赖冠华
- 作品数：13 被引量：38H指数：4
- 供职机构：上海第二医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人TNF-α基因修饰成纤维细胞的抗肿瘤研究被引量：9
- 1997年
- 为了探讨人TNF-α基因修饰的成纤维细胞在体内的抗肿瘤作用,本文应用含脑心肌炎病毒(EMCV)内核糖体进入位点(IRES)的双顺反子逆转录病毒载体pGCEN/TNF-α来转导TNF-α基因至小鼠成纤维细胞NIH3T3.人TNF-α基因修饰的成纤维细胞NIH3T3/TNF-α能持续高水平表达TNF-α,在小鼠肝癌H22细胞皮下植入后第3天或第7天,肿瘤部位直接注射2.5×10~5NIH3T3/TNF-α.或1×10~6NIH3T3/TNF-α能明显抑制肿瘤生长(P<0.05),增加小鼠存活率(P<0.025).可见人INF-α基因修饰的成纤维细胞有望成为一种安全、简便且有效的肿瘤生物治疗新途径.
- 赖冠华唐展云王克敏钱关祥陈诗书
- 关键词：成纤维细胞基因修饰肿瘤坏死因子抗肿瘤作用
- 浓缩铀诱发免疫细胞的放射免疫毒理效应
- 1994年
- 我们研究了浓缩铀内污染机体时诱发中枢和外周免疫细胞的免疫毒理效应。结果表明：（１）浓缩铀可抑制中枢免疫器官的胸腺细胞和骨髓细胞对３Ｈ－ＴｄＲ的自发掺入，尤其是对胸腺细胞的抑制更严重；（２）浓缩铀可阻抑外周免疫器官脾脏Ｔ、８淋巴细胞的增殖，且Ｂ淋巴细胞的受抑程度大于Ｔ淋巴细胞；（３）浓缩铀可使脾脏淋巴细胞ＩＬ－１的生成抑制，而使得ＩＬ－２的消耗减少。
- 朱寿彭赖冠华王六一
- 关键词：免疫细胞
- 含mIL-12基因多顺反子逆转录病毒载体构建及其在肝癌细胞中的表达被引量：2
- 2000年
- 目的 构建含小鼠白细胞介素 12双亚基及新霉素磷酸转移酶基因多顺反子逆转录病毒载体 ,并观察其在小鼠肝癌细胞中的表达。方法 利用脑心肌炎病毒 (EMCV)及脊髓灰质炎 (Polio)病毒内核糖体进入位点 (IRES) ,连接mIL 12p40及p35cDNAs和筛选基因新霉素磷酸转移酶 (NeoR) ,克隆至逆转录病毒载体pGCEN中 ,使三个基因同时受逆转录病毒载体 5′端LTR启动子控制 ,转录至同一mRNA转录本上 ,通过不同机制翻译成蛋白质 ,从而构建成多顺反子逆转录病毒载体 ,即pGCEN/mIL 12。在LipofectAMINE介导下将pGCEN/mIL 12转染包装细胞PA317,G418筛选 ,直至出现阳性克隆 ,挑取抗性克隆 ,扩大培养 ,收集上清 ,用小鼠成纤维细胞NIH3T3测定病毒滴度。然后用重组转录病毒感染小鼠肝癌细胞MM45T .Li,G418筛选 ,直至出现抗性克隆 ,扩大培养 ,对阳性克隆进行鉴定。结果 由PA317包装细胞产生的重组逆转录病毒的滴度为 5× 10 5CFU/ml,将其感染小鼠肝癌细胞MM45T .Li,后经PCR及Southernblot证明 ,外源基因已整合至小鼠肝癌细胞基因组中 ,RT PCR及Northernblot分析外源基因在mRNA水平上的表达 ,并证实mIL 12p40及p35cDNA和NeoR基因转录在同一mRNA上。ELISA显示mIL 12的表达量 48h为 10ng/ 10 6细胞。并且M45 /mIL
- 唐展云赖冠华陈诗书
- 关键词：MIL-12基因逆转录病毒载体肝癌细胞
- 用于多基因表达的逆转录病毒载体被引量：5
- 1995年
- 用于多基因表达的逆转录病毒载体赖冠华，陈诗书（上海第二医科大学人类基因治疗研究中心分子生物学实验室，上海２０００２５）关键词剪接载本，内启动子载体，内核糖体，进入位点逆转录病毒感染细胞后，能将病毒基因稳定地整合到宿主细胞基因组，并有效表达且传递到子代...
- 赖冠华陈诗书
- 关键词：基因表达多基因表达逆转录病毒载体
- 实验性肿瘤联合基因的治疗研究
- 陈诗书夏爱娣钱关祥魏道严王克敏唐展云钱书兵糜军赖冠华杨劲松王建华郑新民孙文长张景迎李煜厉兴君
- 采取多种基因及因素的配合进行实验性肿瘤的联合基因治疗研究。成功克隆并鉴定包括细胞因子、MHC分子、抑制血管生成有关因子等11种cDNA，并选用脑心肌炎病毒和骨髓灰质炎病毒的内核糖体进入位点（IRES），构建成多基因表达载...
- 关键词：
- 关键词：基因治疗肿瘤
- 实验性肿瘤的联合基因治疗研究
- 2004年
- 恶性肿瘤基因治疗的临床研究已有10余年,但疗效尚未确定.治疗策略也不下12种,但何种策略为佳尚无定论.目前采用的策略多数为单一基因治疗,鉴于肿瘤的发生可能涉及多种基因及多种因素,发病过程也是多步骤的,该研究探索多种基因及因素的配合进行实验性肿瘤的联合基因治疗研究.首先克隆一系列的治疗基因,构建不同载体及调控原件,然后进行不同基因的联合治疗作用,并与放射治疗相结合,最后还筛选新的肿瘤治疗候选基因,旨在为临床提供更有效的肿瘤基因治疗策略和方案.
