谢堃
- 作品数：19 被引量：25H指数：3
- 供职机构：石河子大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国际科技合作与交流专项项目公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学建筑科学更多>>
- 单核细胞增生李斯特菌非编码RNA rli87基因缺失株的构建、鉴定及其生长特性初步研究被引量：5
- 2015年
- 拟构建单核细胞增生李斯特菌(LM)非编码RNArli87基因缺失株,对其进行分子鉴定,分析rli87基因缺失对LM生长的影响。用融合PCR方法构建LM-SB5 rli87基因缺失突变体,并构建pKSV7-Δrli87穿梭载体,将其转化入LM-SB5感受态细胞,利用温度(42℃)和氯霉素(10μg·mL-1)的抗性双重压力来实现同源重组,筛选同源重组菌进行分子鉴定,测定缺失株与母源野毒株37℃条件下生长曲线。结果显示:PCR和测序结果证实成功获得了LM-Δrli87重组菌。通过25代的连续传代,PCR鉴定结果显示,该缺失株具有良好的遗传稳定性。与野毒株进行对比,在37℃条件下缺失株与野毒株的生长差异不显著(P>0.05)。非编码RNArli87基因在37℃条件下对LM生长没有明显的调控作用。
- 谢堃乔军孟庆玲彭叶龙赵海龙马玉陈诚才学鹏陈创夫
- 关键词：同源重组
- ncRNA Rli60在单核细胞增生李斯特菌环境应激及生物膜生成中的调控作用
- 【前言】单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes, LM)是一种兼性胞内寄生的革兰氏阳性致病菌,可以引起人和动物流产、脑膜脑炎、败血症等症状,是一种对公共卫生安全和畜牧业生产具有较大危害的人兽共...
- 彭叶龙乔军孟庆玲谢堃赵海龙宋雪梅陈创夫
- 关键词：单核细胞增生李斯特菌NCRNA环境应激生物膜
- 文献传递
- 单增李斯特菌hfq基因的克隆及分子特征分析被引量：3
- 2014年
- 目的：了解单增李斯特菌（Listeriamonocytogenes，LM）SB5野毒株ncRNA伴侣分子怕基因及其编码蛋白质的分子生物学特征。方法：利用PCR方法对hfq基因进行扩增、克隆及测序，对魄向基因分子特征进行分析，预测其编码蛋白质的二三级结构及功能活性位点，对其进行同源性及遗传变异分析。结果：LMhfq基因全长234bp，编码77个氨基酸，对推导的Hfq氨基酸序列分析发现从N端到C端包含1个饯一螺旋及5个β-折叠，具有RNA结合位点及六聚体结合位点。LM-SB5hfq基因核苷酸序列与李斯特菌属各菌株同源率为94．5～100％，与其他种属细菌同源率为36．19—62．39％。结论：Hfq蛋白具有RNA的结合位点，可能在细菌ncRNA调节基因表达过程中发挥重要作用。
- 彭叶龙乔军孟庆玲谢堃陈诚刘田莉马玉才学鹏陈创夫
- 关键词：单增李斯特菌克隆
- 少孢节丛孢菌胞外丝氨酸蛋白酶P186基因的克隆、序列分析及表达
- 引言寄生性线虫对畜牧业的生产发展可以产生巨大的影响。食线虫性真菌是线虫的自然天敌,它们能捕食活的线虫和寄生在虫卵里,把它们当作自己的营养来源,因此这种生物防控方法日益受到各国学者的广泛关注。少孢节丛孢菌(Arthrobo...
- 赵海龙孟庆玲乔军陈双庆王国超谢堃胡政香
- 单核细胞增生李斯特菌sRNA伴侣分子hfq的基因克隆、表达及纯化
- 2014年
- 为克隆、表达单核细胞增生李斯特菌sRNA分子伴侣蛋白hfq基因,并纯化重组蛋白,通过PCR的方法从单核细胞增生李斯特菌基因组DNA中扩增出hfq基因,将扩增产物克隆于pMD18-T载体中,测序验证后,再将hfq基因亚克隆至表达载体pET-32a(+)中,成功构建pET-32a(+)-hfq原核表达载体。然后,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,通过IPTG进行诱导表达,对表达蛋白进行可溶性分析,并采用Ni-NTA纯化目的蛋白。结果显示:克隆的hfq基因全长234 bp,编码77个氨基酸,通过SDS-PAGE可以检测到27 kDa的蛋白特异性条带;并从上清中纯化得到了Hfq融合蛋白。为进一步研究该蛋白的生物学功能奠定了基础。
- 彭叶龙乔军孟庆玲谢堃陈诚刘田莉马玉才学鹏陈创夫
- 关键词：单核细胞增生李斯特菌克隆纯化
- ncRNA Rli60在单核细胞增生李斯特菌环境应激及生物膜生成中的调控作用
- [前言]单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是一种兼性胞内寄生的革兰氏阳性致病菌,可以引起人和动物流产、脑膜脑炎、败血症等症状,是一种对公共卫生安全和畜牧业生产具有较大危害的人兽共患...
