范瑞芳
- 作品数：7 被引量：16H指数：3
- 供职机构：广西医科大学第一附属医院更多>>
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- 抗坏血酸联合胶质细胞源性神经营养因子诱导神经干细胞向多巴胺能神经元分化的研究被引量：5
- 2009年
- 目的研究抗坏血酸(AA)和胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对神经干细胞向多巴胺能神经元分化的影响。方法从新生24h内的SD大鼠脑组织分离和培养神经干细胞,进行神经干细胞鉴定。第二代神经干细胞诱导培养基中分别给予AA或(和)GDNF,10d后终止诱导,进行DA能神经元特异性标记物酪氨酸羟化酶(TH)和多巴胺转运蛋白的免疫细胞化学检测和TH基因的RT-PCR检测。结果各诱导组均检测到THmRNA的表达;与对照组比较,AA及GDNF均能增加NSC向TH阳性细胞分化的比率(P<0.05);与单独运用100μmol/LAA或10ng/mlGDNF组比较,联合诱导组可明显提高NSCs向TH阳性细胞分化的比率(P<0.05)。结论AA和GDNF均能促进NSCs向DA能神经元分化,两者联合诱导后分化作用得到进一步加强。
- 陈梅玲沈岳飞罗彦妮范瑞芳莫雪安
- 关键词：神经干细胞多巴胺能神经元抗坏血酸胶质细胞源性神经营养因子
- AngⅡ诱导神经干细胞向多巴胺能神经元分化的时间效应被引量：2
- 2010年
- 目的:体外分离培养神经干细胞(NSCs),探讨血管紧张素II(AngII)诱导NSCs向多巴胺(DA)能神经元分化的时间效应。方法:取第二代NSCs在含有AngII的诱导分化液中培养,根据诱导持续时间不同,分为A(10d),B(14d),C(17d)和D(21d)四组。终止诱导后,用免疫学法检测分化细胞中DA能神经元标志物酪氨酸羟化酶(TH)的表达,半定量-PCR测定THmRNA的相对表达量。结果:在AngII作用下,B,C组分化细胞数量均比A组增多,细胞胞体饱满,突起粗长,而D组细胞部分开始老化、脱壁悬浮。其中,C组TH阳性细胞率最高(15.64%),且THmRNA相对表达量(0.5047±0.0212)明显高于其他三组(P<0.05)。结论:AngII诱导NSCs分化成DA能神经元存在分化的时间效应,诱导持续达17d时分化细胞中DA能神经元的比例最高。
- 沈岳飞罗彦妮范瑞芳罗小丹张维雄陈梅玲
- 关键词：神经干细胞分化多巴胺能神经元
- 血管紧张素II体外诱导神经干细胞分化为多巴胺能神经元的机制研究被引量：3
- 2010年
- 目的探讨血管紧张素II(AngiotensinII,AII)诱导神经干细胞(Neural stem cells,NSCs)定向分化为多巴胺(Dopamine,DA)能神经元的过程中血管紧张素1型(AT1)受体和血管紧张素2型(AT2)受体所起的作用。方法在无血清培养基中分离培养NSCs,通过巢蛋白(nestin)免疫细胞化学对神经前体细胞进行鉴定;在此基础上,将第二代的NSCs在含10%胎牛血清的培养基中按照实验设计分为6组,分别是,A:对照组,B:AII组,C:AT1受体拮抗剂ZD7155组,D:AT1受体拮抗剂ZD7155+AII组,E:AT2受体拮抗剂PD123319组,F:AT2受体拮抗剂PD123319+AII组,观察NSCs向DA能神经元定向诱导分化情况。通过酪氨酸羟化酶(TH)免疫细胞化学进行DA能神经元鉴定,并观察各组DA能神经元突触的长度变化,通过实时荧光定量RT-PCR检测各实验组中TH基因表达水平。结果细胞团中可以看到nestin免疫阳性着色,实时荧光定量RT-PCR法检测B组、D组的TH基因表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),C、E、F组的TH基因表达水平与对照组比较无差异(P>0.05),各组DA能神经元的突触长度没有明显差别(P>0.05)。结论AII诱导产生DA能神经元的作用是由AT2受体介导,激活AT1、AT2受体均不能诱导DA能神经元突触延长或抑制突触延长。
