郑恩金
- 作品数：12 被引量：16H指数：2
- 供职机构：东南大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金广西壮族自治区卫生厅中医药科技专项课题更多>>
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- 转录因子Eha直接调控迟缓爱德华菌的靶基因
- 2019年
- 目的 Eha是一种重要转录调控因子,它可以影响迟缓爱德华氏菌(Et)的胞内存活,本实验探究Eha直接调控的靶基因如何抵御巨噬细胞杀灭细菌的分子机制。方法构建pGEX-4T-ehaflag重组质粒,电击导入eha基因缺失株的ET-13菌,得到Cehaflag ET13重组菌;用Western blot检测重组菌Eha-Flag融合蛋白的表达,并用细菌胞内存活实验检测细菌EhaFlag融合蛋白的活性;我们釆用染色质免疫共沉淀(CHIP)技术,用抗Flag标签抗体对靶基因沉淀Eha-DNA片段,除去结合的蛋白并纯化DNA片段;以RNA-Sequencing的差异表达基因设计引物,以CHIP得到的DNA样品为模板,进行qRT-PCR; PCR扩增靶基因的启动子区域,构建了pBAD-P_靶lac Z重组质粒,电击分别导入ET-13野生株和eha基因缺失株,比较它们β-半乳糖苷酶活性的差异;SDS-PAGE电泳比较野生株和缺失株外膜蛋白、厌氧C4二羧酸转运蛋白DcuA1和鞭毛钩蛋白FlgK表达的差异,并用细菌胞内存活实验比较野生株和缺失株的差异。结果 Western blot表明,Cehaflag ET13重组菌能够表达Eha-Flag融合蛋白;细菌胞内存活实验表明,该融合蛋白完全可以恢复缺失株在胞内降低的生存能力,Flag融合标签不影响Eha蛋白的功能;通过qPCR鉴定CHIP,富集到Eha的结合靶点,最终筛选出10个Eha直接结合的基因;通过野生株和缺失株中β-半乳糖苷酶活性的差异,证明eha基因对5个靶基因启动子有直接调控作用;通过检测野生株和缺失株表型的差异,证明eha基因对靶蛋白DcuA1,TnaA和FlgK的表达和活性有调控作用。结论 Eha可以通过直接调控这些靶基因,使Et菌在巨噬细胞内的存活受到影响。
- 田畅刘念郑恩金高大庆陆承平
- 关键词：迟缓爱德华氏菌转录调控因子CHIP
- 土龙祛疣洗剂对尖锐湿疣皮损内cFLIP-TRAIL凋亡通路影响的研究被引量：2
- 2016年
- 目的:探讨土龙祛疣洗剂对尖锐湿疣患者皮损内c FLIP-TRAIL凋亡通路的影响。方法:将57例尖锐湿疣患者随机分为治疗组29例和对照组28例;治疗组予土龙祛疣洗剂治疗,对照组予液氮冷冻治疗,治疗6周后观察疗效及复发情况。收集皮损标本,分别采用原位杂交法、免疫组化法检测皮损内HPV病毒感染亚型及c FLIP-TRAIL和CXCL10/IP10蛋白的表达。结果:两组临床疗效比较,差异无统计学意义(P>0.05),治疗组复发率低于对照组。治疗组患者治疗后皮损中c FLIP-TRAIL明显上调(P<0.05),可能与CA预后密切相关;治疗组患者治疗前后表皮Bax、Bcl-2蛋白变化不明显(P>0.05);患者皮损中CXCL10/IP10与c FLIP-TRAIL指数呈显著正相关(r=0.7715,P<0.05;r=0.8088,P<0.05)。结论:土龙祛疣洗剂可能通过上调c FLIP-TRAIL的表达、增强CXCL10/IP10活性来发挥抗病毒的治疗作用。
- 吴志洪钟江岳天天徐张杰苏传丽郑恩金
- 关键词：尖锐湿疣TRAILCXCL10
- 132株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的临床分布及耐药性变迁分析被引量：1
- 2014年
