扩增hepcidin cDNA序列,用比对推导的氨基酸序列预测其成熟肽段。再将成熟肽cDNA序列亚克隆至pET-32a构建原核表达并进行原核融合表达。结果获得点带石斑鱼hepcidin-like抗菌肽前体cDNA序列1条,GenBank登录号为HM474788。DNA序列的Blast分析以及推导氨基酸序列NJ进化树分析表明,HM474788是点带石斑鱼第1条报道的抗菌肽hepcidin cDNA序列。成功构建了该序列的成熟肽原核融合表达载体pET-32a-hepcidin(EM1),并成功在大肠杆菌origami(DE3)中表达。结论成功克隆点带石斑鱼hepcidin-like抗菌肽前体cDNA序列,成熟肽成功在大肠杆菌中融合表达,为后续有关石斑鱼hepcidin的功能研究与实践应用奠定重要基础。
- 陈大玮邓利李荔彭永鹤刘志刚
- 关键词：点带石斑鱼抗菌肽HEPCIDIN分子克隆原核融合表达
- 深圳蛇口港及其临近海域海水有机锡污染被引量：6
- 2008年
- 以正己烷为萃取剂、四乙基硼化钠为衍生剂对海水样品进行同步化液-液萃取衍生反应,采用气象色谱-火焰光度检测法进行有机锡定性及定量分析,研究了深圳市蛇口港及其临近海域受有机锡污染的状况.结果显示,在所测定的海水中均检测出了三丁基锡、二丁基锡和一丁基锡化合物,三者的平均浓度分别为80、62和49ng·L-1,但本方法可能不适合三苯基锡的定性定量分析.港区个别站位海水三丁基锡浓度高达152ng·L-1,在深圳湾海水样品中还检测出了信号极强的多个未知峰,表明深圳蛇口港及临近海域海水有机锡的污染程度已经较为严重.蛇口港区有机锡污染可能与繁忙的航运以及珠江口水域存在的普遍性有机锡污染有关,而深圳湾有机锡污染一方面可能是来自蛇口港区有机锡污染的扩散,另一方面可能来自深圳河的排污.位于深圳湾的国家级红树林及鸟类自然保护区是一个对生物多样性的维持及侯鸟的保护都极为重要的湿地生态系统,该海区受有机锡污染问题需要引起高度重视,长期的有机锡污染必将对该湿地生态系统造成严重危害.
- 邓利倪睿钟毅陈大玮
- 关键词：有机锡丁基锡蛇口港
- 牛奶主要过敏原β-乳球蛋白的一基因片段的克隆、表达、纯化及抗原性鉴定被引量：8
- 2011年
- 目的克隆并表达牛奶中主要过敏原β-乳球蛋白(β-LG)的一基因片段,并检测其抗原性。方法利用RT-PCR技术克隆β-LG蛋白基因片段,测序后将目的片段克隆入原核表达质粒pET载体,转化至大肠杆菌origami,经IPTG诱导表达,获得重组β-LG片段蛋白。用Ni2+亲和层析柱纯化,用Western blot和ELISA检测重组蛋白与牛奶过敏患者血清IgE的结合活性。结果克隆获得β-LG片段蛋白,其开放阅读框基因为264 bp(含终止密码子),编码87个氨基酸。获得的重组β-LG片段蛋白既以包涵体形式存在又以可溶性形式存在,用可溶性的蛋白进行纯化,经Western blot和ELISA检测具有较好的抗原性。结论成功地克隆和表达了β-LG的一基因片段,为后续牛奶的免疫原性研究提供参考,也为研制牛奶主要过敏原的单克隆抗体和制备其主要过敏原的检测试剂奠定了基础。
- 李建杰陈大玮闫浩杨成彬邓利刘杰刘志刚黄钟
- 关键词：Β-乳球蛋白抗原性基因
- 鸡蛋主要过敏原卵类粘蛋白基因的克隆及原核载体构建与表达被引量：4
- 2009年
