目的:探讨转醛醇酶(t ransaldolase,TAL)在氪激光诱导的BN大鼠脉络膜新生血管(choroida l neovascularization,CNV)中的表达变化及其可能的作用机制。方法:给予2组20只BN大鼠行氪激光光凝视网膜,诱导BN大鼠建立CNV模型。在光凝后21 d行荧光素眼底血管造影(fluorescein fundus angiography,FFA),确定模型建立成功后摘除眼球。采用蛋白质印迹法检测TAL、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)和还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)蛋白质表达,并测定TAL活性。采用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制下TAL在人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)ARPE-19细胞中的表达,蛋白质印迹法检测抑制前后TAL,NADPH和GSH表达水平的变化。结果:光凝后21 d见明显新生血管生成,表明模型成功建立。CNV增殖区TAL活性明显高于正常大鼠中TAL活性(67.16±3.38 vs 182.57±1.83,P<0.001);TAL蛋白质表达明显高于正常大鼠中TAL表达(0.87±0.33 vs 2.09±0.21,P=0.005);NADPH和GSH表达明显低于其在正常大鼠中的表达(0.92±0.20 vs 0.14±0.05,P<0.01;0.84±0.31 v s 0.29±0.11,P<0.05)。通过对人视网膜色素上皮ARPE-19细胞不做干预、加入LipofectamineTM 2000稀释液、加入TAL-siRNA/LipofectamineTM 2000复合物,将其分为正常对照组、阴性对照组及TAL-siRNA组,干预48 h后,TAL-siRNA组中TAL蛋白质表达明显低于正常对照组和阴性对照组(0.26±0.13 vs 1.39±0.42和1.15±0.19,P<0.01);NADPH和GSH表达明显高于正常对照组(P<0.01)和阴性对照组(P<0.05)。结论:CNV形成的过程中,TAL的活性增强、表达上调,证实TAL与CNV发生发展密切相关,其可能通过调控NADPH和GSH的表达参与CNV的发生发展。
目的研究中性微泡(NMB)、阳离子微泡(CMB)及靶向阳离子微泡(CMB105)携内皮抑素(ES)质粒在超声作用下转染治疗MDA-MB-231细胞裸鼠种植瘤,观察其对肿瘤模型生长的影响及治疗作用。方法 18只裸鼠均注射MDA-MB-231细胞悬液建立种植瘤模型,随机分为3组(NMB组、CMB组及CMB105组),每组6只。NMB、CMB及CMB105携ES质粒在超声作用下转染MDA-MB-231种植瘤,每只裸鼠左侧肿瘤接受治疗,右侧肿瘤为对照。治疗前和治疗后每3 d观察记录肿瘤生长情况,绘制肿瘤生长曲线;治疗后15 d处死裸鼠,剥取肿瘤计算抑瘤率,行荧光定量聚合酶链反应和蛋白质免疫印迹法分别检测Endostatin m RNA及蛋白表达情况。结果于转染后12 d开始,CMB组和CMB105组治疗侧肿瘤生长均受到抑制。转染后15 d,CMB105组治疗侧抑瘤率为(53.18±5.69)%,明显高于CMB组治疗侧[(27.57±3.02)%]和NMB组治疗侧[(10.63±1.47)%],差异均有统计学意义(均P<0.05)。CMB组和CMB105组ES m RNA及蛋白表达增加,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论携载ES质粒的CMB105在超声作用下其抗肿瘤治疗效应明显优于携载ES质粒的CMB及NMB,可在一定程度上延缓裸鼠种植瘤生长。
