- 双向电泳结合蛋白质印迹技术分析猪囊尾蚴乳酸脱氢酶被引量：1
- 2011年
- 为了研究猪囊尾蚴乳酸脱氢酶(LDH)的表达,试验选择四川省雅江县呷拉乡猪带绦虫病患者,给其口服槟榔-南瓜子驱虫,收集、制备虫卵悬液(8万个/mL),再给3头20日龄三元杂交乳猪猪灌胃虫卵悬液,每头1 mL,40 d后收集、制备猪囊尾蚴蛋白,进行双向电泳(2-DE)分析,将凝胶蛋白斑点转移至聚偏氟乙烯膜(PVDF膜),用自制的大鼠抗猪带绦虫LDH血清作为一抗、健康大鼠血清作为阴性对照进行蛋白质印迹(Western-blotting)分析。结果表明:双向电泳凝胶共检测到(207±9)个蛋白质斑点,相对分子质量(Mr)为14 400～94 000,等电点(pI)为3.0～10.0;试验组特异性抗原抗体阳性杂交斑点为1个,阴性对照未见阳性杂交斑点;将Western-blotting检测的抗原抗体阳性杂交斑点与原双向电泳凝胶斑点进行比对,找到对应蛋白斑点,经ImageMaster 2D Platinum 5.0软件分析后初步确定该蛋白斑点的pI/Mr为7.03/35 368,与猪带绦虫LDH的pI/Mr理论推导值接近,说明猪囊尾蚴表达LDH。
- 方文包怀恩肖靓靓牟荣
- 关键词：猪带绦虫囊尾蚴乳酸脱氢酶双向电泳蛋白质印迹
- 猪囊尾蚴基质金属蛋白酶-9在猪肌肉和脑组织的表达分布
- 2011年
- 应用免疫组化分析猪囊尾蚴基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达。用猪带绦虫卵1 mL(8万个/mL)灌胃20 d龄健康乳猪6头,于感染后40、801、20 d分别宰杀2头猪并取含囊尾蚴的肌肉及脑组织制作4μm厚石蜡切片,采用Envision二步法,观察不同时期寄生在肌肉及脑组织的猪囊尾蚴基质金属蛋白酶-9的表达。结果显示,不同时期寄生在肌肉及脑组织的猪囊尾蚴均表达MMP-9,随着感染时间增加,各组织猪囊尾蚴MMP-9的表达均变化不大(P>0.05),寄生在脑组织的猪囊尾蚴MMP-9的表达要略高于同期寄生在肌肉组织的猪囊尾蚴MMP-9的表达(P<0.05)。感染部位组织学特征不同,猪囊尾蚴MMP-9的表达略有差异。
- 方文肖靓靓包怀恩牟荣
- 关键词：猪囊尾蚴基质金属蛋白酶-9免疫组化
- 未成熟与成熟猪囊尾蚴蛋白双向电泳的图谱分析
- 2011年
- 为从蛋白质水平揭示猪带绦虫入侵中间宿主家猪的免疫逃避机制,应用双向电泳技术分析未成熟与成熟猪囊尾蚴蛋白质表达差异,进行双向电泳图像软件分析。结果表明:未成熟猪囊尾蚴与成熟猪囊尾蚴蛋白的双向电泳凝胶上分别有(217±13)个、(241±17)个蛋白斑点,未成熟猪囊尾蚴表达上调2倍以上的蛋白有6个,下调2倍以上的蛋白有2个。
- 方文肖靓靓包怀恩牟荣
- 关键词：猪带绦虫囊尾蚴双向电泳蛋白质组
- 感染猪囊尾蚴的家猪组织中不同时间IL-6、IL-8、TNF-α和sIL-2R含量变化被引量：8
- 2009年
- 目的研究实验家猪感染猪囊尾蚴不同时间组织中细胞因子IL-6、IL-8、TNF-α和sIL-2R含量变化,从细胞因子角度探讨家猪抗猪带绦虫免疫应答的机制。方法用猪带绦虫虫卵直接灌胃20d龄健康乳猪4头,并以健康乳猪4头作对照。于感染后第40、60、80和120 d取实验组猪肝脏、骨骼肌、心肌、舌肌及脑组织中囊尾蚴寄生处组织200 mg匀浆,用ELISA法测定匀浆上清液中细胞因子IL-6、IL-8、TNF-α和sIL-2R的含量。结果1.肝脏病变组织中4种细胞因子的含量在40d时均明显高于同期对照组(P<0.01);随感染时间延长,4种细胞因子的含量逐渐降低,至80d时与同期对照组差别缩小(P<0.05),120d时肝脏已无囊尾蚴寄生;对照组肝脏组织中4种细胞因子的含量在不同时间始终保持基本稳定。2.肌肉和脑部份病变组织中4种细胞因子的含量在40d时也明显高于同期对照组(P<0.01);随感染时间延长至80d时与同期对照组差别变小(P<0.05),120d时与同期对照组差别无显著性(P>0.05)。3.对照组家猪肝脏中4种细胞因子的含量绝对值高于肌肉和脑组织(P<0.01);实验组肝组织在40d时各种细胞因子的增量更明显高于肌肉和脑组织中的增量(P<0.01)。结论家猪感染猪带绦虫早期,IL-6、IL-8和TNF-α作为前炎性反应因子在家猪肝脏的高水平表达诱导肝脏发生严重的炎症反应,限制和杀灭肝内的早期囊尾蚴,而肌肉和脑组织中这些细胞因子表达稍低,炎症反应相对较轻,因而囊尾蚴易于在这些部位存活。这一点可以从感染后期肌肉、脑组织中的囊尾蚴数量远多于肝脏而得到证实。