- 目的:本研究利用PET表达载体克隆,表达鸡蛋主要过敏原卵类粘蛋白基因,为鸡蛋过敏疾病的特异性诊断和治疗以及进一步的实验研究奠定了一定的基础。方法:提取鸡输卵管组织总RNA,利用RT-PCR技术扩增卵类粘蛋白基因(ovomucoid,OVM),并与已知序列进行同源性比较,将该片段连接入原核表达载体pET-28a,IPTG诱导表达目的蛋白。结果:成功克隆鸡蛋主要过敏原卵类粘蛋白(ovomucoid,OVM)的全长基因,该基因的开放阅读框长度为633bp(包括终止密码子),编码210个氨基酸,与GenBank提供的OVM基因序列同源性达99%。该序列编码的蛋白为小分子量蛋白,相对分子质量约为21kD,与理论值均相符。IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析表明目的蛋白在宿主大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达。结论:本研究采用体外重组的方法克隆出卵类粘蛋白基因,并实现在大肠杆菌中大量表达,这为后续鸡蛋食品基础性研究奠定基础。
- 陈大玮邬玉兰刘志刚吴序栎孔小丽
- 关键词：鸡蛋基因克隆原核载体
- 棕点石斑鱼Piscidin样肽基因的克隆及其成熟肽的原核表达被引量：3
- 2011年
- 以简并引物通过RT-PCR从重要经济海水鱼类棕点石斑鱼Epinephelus fuscoguttatus白细胞中扩增出一条388bp具有完整编码框的cDNA序列。Blast分析初步显示,该序列属于鱼类抗菌肽Piscidin家族的一员,将其命名为棕点石斑鱼Piscidin样肽（GU592793）,推导氨基酸序列具有界定鱼类Piscidin的以下共同特征：（1）预测的信号肽序列与其他Piscidin的同源性较高,在60%~95%之间;（2）推测的成熟肽N端6个氨基酸残基富含Phe、Ile及His;（3）成熟肽第8个和第13个氨基酸位点均为Gly。NJ进化树分析表明,该cDNA推导的氨基酸序列与赤点石斑鱼Epinephelusakaarapiscidin-like peptide（ACE78290）、斜带石斑鱼Epinephelus coioidesPiscidin-like peptide（ACE78291）以高达81%的支持率聚为一支。也表明本研究成功克隆到棕点石斑鱼首条PiscidincDNA序列。推测的成熟肽为两亲性阳离子肽,等电点12.48,Schiffer-Edmunson预测其二级结构呈α螺旋构型。将推测的成熟肽序列亚克隆至pET-32a构建融合表达载体pET-32a-pis（EF）,并在大肠杆菌E.coliOrigami（DE3）中成功表达出融合蛋白,以1mmol/ml IPTG于30℃进行诱导表达,4 h可获得大量表达,目的蛋白以包涵体形式存在。
- 陈大玮邓利何凡邱聪龄马一见刘志刚
- 关键词：抗菌肽基因克隆原核表达
- 克氏原螯虾主要变应原原肌球蛋白的一个片段区基因的克隆表达、纯化及免疫原性鉴定被引量：8
- 2011年
- 克隆克氏原螯虾主要过敏原原肌球蛋白的一个片段区基因,表达并纯化该蛋白,检测其免疫原性.提取克氏原螯虾总RNA,设计特异性引物,RT-PCR克隆得到目的基因;将目的基因连入pMD19-T载体,提质粒酶切鉴定并测序;将测序正确的片段连入原核表达载体pET-32a(+)上,并转入BL21(DE3)宿主表达菌中;IPTG诱导表达;通过Ni2+亲和层析(FPLC)纯化目的蛋白;利用Western-blotting和ELISA检测该重组蛋白的免疫原性.克隆获得目的基因,其片段长为291 bp,编码97个氨基酸.重组蛋白纯化后经SDS-PAGE鉴定,目的蛋白大小与理论值相符.Western-blotting和ELISA结果表明该蛋白与克氏原螯虾过敏病人混合血清中IgE结合,具有免疫原性.