- 目的：了解本院临床标本中分离出的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的科室分布及耐药性变迁情况。方法：收集本院2009年1月-2011年1月共3年间临床分离到的MRSA，统计分析MRSA的分布及药敏试验结果。结果：3年内共分离出金黄色葡萄球菌（SA）249株，其中MRSA132株。分离出SA的标本中以呼吸道标本为主，占51．5％，其次为分泌物和脓液。检出率较高的科室是外科，占36．9％，其次为呼吸内科和老年科。除万古霉素、利福平、复方新诺明及呋喃妥因外，MRSA对其余的抗茵药物的耐药率均高于MSSA（对甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌），耐药率均保持在40％以上，而且耐药率呈逐年上升趋势。结论：MRSA对大部分抗菌药物仍维持较高的耐药率，应定期监测临床标本中分离的MRSA耐药率，合理使用抗茵药物，延缓临床株耐药性的增长，控制医院感染的发生及暴发流行。
- 郑恩金
- 关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药率抗菌药物
- eha基因调控迟缓爱德华菌抵抗巨噬细胞氧化杀菌作用被引量：2
- 2015年
- 目的迟缓爱德华菌(E.tarda)能够在巨噬细胞内生存和繁殖,必须抵抗细胞产生活性氧的杀菌作用。eha基因是该菌一个重要的转录调控基因,本研究探讨eha基因调控E.tarda抵抗巨噬细胞氧化杀菌的机制。方法光镜观察野生株和缺失株分别感染RAW264.7巨噬细胞的过程,及菌落计数法测定细菌胞内存活数目;测定细菌在不同H2O2浓度中的存活率;流式法检测细菌感染巨噬细胞后产生活性氧的细胞比率;qRT-PCR测定细菌超氧化物歧化酶基因sodC和过氧化氢酶基因katB的转录水平。结果 eha基因的缺失,使E.tarda在巨噬细胞内的繁殖速率明显下降(P<0.05),使该菌在不同H2O2浓度中的存活率显著降低(P<0.05),使该菌感染细胞组产生活性氧的细胞比率升高;qRT-PCR结果显示,eha基因的缺失使得该菌的超氧化物歧化酶基因sodC和过氧化氢酶基因katB转录水平下降。结论 eha基因通过调控E.tarda菌分解H2O2相关基因的表达,从而影响该菌分解巨噬细胞中活性氧的能力和在胞内外的存活率。因此,eha基因调控了E.tarda菌抵抗巨噬细胞内氧化杀菌作用,有助于该菌在巨噬细胞内生存和繁殖。
- 徐泽炎李玉红成静郑恩金高大庆盛安康陆承平
- 关键词：巨噬细胞活性氧
- 土龙祛疣洗剂对尖锐湿疣皮损microRNA表达的影响被引量：1
- 2016年
- 目的:探讨土龙祛疣洗剂对尖锐湿疣(CA)皮损标本中micro RNA分子表达谱的影响。方法:以39例CA患者为观察组,使用土龙祛疣洗剂熏洗治疗,6周后观察疗效。以同期自本院外科就诊的10例行包皮环切患者为对照组,取其正常包皮组织。采用q RT-PCR检测2组5个炎症相关micro RNA(mi R-21、mi R-203、mi R-125b、mi R-146a和mi R-155)的表达情况。结果:39例CA患者治疗6周后27例皮损消退明显,症状减轻,总有效率为69.2%;观察组mi R-203与正常对照组相比呈现低表达,土龙祛疣洗剂治疗后呈现明显上调,差异有统计学意义(P<0.01);mi R-21治疗后表达量与治疗前相比则下调明显(P<0.05);而mi R-155、mi R-125b、mi R-146a分子在治疗前后无明显变化。结论:土龙祛疣洗剂治疗尖锐湿疣疗效肯定,可能通过下调mi R-21和上调mi R-203分子来发挥抗病毒的治疗作用。
- 苏传丽吴志洪钟江郑恩金黄涛岳天天
- 关键词：尖锐湿疣人类乳头瘤病毒
- 基于RNA-seq分析Eha调控迟缓爱德华菌抵抗酸化的作用被引量：2
- 2017年
- 目的 Eha是一个影响迟缓爱德华菌(Et)胞内生存的转录调控因子,本研究有助于揭示其调控Et抵御酸的分子机制。方法用ATPase抑制剂洛霉素A1抑制巨噬细胞的酸化,菌落计数法比较酸化对野生株和eha基因缺失株胞内存活数目的影响;比较两种细菌在酸性应激实验中存活率的差异;构建pMP220-P_(eha)LacZ质粒,采用β-半乳糖苷酶实验检测eha基因的启动子在不同酸性pH值下和不同培养时间的转录活性;选择Eha转录水平最高的一个酸性pH值和培养时间,分别提取两种细菌RNA,进行RNA-Sequencing;并用qRT-PCR验证其结果。结果野生株ET13在巨噬细胞内和不同pH酸环境中的存活率明显高于缺失株,阻止酸化胞内菌数明显高于未阻止酸化的胞内菌数(P<0.05)。