- 方文包怀恩肖靓靓牟荣
- 关键词：猪带绦虫猪囊尾蚴SIL-2R
- 猪带绦虫囊尾蚴在实验感染家猪体内的分布及发育
- 2008年
- 目的:探讨猪带绦虫卵实验感染中间宿主家猪后,不同时期囊尾蚴在家猪体内各个器官的分布及发育情况。方法:以猪带绦虫卵实验感染20～30日龄的家猪4头,在感染后不同时间宰杀感染家猪,肉眼观察囊尾蚴在家猪体内各个器官上的分布数量及大小。结果:感染后第40天剖杀家猪,多数脏器和组织,如肝脏、心脏、脑、肺、舌、四肢及驱干肌肉内有未成熟囊尾蚴寄生;感染第80天时各器官及组织内囊尾蚴先后发育成熟,囊尾蚴随感染时间增加而逐渐增大;感染第120天或第150天时,除肝脏外各器官及组织内仍可见大量成熟囊尾蚴,且无死亡和钙化现象,而此时肝脏内囊尾蚴几乎全部死亡和钙化;在实验全过程中,肾脏和脾脏未见囊尾蚴寄生。结论:猪囊尾蚴除在四肢肌肉等主要寄生部位生长外,还可以在猪的肝脏内寄生,但是随感染时间增加会逐渐死亡和钙化,表明在当前生猪快速出栏养殖过程中,猪肝脏无囊尾蚴寄生时,其余主要寄生部位如四肢和驱干肌肉内仍有囊尾蚴寄生,提示在生猪检验检疫工作中应予以重视。
- 方文肖靓靓包怀恩牟荣
- 关键词：囊尾蚴心脏骨骼
- 猪囊尾蚴谷胱甘肽S-转移酶的表达研究被引量：1
- 2011年
- 目的应用免疫组化、双向电泳（2-DE）结合蛋白质印迹（Western-blotting）技术分析猪囊尾蚴谷胱甘肽S-转移酶（GST）的表达。方法用猪带绦虫卵1 mL（8万个/mL）灌胃20d龄健康乳猪6头,于感染后40d、80d和120 d分别宰杀2头猪并取含囊尾蚴的肌肉及肝脏（120 d除外）制作4μm厚石蜡切片,采用Envision二步法,观察不同时期寄生在肌肉及肝脏的猪囊尾蚴GST的表达;同时制备感染后40d取自肌肉的猪囊尾蚴蛋白进行2-DE分析,将凝胶蛋白斑点转移至聚偏氟乙烯膜（PVDF膜）,用本课题组自制的大鼠抗猪带绦虫GST血清作为一抗、健康大鼠血清作为阴性对照进行western-blotting分析。结果不同时期寄生在肌肉及肝脏的猪囊尾蚴均表达GST,随感染时间增加,寄生在肌肉的猪囊尾蚴GST的表达变化不大（P〉0.05）,寄生在肝脏的猪囊尾蚴GST的表达升高（P〈0.05）;双向电泳凝胶共检测到207±9个蛋白质斑点,相对分子质量（Mr）为14 400-94 000,等电点（pI）为3.0-10.0。Western-blotting分析显示,实验组特异性抗原抗体阳性杂交斑点为1个,阴性对照未见阳性杂交斑点。将Western-blotting检测的抗原抗体阳性杂交斑点与原双向电泳凝胶斑点进行比对,找到对应蛋白斑点,经ImageMaster 2D Platinum 5.0软件分析后初步确定该蛋白斑点的pI/Mr为6.6/25 548,与猪带绦虫GST的理论推导值接近。结论感染时间及感染部位组织学特征不同,猪囊尾蚴GST的表达略有差异。
- 方文肖靓靓包怀恩牟荣
- 关键词：猪带绦虫囊尾蚴谷胱甘肽S-转移酶双向电泳蛋白质印迹
- 亚洲带绦虫囊尾蚴特异性抗原筛选和鉴定
- 2011年
