赵广会
- 作品数：7 被引量：12H指数：2
- 供职机构：山东大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 刚地弓形虫14-3-3蛋白真核表达载体的构建与表达被引量：6
- 2012年
- 目的构建并表达刚地弓形虫RH株14-3-3蛋白的真核表达载体。方法用生物信息学方法对弓形虫14-3-3蛋白的理化性质和结构进行预测。以弓形虫RH株总RNA为模板,逆转录PCR(RT-PCR)扩增目的基因片段,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.0,构建重组质粒pcDNA3.0/14-3-3,经PCR、双酶切和测序鉴定正确后,用脂质体法转染人宫颈癌(HeLa)细胞,蛋白印迹(Western blotting)分析表达产物。结果根据14-3-3蛋白基因片段序列和氨基酸序列预测,该蛋白分子为酸性可溶性蛋白,主要以同源或异源二聚体存在,有5个氨基酸保守序列区。RT-PCR的扩增产物约为800 bp,构建的真核表达质粒pcDNA3.0/14-3-3插入片段经测序,片段长度为801 bp,与GenBank中刚地弓形虫14-3-3蛋白基因序列(登录号为AB012775.1)同源性为99%。Western blotting分析结果显示,在转染pcDNA3.0/14-3-3的细胞中,有14-3-3蛋白表达,相对分子质量(Mr)约为30 000,且表达量显著高于转染空质粒和未转染的细胞。结论构建了真核表达载体pcDNA3.0/14-3-3,并能在真核细胞内表达。
- 孙敏何深一赵广会丛华周怀瑜赵群力孟敏
- 关键词：刚地弓形虫真核表达生物信息学
- 弓形虫重组质粒pBudCE4.1-AMA1-ROP18的构建及鉴定被引量：2
- 2012年
- 目的构建pBudCE4.1-AMA1-ROP18 DNA重组质粒,并对其进行克隆及鉴定。方法采用PCR法对目的基因进行扩增,构建pBudCE4.1-AMA1-ROP18重组质粒,转染至人包皮成纤维细胞(HFF)进行表达并用SDS-PAGE和β-actin进行鉴定。结果经测序、双酶切和PCR鉴定,重组质粒pBudCE4.1-AMA1-ROP18构建正确;经RT-PCR和SDS-PAGE鉴定,AMA1、ROP18基因均在哺乳动物细胞中正确转录与表达。结论成功构建pBudCE4.1-AMA1-ROP18重组质粒,并可在HFF细胞中稳定表达。
- 石娜何深一陈琳周怀瑜丛华白杨赵广会赵群力
- 关键词：弓形虫属质粒细胞转染
- 弓形虫核酸疫苗的研究
- 弓形虫是一种细胞内专性寄生虫,呈全球性分布,可感染大部分哺乳动物(包括人类)和鸟类。据估计,全世界约有25%的人受感染,我国人群感染率约为5%0%。正常人感染弓形虫多为隐性感染,不表现明显症状;而在免疫抑制、免疫缺陷或器...
- 何深一白杨赵广会石娜陈琳孙敏周怀瑜丛华赵群立王花欣
- 文献传递
- 弓形虫蛋白酶的鉴定及免疫学研究
- 弓形虫是一种属于顶复门的专性细胞内寄生原虫，可引起弓形虫病。弓形虫病是广泛分布于温血动物包括人的一种人兽共患病，严重威胁着人类健康和畜牧业的发展，尤其对免疫功能受损的特殊人群，包括艾滋病患者、长期接受化学药物治疗的病人等...
- 赵广会
- 关键词：弓形虫半胱氨酸蛋白酶天冬氨酸蛋白酶生物信息学DNA疫苗
- 弓形虫ROP18-MIC2重组真核质粒的构建与表达被引量：3
- 2012年
- 目的构建弓形虫棒状体蛋白18(ROP18)和微线体蛋白2(MIC2)的基因融合的重组真核表达质粒,并在转录和翻译水平进行鉴定。方法利用分子克隆技术构建重组真核表达质粒pBudCE4.1-ROP18-MIC2,经PCR、酶切及测序鉴定正确后,体外转染人包皮成纤维细胞(HFF),采用RT-PCR在48 h时检测转录水平,SDS-PAGE在72 h时检测蛋白表达。结果重组真核表达质粒pBudCE4.1-ROP18-MIC2构建正确,经RT-PCR、SDS-PAGE鉴定,弓形虫ROP18、MIC2可在HFF细胞中瞬时表达。结论成功获得重组真核表达质粒pBudCE4.1-ROP18-MIC2,为进一步研究弓形虫疫苗的免疫保护性奠定基础。
- 陈琳何深一石娜周怀瑜丛华白杨赵广会赵群力
- 关键词：弓形虫属真核细胞
- 大肠埃希菌肠毒素B亚基对弓形虫速殖子SAG1-ROP2复合基因免疫效果的影响被引量：1
- 2010年
- 目的研究大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚基(LTB)对弓形虫速殖子SAG1-ROP2复合基因免疫效果的影响。方法构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-SAG1-ROP2和pEASY-E1-LTB。BALB/c小鼠88只,随机均分为4组,分别用PBS(A组)、pcDNA3.1空质粒(B组)、pcDNA3.1-SAG1-ROP2质粒(C组),以及pcDNA3.1-SAG1-ROP2质粒和pEASY-E1-LTB质粒(D组)进行滴鼻免疫,每种质粒20μg/(只·次)。每组小鼠随机抽取15只,每周免疫1次,共4次,末次免疫后2周,测定其血清IgG和IgA抗体水平,气管和小肠黏膜冲洗液分泌型IgA(sIgA)水平,以及脾细胞培养上清中γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)水平;每组中余7只小鼠,每周免疫1次,共3次,末次免疫后4周,弓形虫速殖子腹腔接种感染(1×103/鼠),观察比较各组生存时间。结果成功构建pEASY-E1-LTB重组表达质粒。D组小鼠血清IgG(0.626±0.100)和IgA抗体水平(1.086±0.138),气管和小肠黏膜冲洗液sIgA水平(0.886±0.164),以及细胞因子IFN-γ[(2017±266)pg/ml]和IL-4水平[(203±31)pg/ml]均显著高于其他各组(均P<0.05)。感染弓形虫速殖子后,A、B、C和D组小鼠的生存时间中位数分别为3、4、6和10d,D组的生存时间长于其他各组(均P<0.05)。结论LTB能明显增强弓形虫速殖子SAG1-ROP2复合基因的免疫效果。
- 赵红何深一李婷赵广会周怀瑜赵群力
- 关键词：复合基因疫苗不耐热肠毒素
- 寄生虫基因组的研究进展被引量：1
- 2009年
- 随着对寄生虫病和寄生虫学研究的深入，该领域已经取得了很多重大的进展。但是我们必须清醒地认识到整个寄生虫领域的现实情况依然不容乐观，如对一些传统寄生虫病的防治还没有取得根本性的改观，新的动物源性寄生虫和机会性致病寄生虫又不断地出现，寄生虫的分类地位、致病机制、寄生虫病的诊断，尤其在药物和疫苗防治等方面也面临一系列的困难，这些问题的解决最终都要依靠人们在更基础的分子水平上寻找答案，所以开展寄生虫基因组的研究意义深远。
- 赵广会何深一
- 关键词：寄生虫寄生虫病基因组