- 彭叶龙乔军孟庆玲谢堃赵海龙宋雪梅陈创夫
- 关键词：单核细胞增生李斯特菌NCRNA环境应激生物膜
- ncRNA rli60在单核细胞增生李斯特菌环境应激及生物膜生成中的调控作用
- 引言单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是一种兼性厌氧胞内寄生革兰氏阳性致病菌,能引起人和动物脑膜脑炎、流产、败血症等症状,引起较高的死亡率,对公共卫生安全及畜牧业生产造成了严重的威...
- 彭叶龙乔军孟庆玲谢堃赵海龙宋雪梅陈创夫
- ncRNA伴侣分子hfq基因缺失对单核细胞增生李斯特菌环境适应能力的影响被引量：3
- 2015年
- Hfq作为一种保守的RNA分子伴侣蛋白,主要通过与nc RNA结合来参与调控单核细胞增生李斯特菌(LM)的生命活动.利用基因重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法构建具有氯霉素抗性的p KSV7-Δhfq重组穿梭质粒,电转化至新疆野毒株LM-SB5感受态细胞后在42℃和氯霉素压力下进行同源重组,筛选LM-SB5 hfq基因缺失株,并分析hfq基因缺失株在不同温度、pH、高盐、乙醇、H_2O_2、Triton X-100胁迫环境下的适应能力.结果成功构建得到一株遗传性稳定的LM hfq基因缺失株LM-Δhfq;LM-Δhfq对5%NaCl、3.5%乙醇、0.1%H_2O_2的适应能力显著降低,对30℃、37℃、42℃、pH 4、pH 9及Triton X-100的适应能力没有显著变化,表明Hfq参与了LM对高盐、乙醇、H_2O_2胁迫环境的适应过程.本研究为进一步揭示Hfq蛋白在参与ncRNA调控细菌生命活动的机制奠定了基础.
- 卢海亭乔军孟庆玲彭叶龙陈诚刘田莉谢堃才学鹏陈创夫
- 关键词：单核细胞增生李斯特菌分子伴侣
- 少孢节丛孢菌丝氨酸蛋白酶家族基因的克隆及生物信息学分析被引量：1
- 2015年
- 本研究在国内首次对少孢节丛孢菌新疆分离株(XJ-A1)丝氨酸蛋白酶家族相关基因P12、P186和P233进行了扩增、克隆及测序,对其编码蛋白信号肽、疏水性与亲水性、高级结构、功能域进行预测和分析。结果显示:3个不同的丝氨酸蛋白酶均含有信号肽和天冬氨酸(D)、组氨酸(H)和丝氨酸(S)3个活性位点,表明它们均属于胞外分泌性Subtilase家族;同时,都含有2个潜在的N末端糖基化位点及2个与底物结合的S1区。系统发生分析发现,P12、P186和P233与其他不同地域、不同种属的丝氨酸蛋白酶基因亲缘性较远。本研究为研发预防动物消化道线虫的生物防控奠定了前期基础。
- 赵海龙孟庆玲乔军陈双庆谢堃罗建勋才学鹏
- 关键词：少孢节丛孢菌丝氨酸蛋白酶基因克隆生物信息学
- ncRNARli87基因缺失对单核细胞增生李斯特菌环境应激的影响
- 单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是一种革兰氏阳性、兼性厌氧胞内寄生菌。该菌广泛存在于自然界中,易污染各种食品(肉、奶、海产品及蔬菜等),对环境的耐受性强,可在高盐浓度(可高达40...
- 谢堃乔军孟庆玲彭叶龙赵海龙宋雪梅陈创夫才学鹏
- 关键词：单核细胞增生李斯特菌同源重组环境应激
- 文献传递