- 目的对亚洲带绦虫囊尾蚴的特异性抗原进行筛选、鉴定和生物信息学分析。方法 6头20 d龄三元杂交乳猪随机分为实验组和对照组,实验组每头灌胃亚洲带绦虫虫卵悬液8.4万个;20 d后,分别制备实验组及对照组心脏血混合血清;收集、制备实验组亚洲带绦虫囊尾蚴蛋白并进行双向电泳分析,将凝胶蛋白斑点转移至聚偏氟乙烯膜,用实验组及对照组混合血清(均为1∶10)为一抗,羊抗猪辣根过氧化物酶-IgG(1∶200)为二抗,进行蛋白质印迹分析和质谱鉴定。结果双向电泳凝胶共检测到(204±11)个蛋白质斑点,相对分子质量为14 400～94 000 kPa,等电点(pI)为3.0～10.0;筛选出6个特异性抗原,经质谱鉴定出其中2个蛋白,分别为ATP酶管家基因3-类蛋白2(AT-Pase family gene 3-like protein 2)和ATP合成酶β亚基(ATP synthase beta subunit),均与美国国家生物技术信息中心(NCBI)网上登录的亚洲带绦虫成虫蛋白一致,确定为亚洲带绦虫囊尾蚴特异性抗原。结论获得2个亚洲带绦虫囊尾蚴特异性抗原,其免疫原性有待进一步研究,以便为研制抗囊尾蚴病疫苗提供参考。
- 方文肖靓靓包怀恩牟荣
- 关键词：亚洲带绦虫囊尾蚴抗原双向电泳蛋白质印迹质谱
- 猪囊尾蚴感染家猪的组织病理学动态观察
- 2012年
- 将4头20日龄三元杂交乳猪感染猪带绦虫虫卵，8×10^4个／头，感染后第40、80、120和150天采集有囊尾蚴寄生的肝、肌肉和脑组织，制备病理切片，观察囊尾蚴发育过程中周围组织的病理反应。结果显示，感染第40～80天，肝脏内寄生的囊尾蚴被宿主纤维结缔组织增生形成的外膜包围，与肝组织交界处有大量炎症细胞浸润；感染第120天，大部分囊尾蚴出现死亡或钙化；感染第150天，囊尾蚴已全部死亡或钙化。感染第40天，寄生于骨骼肌和舌肌的囊尾蚴周围有炎症细胞浸润，邻近头节的肌纤维炎症反应较囊壁其余部位严重；感染第80～150天，囊尾蚴周围炎症细胞浸润呈带状分布。心肌的病理反应与骨骼肌和舌肌相似．但浸润的炎症细胞稍多。感染第40天。寄生于脑组织的囊尾蚴周围有少量炎症细胞浸润，感染第80～150天，囊尾蚴周围有大量炎症细胞浸润，形成炎症带。猪囊尾蚴寄生的周围组织的炎症反应随感染时间延长逐渐加强，且肝脏的炎症反应强于肌肉和脑组织的反应。
- 方文肖靓靓包怀恩牟荣
- 关键词：猪囊尾蚴肝脏肌肉病理学
- 猪带绦虫囊尾蚴与亚洲带绦虫囊尾蚴蛋白双向电泳图谱分析被引量：3
- 2011年
- 将2头20日龄三元杂交乳猪分别感染猪带绦虫虫卵和亚洲带绦虫虫卵,8×104个/头。感染后40 d分别收集寄生在肝脏的未成熟猪带绦虫囊尾蚴(简称猪囊尾蚴)和亚洲带绦虫囊尾蚴,制备囊尾蚴蛋白,并进行蛋白双向电泳分析,用ImageMaster 2D Plantinum 6.0软件分析差异表达蛋白。结果显示,感染后40 d肝脏寄生的未成熟猪囊尾蚴和亚洲带绦虫囊尾蚴蛋白的双向电泳凝胶上分别有(236±12)和(231±14)个蛋白斑点,差异表达2倍以上的蛋白共10个,其中猪囊尾蚴表达上调的蛋白3个,下调的蛋白7个。
- 方文肖靓靓包怀恩牟荣
- 关键词：猪带绦虫亚洲带绦虫囊尾蚴双向电泳蛋白质组
- 谷胱甘肽S-转移酶和乳酸脱氢酶在亚洲带绦虫囊尾蚴中的表达被引量：1
- 2011年
- 为开发相关疫苗和治疗靶分子,应用免疫组化、双向电泳（2-DE）结合蛋白质印迹（Western-blotting）技术对亚洲带绦虫囊尾蚴谷胱甘肽S-转移酶（GST）和乳酸脱氢酶（LDH）的表达进行了研究。结果表明：亚洲带绦虫囊尾蚴表达GST,囊尾蚴的双向电泳凝胶共检测到204±11个蛋白质斑点,相对分子质量为Mr14 400~94 000,等电点（pI）为3.0~10.0;Western-blotting分析显示,GST和LDH特异性抗原抗体阳性杂交斑点均为1个,阴性对照均未见阳性杂交斑点;将Western-blotting检测的抗原抗体阳性杂交斑点与原双向电泳凝胶斑点进行比对,均找到对应蛋白斑点,经ImageMaster 2D Platinum 6.0软件分析后初步确定,该蛋白斑点的pI/Mr分别为6.5/25 588和8.2/35 318,与亚洲带绦虫GST和LDH的pI/Mr理论推导值接近。亚洲带绦虫囊尾蚴表达GST和LDH。
- 方文肖靓靓包怀恩牟荣
- 关键词：亚洲带绦虫囊尾蚴谷胱甘肽S-转移酶乳酸脱氢酶双向电泳蛋白质印迹