- 沈岳飞罗小丹张维雄罗彦妮范瑞芳陈梅玲
- 关键词：神经干细胞分化多巴胺能神经元血管紧张素II
- GDNF的神经保护作用的研究进展被引量：1
- 2009年
- 胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line--derived neurotrophic factor ,GDNF）是转化生长因子（ transforming growth factor β, TGF - β）家族中的一员。GDNF是一种神经营养因子，通过与由GDNF家族受体（GDNF family receptor alpha 1, GFRα1 ）和c-Ret组合成的复合受体结合，激活细胞内一系列信号传导通路，发挥营养神经、抑制神经元变性坏死的作用。多项实验室及临床研究显示，GDNF对多巴胺（dopamine，DA）能神经元和外周的神经元如交感神经元、副交感神经元、感觉神经元与运动神经元等有营养和保护作用。最有希望成为治疗帕金森病（parkinson’s disease，PD）、肌萎缩侧索硬化症（amyotrophic lateral sclerosis，ALS）及外周神经元变性坏死的有效治疗手段。如何通过采用恰当的给药途径及方式，既能使其在体内高效稳定地发挥作用，又能将不良反应减到最低程度是未来研究的努力方向。
- 范瑞芳沈岳飞
- 关键词：胶质细胞源性神经营养因子神经保护多巴胺能神经元
- 抗坏血酸诱导新生鼠神经干细胞向多巴胺能神经元的分化被引量：6
- 2009年
- 背景：针对帕金森病进行细胞移植治疗的研究进程中，除寻求合适的细胞系外，如何将各种有分化潜能的细胞诱导为含量丰富、有功能的多巴胺能神经元尤为关键。目的：观察不同浓度抗坏血酸对神经干细胞向多巴胺能神经元分化的影响。设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2007-01／12在广西医科大学科学实验中心完成。材料：清洁级新生24h内SD大鼠30只，由广西医科大学实验动物中心提供。抗坏血酸为Sigma产品。方法：取新生鼠脑组织，组织块胰蛋白酶消化法体外分离培养神经干细胞，传至第2代以5×10^8L^-1密度接种。设立4组：空白对照组不给予抗坏血酸，仅加入含体积分数为10％的胎牛血清、2％B27的DMEM／F12培养基：剩余3组在此基础上分别加入50，100，200μmol／L抗坏血酸进行诱导，10d后终止诱导。主要观察指标：RT-PCR检测诱导后细胞酪氨酸羟化酶基因mRNA的表达，免疫细胞化学染色鉴定神经干细胞，检测神经干细胞向多巴胺能神经元分化率。结果：各浓度抗坏血酸诱导组均得到795bp的扩增片断，即均表达酪氨酸羟化酶mRNA。神经球具有自我更新和表达巢蛋白的能力，诱导分化后的细胞能表达神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞特异性抗原。与空白对照组比较，50，100，200μmol／L抗坏血酸诱导组酪氨酸羟化酶阳性细胞率均明显升高（P〈0．05）；且100，200μmol／L抗坏血酸诱导组升高幅度明显高于50μmol／L（P〈0．05），100，200μmol／L抗坏血酸诱导组间比较无明显差异（P〉0．05）。结论：从新生鼠脑组织分离出的神经干细胞在体外具有自我更新、多向分化潜能及表达巢蛋白的能力。50～200μmol／L抗坏血酸均能促进神经干细胞向多巴胺能神经元分化，抗坏血酸浓度从100μmol／L增加至200μmol／L时酪氨酸羟化酶阳性细胞率无明显变化。