- 易海涛夏立新刘芳闫浩黄钟汤慕瑾陈大玮刘志刚
- 关键词：克氏原螯虾原肌球蛋白变应原克隆表达纯化免疫印迹
- 深圳蛇口港及深圳湾潮间带动物的有机锡污染被引量：5
- 2009年
- 以异辛烷为萃取剂、四乙基硼化钠为衍生剂对样品进行同步化液-液萃取衍生反应,采用气象色谱-火焰光度检测法,研究了深圳蛇口港及深圳湾海域潮间带动物的有机锡污染状况。结果显示,所有站位采集的双壳类体内普遍检测出三苯基锡、三丁基锡及其降解产物二丁基锡,含量分别为127.1～349.1、6.3～380.8及2.7～99.9ng/g(湿重)。采自赤湾和东角头的渔舟蜒螺体内存在较高含量的三苯基锡567.3～651.6ng/g(湿重)。所有软体动物均未检测出单丁基锡。采自红树林的纹藤壶含127.1ng/g(湿重)的三苯基锡,但未检测出丁基锡。文章结果与国内外已有的相关数据比较表明,蛇口港潮间带动物已经受到较严重的有基锡污染,深圳湾的海洋生物也受到一定程度的污染。深圳湾红树林国家自然保护区对于生物多样性的维持及侯鸟的保护都极其重要,该海区的有机锡污染问题需要引起高度重视。
- 邓利黎韵陈大玮罗学峰丘红梅
- 关键词：有机锡潮间带软体动物蛇口港
- 深圳大鹏湾和大亚湾近岸海水及潮间带动物的有机锡污染被引量：5
- 2010年
- 调查了深圳大鹏湾及大亚湾近岸海水及其潮间带动物有机锡的污染状况。结果显示,大鹏湾海水中三丁基锡(TBT)和二丁基锡(DBT)的含量分别为21.13—25.03和10.22—18.68ng·L-1;大亚湾中海水中TBT和DBT的含量分别为nd(低于检测限)—7.63和nd—8.56ng·L-1,所有水样均未检测出单丁基锡(MDT)。大鹏湾潮间带软体动物(近江牡蛎Ostrea rivularis Gould、团聚牡蛎Ostrea glomerata Gould、单齿螺Monodonta labio等)体内TBT、DBT、MDT、三苯基锡(TPT)的含量分别为3.02—26.48、nd—2.65、nd—1.57、13.10—164.08ng·L-1(湿重);大亚湾潮间带软体动物体内TBT、DBT、MDT、TPT的含量分别为nd—17.67、nd—1.50、nd、nd—17.66ng·L-1(湿重)。与国内外其他海港水体和软体动物的调查结果相比,大亚湾受有机锡污染的程度相对较轻,但大鹏湾的污染程度则不容忽视。由此可见,我国应尽早制定法规限制有机锡类化合物的应用。
- 邓利陈大玮黎韵罗学峰丘红梅
- 关键词：有机锡潮间带
- 斜带石斑鱼抗菌肽hepcidin基因克隆及其成熟肽的原核融合表达被引量：11
- 2011年
- 文章根据已报道的硬骨鱼类hepcidin cDNA序列设计简并引物，通过RT—PCR从重要海水经济鱼类斜带石斑鱼（Epinephelus coioides）肝脏中扩增出1条具有完整开放阅读框的246bpcDNA序列，Blast分析表明该序列是鱼类hepcidin基因家族的一员，被命名为斜带石斑鱼hepcidin样抗菌肽前体，该cDNA所推导的氨基酸序列有如下特点：1）信号肽序列与多数鱼类hepcidin信号肽的同源性在67％～87％之间；2）C端20个氨基酸序列具有绝大多数动物hepcidin成熟肽的共同典型保守序列特征，即在对应位置具有8个Cys；3）序列中不具有已报道的hepcidin前体肽转化酶作用典型基序[RX（K／R）R]；4）与GenBank中已注册的2条斜带石斑鱼hepcidincDNA序列（GU391241和GU391242）所推导的氨基酸序列同源性分别为36％和33％，且NJ进化树显示不与这2条序列聚为一枝，表明该序列是斜带石斑鱼hepcidin基因家族中一种新亚型，其预测成熟肽融合表达载体成功在大肠杆菌（Escherichiacoli）中表达，为后续研究奠定基础。
- 陈大玮邓利刘志刚孟铂渊马一见
- 关键词：斜带石斑鱼抗菌肽HEPCIDIN分子克隆原核融合表达
- 鸡蛋主要过敏原卵类粘蛋白基因的克隆及原核载体构建与表达
- 目的通过分子生物学技术克隆鸡蛋中主要过敏原卵类粘蛋白基因,并实现该蛋白的原核表达。方法提取鸡输卵管组织总RNA,利用RT-PCR技术扩增卵类粘蛋白基因(ovomucoid,OVM),并与已知序列进行同源性比较,将该片段连...
- 陈大玮邓利李静
- 文献传递