对数期细菌pH6.3培养基生长2h,RNA-Sequencing结果表明:eha基因缺失株转录水平和野生株相比,147个差异显著表达的基因(DEGs)(|log2Ratio|≥1),其中113个上调,34个基因下调,qRT-PCR随机抽样,和RNA-Sequencing表达趋势呈强相关。147个基因采用GO数据库进行功能聚类,分成25类,主要涉及细菌加工、定位、代谢、结合、催化、运输、细胞成份;基于KEGG通路的富集分析,有130个可以富集到55条通路中,包括与氨基酸、核苷酸、脂质代谢及铁的转运等路径,涉及基因较多的有双组分系统、ABC转运系统、不同环境中的微生物代谢和次级代谢产物等路径。结论在酸性生存环境,Eha对Et的转录组呈多途径、多基因的适应性的全局性调控。
- 刘念李玉红郑恩金高大庆陆承平
- 关键词：酸化
- eha基因对迟缓爱德华菌抵抗巨噬细胞内外压力的影响被引量：1
- 2014年
- 目的 E.tarda能够在体内外许多环境包括在巨噬细胞内生存和繁殖,eha基因是该菌一个重要的转录调控基因,本研究探讨该基因在细菌抵抗巨噬细胞内外压力中的作用及机制。方法采用体外实验模拟巨噬细胞内氧化和酸杀菌条件、体内血清和胆汁杀菌条件、以及细菌对SDS和多粘菌素B敏感性试验,比较ET-13毒力株及其Δeha缺失株和ehaComp互补株在这些压力下存活率,利用RT-PCR和SDS-PAGE电泳,比较上述3种细菌相关基因的转录和表达的差异。结果eha基因的缺失使ET-13对酸、H2O2、SDS和多粘菌素B敏感性提高(P<0.05);经小鼠血清或鱼胆汁处理后,3种菌株的存活率没有明显区别(P>0.05);RT-PCR结果显示,eha基因的缺失使得E.tarda内的超氧化物歧化酶基因sodC、过氧化氢酶基因katB和鞭毛蛋白基因fliC、Ⅲ型分泌系统分泌蛋白基因eseC的转录水平下降。SDS-PAGE电泳结果显示,缺失株的主要外膜蛋白比野生株表达降低。结论 eha基因通过调控E.tarda相关基因的表达,参与了该菌抵抗巨噬细胞内氧化和酸等的压力,有助于细菌在巨噬细胞内生存和繁殖。
- 李玉红郑恩金高大庆李佳盈成静徐泽炎盛安康张坡祝如愿刁亦非周佳莹陆承平
- 关键词：巨噬细胞迟缓爱德华菌
- 血培养病原菌的分布及污染菌的分析
- ：通过回顾本院的血培养病原菌检出情况以及污染菌的判定分析,了解该院血流感染的主要病原菌构成比并对是否是污染菌进行分析. 方法：采用法国梅里埃BAcT/ALERT3D血培养仪进行培养,法国梅里埃ATB半自动微生物鉴定...
- 郑恩金
- 关键词：病原菌血培养污染菌凝固酶
- eha,迟缓爱德华菌一个毒力调控基因被引量：3
- 2010年
- 目的探讨迟缓爱德华菌(Edwardsiella tarda,E.tarda)溶血相关基因(E.tardahaemolysin activator gene,eha)基因调控该菌毒力基因的作用。方法利用自杀质粒pHM5,缺失E.tarda的eha基因,得到△eha缺失菌株,再构建△eha株的互补菌株。通过平板溶血性法、接触溶血法、上清溶血法,观察野生株、△eha缺失株与及互补株溶血性的差异。利用MTT法比较三种细菌培养物的过滤液对Vero细胞的毒性的差别。利用H2O2抗性纸片扩散法,比较三种菌对过氧化氢抵抗力的差异。利用RT-PCR和SDD-PAGE电泳超速酸化离心法提取的鞭毛蛋白,比较三种细菌鞭毛基因的转录和表达的差异。结果△eha缺失株和互补株不溶血,而野生株溶血。eha基因的缺失降低E.tarda菌对过氧化氢的抵抗力,△eha缺失株较野生株的细胞毒性明显减弱,eha基因可以调控迟缓爱德菌鞭毛基因的转录和表达。结论 eha基因可以调控迟缓爱德华菌毒力基因的表达,是一个毒力调控基因。
- 郑恩金高大庆洪捷陆承平
- 关键词：迟缓爱德华菌基因缺失基因调控
- 迟缓爱德华菌eha基因对该菌相关毒力的调控作用
- 目的：本实验主要探讨迟缓爱德华菌（Edwardsiella tarda，简称E.tarda）eha（Edwardsiella tarda haemolysin activator gene，简称eha）基因，调控E.ta...
- 郑恩金
- 关键词：迟缓爱德华菌基因缺失
- 文献传递
