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Cloning of A Full-Length cDNA Encoding 4-Coumarate:CoA Ligase of Amorpha fruticosa by PCR-Based Methods被引量：2: 2002年; An Amorpha fruticosa cDNA encoding 4 coumarate:CoA ligase (4CL), a key enzyme of phenylpropanoid metabolism related to lignin forming, was cloned by degenerating oligo primed polymerase chain reaction (PCR) and rapid amplification of cDNA end (RACE) PCR. We designed 5′RACE primers based on 4CLA1 fragment which obtained from degenerate PCR. Inverse PCR and nested PCR enabled cloning of the remainder fragments of the gene included 5′ and 3′ end sequence. The ORF encodes a polypeptide of 540 amino acids. The predicted amino acid sequence exhibits significant homology with those of other cloned 4CL genes, contain domains typical of predicted 4CL proteins, in particular a postulated AMP binding site, catalytic domain, and conserved Cys residues.; 刘文哲胡学军高晓蓉袁晓东刘哲范琦安利佳; 关键词：LIGNIN

紫穗槐4-香豆酸:CoA连接酶基因的克隆和结构分析被引量：5: 2002年; 该文利用简并寡核苷酸PCR法结合cDNA末端快速扩增PCR法从紫穗槐 (Amorphafruticosa)茎中克隆了木质素生物合成过程中重要的酶 4 香豆酸 :CoA连接酶 (4CL)的cDNA全长序列 ,避免了复杂的构建、筛选cDNA文库的过程 .所获得的全长 4CLAcDNA ,有 1911个碱基 ,包含一个完整的阅读框架 ,编码 5 4 0个氨基酸 .氨基酸序列同源性分析表明 4CLA是典型的 4CL蛋白 ,含有预计的AMP binding位点 ,接触反应区和保守的Cys.; 刘文哲胡学军高晓蓉袁晓东刘哲范琦安利佳; 关键词：基因克隆紫穗槐 4-香豆酸木质素 PCR

抗乙型肝炎病毒preS1抗原的人源单链抗体: 本发明属于医学生物工程领域,特别涉及到基因工程抗体领域。本发明是从免疫人源单链抗体库经过固相淘选获得的抗乙型肝炎病毒preS1抗原的人源单链抗体(ScFv),其特征在于此重组抗体是由其基因轻链和重链的可变区中的特异序列决...; 安利佳张志超胡学军; 文献传递

大连蛇岛蝮蛇类凝血酶基因在毕赤酵母中的克隆表达及分离纯化(英文)被引量：17: 2002年; 根据同源性分析设计引物 ,通过RT PCR方法从大连蛇岛蝮蛇毒腺总RNA中合成扩增出类凝血酶基因 ,之后将该基因克隆到表达载体 pPIC9K中 ,经电激转化后整合至毕赤酵母细胞基因组中 .经筛选得到甲醇快速生长型转化子His+ Mut+ 在 5 0 0ml摇瓶中培养 ,甲醇诱导分泌表达 .上清液中重组类凝血酶是通过两步柱层析得到 :QSepharoseFF和Benzamidine Sepharose 4BCL .与天然蛇毒类凝血酶一致 ,分泌表达的重组类凝血酶具有较强的酯酶活性 ,但精氨酸甲酯如TAME的水解活性较弱 .此重组类凝血酶在 37℃中性溶液中保存过夜将分解成小肽 ,但在 0℃下很稳定 .该酶的最适pH为 8 0 .; 杨青胡学军许小明高晓蓉安利佳苏志国J.C.JANSON; 关键词：蝮蛇类凝血酶基因毕赤酵母分离纯化

中国辽宁省大连蛇岛蝮蛇毒液中类凝血酶基因cDNA序列及其克隆: 本发明是辽宁省大连蛇岛蝮蛇毒液中类凝血酶基因cDNA序列及其克隆,属于生物工程领域。本发明提供了来自于辽宁省大连蛇岛蝮蛇(Gloydius Shedaoensis)毒液中编码类凝血酶的基因cDNA全序列及其相应的氨基酸序...; 安利佳杨青胡学军; 文献传递

