窦永喜
- 作品数：189 被引量：519H指数：12
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划公益性行业(农业)科研专项国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生经济管理更多>>
- 重组猪干扰素-γ的体外抗弓形虫作用被引量：2
- 2008年
- 在体外以不同剂量的重组猪IFN-γ刺激PK15细胞和猪腹腔巨噬细胞,观察了其对弓形虫入侵细胞和在细胞内增殖的影响。结果表明,随着重组猪IFN-γ剂量的增大,巨噬细胞的抗弓形虫作用逐渐增强,而不同浓度的重组猪IFN-γ对弓形虫入侵PK15细胞均无明显影响。推测重组猪IFN-γ可激活巨噬细胞抑制弓形虫的入侵和增殖,并与剂量有关;同时说明IFN-γ在非吞噬细胞内与在巨噬细胞内的作用不同。
- 潘晓梅窦永喜岳城才学鹏
- 关键词：刚地弓形虫PK15细胞腹腔巨噬细胞
- 猪带绦虫六钩蚴45W-4B基因的克隆和表达
- 囊虫和绦虫病在中国大部分地区是一个重要的公共卫生问题,对人的健康危害很大。猪囊尾蚴感染率也较高,每年造成的经济损失达20亿元。囊虫病的免疫诊断和预防之所以难度很大,主要原因是抗原成分复杂且不能大量生产。通过寻找免疫相关基...
- 骆学农郑亚东窦永喜景志忠才学鹏
- 文献传递
- 小反刍兽疫病毒Nigeria75／1株F基因的克隆与原核表达被引量：6
- 2009年
- 提取小反刍兽疫病毒(PPRV)疫苗株Nigeria 75/1的总RNA,用RT-PCR方法扩增F基因并克隆到pMD18-T载体中,以鉴定正确的质粒为模板克隆去掉N端信号肽和跨膜区的F基因(F-1)并亚克隆于原核表达载体pET-30a(+),得到重组质粒pET30-F-1,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE、Western-blot分析,同时将重组蛋白免疫SPF家兔制备抗体,进行间接免疫荧光检测并用ELISA测定抗体效价。结果显示,目的基因正确插入了表达载体,在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达,用重组蛋白免疫3次后,兔血清抗体达到较高水平,Western-blot分析说明表达产物能够与兔血清抗体发生特异性反应,间接免疫荧光试验显示重组蛋白免疫兔阳性血清能够识别PPRV Nigeria 75/1株全病毒抗原。表明,重组蛋白在原核表达系统内得到了高水平的表达,并且具有较好的反应原性。
- 杨帆窦永喜朱学亮骆学农岳城才学鹏
- 关键词：小反刍兽疫病毒F蛋白克隆原核表达
- 小反刍兽疫病毒H和F蛋白在细胞融合中的作用被引量：2
- 2018年
- 【目的】研究小反刍兽疫病毒囊膜糖蛋白(血凝素蛋白和融合蛋白)在病毒囊膜和宿主细胞膜融合过程中所发挥的作用。【方法】制备构建成功的小反刍兽疫病毒囊膜糖蛋白和病毒受体SLAM、Nectin4的真核表达质粒pCMV-HA-H、pCAGGS-Flag-F、pCMV-Myc-SLAM和pCMV-Myc-Nectin 4,将其组合转染至CHO-K1细胞,通过显微观察和间接免疫荧光技术分析小反刍兽疫病毒H和F蛋白在病毒融合过程中的功能。【结果】除空白对照组和重组质粒单独转染组细胞中没有发现合胞体外,其余组细胞中均出现了合胞体,而且F和H蛋白共转染组合胞体的数目明显较多;并在共表达H、F蛋白的细胞中观察到了蛋白分布极化的帽子现象。【结论】PPRV F蛋白是病毒囊膜和细胞膜融合的必需蛋白,但需要与PPRV H共同作用才能使病毒成功入侵靶细胞。
- 邓瑞雪蒙学莲朱学亮才学鹏窦永喜张志东
- 关键词：血凝素蛋白融合蛋白膜融合小反刍兽疫病毒
- 小反刍兽疫病毒F基因核酸疫苗的构建及免疫原性被引量：4
- 2013年
- 为了寻求一种有效的疫苗用于预防小反刍兽疫(PPR),运用RT-PCR方法扩增PPRV的F基因并将其克隆到pCAGGS载体中,构建了真核表达质粒pCAGGS-F。将构建的重组质粒转染哺乳动物细胞上进行瞬时表达,通过Western-blotting、间接免疫荧光检测证实F蛋白得到了高效表达。将重组质粒作为DNA疫苗,通过脚掌皮内注射免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA检测抗体的产生情况。结果显示,pCAGGS-F重组质粒在有无佐剂CpG的情况下均能诱导小鼠产生较高的抗体水平。