- 沈岳飞陈梅玲罗彦妮范瑞芳莫雪安
- 关键词：神经干细胞分化多巴胺能神经元抗坏血酸
- MMS2在血管紧张素II诱导神经干细胞向多巴胺能神经元分化过程中的作用被引量：1
- 2011年
- 目的探讨甲基磺酸敏感蛋白2（MMS2）在血管紧张素II（AII）诱导神经干细胞（NSCs）向多巴胺（DA）能神经元定向分化过程中的作用。方法体外分离培养新生鼠大脑来源的NSCs，通过巢蛋白免疫细胞化学方法对神经前体细胞进行鉴定；在此基础上，将第2代的NSCs按实验设计分成6组：A：对照组；B：All组；C：ATl受体拮抗剂ZD7155组；D：ATI受体拮抗剂ZD7155＋AII组；E：AT2受体拮抗剂PD123319组；F：AT2受体拮抗剂PD123319＋AII组。通过实时荧光定量PCR检测各组细胞MMS2及THmRNA的表达；转染MMS2基因的小干扰RNA（siRNA）片段到NSCs上沉默MMS2在NSCs的表达，再按以上分组将其诱导分化为DA能神经元，通过实时荧光定量PCR方法检测转染后诱导分化的各组细胞THmRNA的表达。结果体外分离培养的NSCs，在培养基中呈悬浮生长，神经球表达Nestin。实时荧光定量PCR法检测B组、D组细胞的MMS2及THmRNA的表达高于对照组，其差异有统计学意义（P〈0．05）；C、E、F组细胞的MMS2及THmRNA的表达与对照组比较无统计学意义（P〉0．05），转染MMS2-siRNA后诱导分化的各组细胞间THmRNA的表达无统计学意义（P〉0．05）。结论AII通过AT2受体使MMS2在NSCs的表达升高并诱导NSCs向DA能神经元分化，MMS2在AII诱导NSCs向DA能神经元定向分化的过程中可能发挥重要作用。
- 沈岳飞冯海娇罗小丹张维雄罗彦妮范瑞芳
- 关键词：神经干细胞分化多巴胺能神经元血管紧张素II
- 外源性Ang Ⅱ诱导神经干细胞向多巴胺能神经元分化的研究被引量：2
- 2010年
- 目的在体外成功分离培养并扩增神经干细胞（NSCs）的基础上，研究外源性血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）对NSCs向多巴胺（DA）能神经元分化的影响。方法（1）分离培养新生1d SD大鼠脑组织NSCs，免疫细胞学方法测定NSCs特异性标志物神经上皮干细胞蛋白（Nestin）表达及其分化为神经元、神经胶质细胞的能力；（2）按培养液中Ang Ⅱ的浓度不同，分5个浓度（100、200、400、600、800nmol/L）对第二代NSCs进行诱导分化。10d后采用免疫细胞学方法检测DA能神经元标志物酪氨酸羟化酶（TH）和神经胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达，半定量RT-PCR（SQ-PCR）测定分化细胞中TH mRNA的相对表达量。结果外源性Ang Ⅱ诱导提高NSCs向TH阳性细胞分化的比率，TH mRNA相对表达量亦增加，以Ang Ⅱ浓度为400nmol/L及600nmol/L的诱导效果最明显，TH阳性细胞率分别为10.77%和11.34%，TH mRNA相对表达量分别为（0.4023±0.0515）和（0.3971±0.0319），两组间比较无统计学意义（P〉0.05）；其中400nmol/L Ang Ⅱ组分化细胞中GFAP阳性细胞率高于对照组，有统计学意义（P〈0.05）。结论外源性AngⅡ促进NSCs向DA能神经元分化，在400～600nmol/L浓度范围内AngⅡ的诱导效能更显著；AngⅡ促进NSCs向DA能神经元分化的机制可能与同时促进星型胶质细胞（AS）分化有关。
- 沈岳飞罗彦妮范瑞芳罗小丹张维雄陈梅玲
- 关键词：神经干细胞分化多巴胺能神经元