高亲和力抗乙型肝炎病毒PreS1的人源单链抗体的获得:天然及免疫抗体库的对比研究( 英文): 2002年; 以健康人的外周血淋巴细胞为来源 ,以偶联BSA的乙型肝炎病毒PreS1肽体外免疫 .分别从免疫和未经免疫的淋巴细胞提取RNA ,扩增抗体基因 ,构建大容量天然单链抗体 (scFv)噬菌体展示文库和体外免疫scFv抗体库 .以PreS1肽进行 3轮淘选后 ,抗原抗体反应结果显示 ,从免疫库中获得了亲和力 10 -7～ 10 -8M的抗乙型肝炎病毒PreS1的单链抗体 ,高于天然库的结果 (10 -6～ 10 -7M ) .测序结果表明两株抗体均为人抗体 .为基因工程抗体用于临床治疗乙型肝炎奠定基础 .同时证明淋巴细胞体外免疫方法构建的免疫抗体库优于大容量天然抗体库 .; 张志超胡学军包永明杨青张红梅安利佳; 关键词：高亲和力乙型肝炎病毒PRES1 人源单链抗体体外免疫

小肽多拷贝基因表达载体的构建及其高效表达(英文)被引量：9: 2002年; 介绍一种快速、高效构建小肽多拷贝基因表达载体的策略 ,并构建了相应的表达载体pETE coT .用人工合成的编码 2 8个氨基酸残基的胸腺素α1基因为模型 ,采用限制酶EcoT14I识别序列CCAAGG为小肽基因两末端序列 ,利用其酶切后可产生非镜相对称粘性末端 ,一次连接反应就构建出一系列不同基因拷贝数的表达载体 ;在小肽基因两端分别引进编码FactorXa和羟胺蛋白切割位点的序列 ,表达出的融合蛋白可被FactorXa和羟胺剪切出不残留任何外源氨基酸的小肽 .不同拷贝数的小肽融合蛋白在大肠杆菌BL2 1(DE3)中均获得高效表达 .; 胡学军张志超包永明杨青安利佳

大容量天然人源单链抗体库的构建及抗乙型肝炎病毒PreS1单链抗体的淘选被引量：1: 2004年; 目的 :从大容量抗体库中淘选全人源化抗乙型肝炎病毒 Pre S1的单链抗体。方法 :以 6 0例健康供者的外周血淋巴细胞为来源 ,构建了 10 1 0人源天然单链抗体库 ,并以 Pre S1抗原肽进行淘选。 3轮淘选后 ,单克隆经 EL ISA检测 ,富集的特异性单克隆经 E.coli HB2 15 1表达后进行 Western检测并测序。结果 :3轮淘选之后 ,噬菌体的投入 /产出比提高了 10 0倍。抗原抗体反应结果显示 ,A4 1 0 =1.0的抗 Pre S1的单链抗体得到富集。Western结果显示其插入的单链抗体片段正确。该抗体基因序列的 DNAPL OT软件分析结果进一步表明该抗体是人抗体 ,其 VH 属于 VH1亚族 ,Vλ属于 Vλ1亚族。结论 :这一技术是获得全人源化抗 Pre S1的单链抗体的有效途径 ,同时为基因工程抗体用于临床治疗乙型肝炎奠定基础。; 盛辉苑春莉张志超胡学军迟宝荣; 关键词：单链抗体乙型乙型细菌噬菌体抗体库

抗乙肝病毒表面抗原PreS1(20-47)的单链抗体在转基因烟草根分泌物中的初步表达: 2003年; 为探索利用植物根分泌表达重组蛋白的可行性,构建了含有抗乙肝病毒表面抗原PreS1(20—47)单链抗体(ScFv)基因的表达载体。该ScFv基因转化烟草后在烟草根部细胞的细胞质和内质网中获得表达。实验结果表明,5’端融合ER导向信号肽的重组ScFv可通过根分泌表达。; 甘强金礼吉聂明珠胡学军安利佳; 关键词：乙肝病毒表面抗原 PRES1 单链抗体转基因烟草

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胡学军