- 杨香芳窦永喜王秋霞骆学农曾巧英朱启运才学鹏
- 关键词：小反刍兽疫病毒DNA疫苗F基因免疫印迹间接免疫荧光
- 猪带绦虫六钩蚴45W-4BX的高效表达、纯化及活性分析被引量：8
- 2006年
- 截去猪带绦虫六钩蚴45W-4B基因的N端信号肽和C端17个疏水氨基酸序列形成45W-4BX。设计特异性表达引物,PCR扩增目的片段,经BamH和EcoR酶切后与表达载体pGEX-4T-1连接转化BL21感受态细胞。用酶切及PCR扩增鉴定阳性克隆,测序证明阅读框是否正确。用IPTG诱导表达,产物进行SDS-PAGE电泳,Western blot分析其活性。包涵体经纯化、透析复性后作为包被抗原检测囊虫猪和囊虫病人血清中的4B抗体。结果表明,截断的4BX(351bp)基因在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物为相对分子质量40000的融合蛋白,并能被囊虫病人血清所识别。ELISA检测表明,囊虫病人血清中含有高滴度的4B抗体,所以45W-4BX的表达产物有可能作为候选抗原用于囊虫病的诊断和免疫预防。
- 骆学农郑亚东吴旭刚窦永喜景志忠才学鹏
- 关键词：猪带绦虫六钩蚴活性分析
- 羊口疮病毒分子生物学的研究进展被引量：38
- 2013年
- 羊口疮病毒主要感染山羊和绵羊,近年来发现其也可感染包括人在内的多种动物,为一种人兽共患病。对羊口疮病毒的病原学、基因组结构、应用研究、免疫学特性等方面进行了综述,同时对已鉴定的几种病毒重要免疫调节蛋白和毒力基因及其功能进行了详细阐述,较为深入地探究了羊口疮病毒干扰宿主免疫系统及其免疫逃避的分子机制。
- 闫丰超邵佳窦永喜
- 关键词：羊口疮病毒基因组学毒力基因免疫调节
- 小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析检测方法的建立被引量：5
- 2023年
- 本研究旨在建立小反刍兽疫病毒H蛋白抗体的化学发光免疫分析检测方法。以H蛋白4个反应原性较好的B细胞表位串联后为检测抗原,在确定抗原包被量和血清稀释度,优化血清和酶标二抗反应时间的基础上,用ROC曲线分析确定检测临界值,建立了小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析检测方法,然后对该方法进行敏感性、特异性和重复性评价。结果显示,建立的小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析检测方法最佳抗原包被浓度为1.5×10^(-6)μg/孔,待检血清最佳稀释度为1∶100;血清及酶标二抗孵育时间均为10 min,检测方法的临界值为S/P=9.77%,批内及批间变异系数均小于10%;与口蹄疫、羊痘、蓝舌病及山羊传染性胸膜肺炎阳性血清不发生交叉反应;用建立的化学发光法和市售小反刍兽疫抗体cELISA试剂盒平行检测247份田间血清,两者相对符合率为94.33%,但化学发光法敏感性更高。研究结果表明,建立的小反刍兽疫病毒H蛋白抗体化学发光免疫分析方法灵敏、特异、稳定,可用于田间血清样品小反刍兽疫抗体检测。
- 钱榜刘振东赵印李静PRAJAPATI Meera李彦敏孙跃峰窦永喜
- 关键词：小反刍兽疫病毒B细胞表位化学发光免疫分析法
- 猪带绦虫六钩蚴免疫原基因的克隆、表达与结构预测被引量：1
- 2005年
- 从猪带绦虫六钩蚴cDNA表达文库中筛选、克隆的Ts01基因,设计表达性引物,亚克隆到pGEX-4T-1表达载体,构建了pGEX-GST-Ts01的融合表达重组载体,转化BL21寄主菌和IPTG诱导表达后,经SDS-PAGE和Western蛋白分析,表明成功地高效表达了约40000左右的融合蛋白质,与预测的相对分子质量大小一致,表达量达40%左右。表达产物具有免疫学活性,而且呈可溶性,未形成包涵体,这与用蛋白质软件分析的Ts01编码蛋白水溶性相一致。
- 景志忠窦永喜蒙学莲吴国华才学鹏
- 关键词：猪带绦虫六钩蚴免疫筛选基因克隆
- 仔猪大肠埃希氏菌K88ac-K99-ST<Sub>1</Sub>-LT<Sub>B</Sub>四价基因工程灭活疫苗生产用菌株及其构建方法和灭活疫苗生产方法
- 本发明公开了种仔猪大肠埃希氏菌K88ac-K99-ST<Sub>1</Sub>-LT<Sub>B</Sub>四价基因工程灭活疫苗生产用菌株BL21(DE3)(pXKKSL)，菌种保藏编号：CGMCC No.3491。还公...
- 才学鹏卫广森许崇波窦永喜