- 陈诗书夏爱娣钱关祥魏道严王克敏唐展云钱书兵糜军赖冠华杨劲松
- 关键词：实验性肿瘤基因治疗克隆细胞因子MHC分子
- 人TNF-α双顺反子逆转录病毒载体的构建及其在成纤维细胞中的表达被引量：4
- 1998年
- 利用脑炎心肌炎病毒的内核糖体进入位点连接人ＴＮＦ－αｃＤＮＡ和选择基因ＮｅｏＲ基因，使ＴＮＦ－α及ＮｅｏＲ基因均受控于病毒ＬＴＲ启动子，将两基因同时转录至同一ｍＲＮＡ，从而构建成人ＴＮＦ－α双顺反子逆转录病毒载体ｐＧＣＥＮ／ＴＮＦ－α．在ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ介导下将其导入包装细胞ＰＡ３１７，Ｇ４１８筛选得单克隆，病毒滴度为１０６ＣＦＵ／ｍｌ重组病毒分泌的细胞株．经ＰＣＲ证明外源基因已整合至细胞基因组，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹显示出单一ＬＲＴ转录本．持续Ｇ４１８筛选能明显促进目的基因ＴＮＦ－α的表达．用重组病毒上清感染小鼠成纤维细胞ＮＩＨ３Ｔ３，Ｇ４１８筛选获得的混合抗性克隆持续高表达ＴＮＦ－α，４０Ｇｙγ线照射后能维持高效表达至７ｄ．实验结果表明，含ＩＲＥＳ的双顺反子逆转录病毒载体将是一个很好的基因转移载体．
- 赖冠华唐展云陈诗书
- 关键词：肿瘤坏死因子逆转录病毒成纤维细胞
- 浓缩铀对脾淋巴细胞DNA合成和UDS的影响被引量：4
- 1996年
- 本文研究了机体摄入不同水平的浓缩铀＾２３５ＵＯ２Ｆ２时，引起外周免疫器官脾淋巴细胞ＤＮＡ合成的ＵＶ诱发的ＵＤＳ变化。观察发现，当机体摄入低剂量浓轴＾２３５ＵＯ２Ｆ２０．１μｇ／ｋｇ体重时，ＰＨＡ反应性Ｔ淋巴细胞的＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入量显著增升，呈现对ＤＮＡ合成的明显兴奋效应。而当浓缩铀＾２３５ＵＯ２Ｆ２的摄入水平在０．１２０μｇ／ｋｇ体重时，可使ＵＶ诱发的脾淋巴细胞ＵＤＳ呈现兴奋效应。
- 朱寿彭杨占山赖冠华
- 关键词：浓缩铀脾淋巴细胞
- 内污染核素对免疫细胞的损伤及细胞因子的辐射防护
- 1992年
- 机体免疫细胞对辐射敏感性很高,内污染核素能抑制免疫细胞的功能,不同性质的射线对免疫细胞分泌细胞因子功能的影响也不同,外源性加入细胞因子能增加免疫细胞的功能,提高受致死剂量照射小鼠的生存率.
- 赖冠华朱寿彭
- 关键词：免疫细胞辐射防护
- 小鼠白细胞介素12双顺反子真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达被引量：8
- 1999年
- 克隆小鼠白细胞介素１２（ＩＬ－１２）ｐ４０及ｐ３５ｃＤＮＡ，并构建同时含ｍＩＬ－１２ｐ４０和ｐ３５ｃＤＮＡ的双顺反子真核表达载体及其在哺乳动物细胞中的表达．白细胞介素１２是由巨噬细胞，树突状细胞等抗原提呈细胞产生的一种异二聚体细胞因子，对机体的细胞免疫功能起着重要的调节作用．利用脂多糖（１００ｐｇ／ｍｌ）和小鼠重组干扰素（ＩＦＮ－γ５００Ｕ／ｍｌ）体外联合刺激小鼠腹腔巨噬细胞，从中提取总ＲＮＡ，经ＲＴ－ＰＣＲ扩增出含信号肽的小鼠白细胞介素１２（ｍＩＬ－１２）ｐ４０及ｐ３５全长ｃＤ－ＮＡ．ＰＣＲ产物经酶切后，分别克隆至ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ载体中，序列测定结果与文献报道序列一致．然后利用脊髓灰质炎（Ｐｏｌｉｏ）病毒内核糖体进入位点（ＩＲＥＳ）连接ｍＩＬ－１２ｐ４０及ｐ３５ｃＤＮＡ，亚克隆至ｐｃＤＮＡ３载体中，构建成含ｍＩＬ－１２ｐ４０及ｐ３５ｃＤＮＡ双顺反子真核表达载体，即ｐｃＤＮＡ３／ｍＩＬ－１２，ｐ４０及ｐ３５ｃＤＮＡ同时受ｐｃＤＮＡ３中ｈＣＭＶ启动子驱动，将ｐ４０及ｐ３５转录至同一ｍＲ－ＮＡ上．通过ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ将ｐｃＤＮＡ３／ｍＩＬ－１２转染ＣＯＳ－７细胞，７２ｈ收集培养上清，测定ｍ?
- 唐展云赖冠华陈诗书
- 关键词：白细胞介素12PCDNA3真核表达载体COS-7细胞
