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汉坦病毒76-118株M2基因的克隆及蛋白表达: 2012年; 实验以汉坦病毒76-118株M基因为模板进行PCR扩增得到含完整编码汉坦病毒G2蛋白基因M2的1 600 bp DNA片段,将此基因片段重组到T载体pMD18中,转化至大肠埃希菌DH5α后,筛选阳性菌落扩增培养,提取重组质粒,双酶切鉴定后,克隆至表达载体pGEX-6P-1-M2,亲和层析法纯化融合蛋白,产物进行Western-Blot鉴定。实验证实通过以质粒pGEX-6P-1为载体,可构建编码汉坦病毒76-118株包膜糖蛋白G2的M2基因的原核表达载体pGEX-6P-1-M2,并可观察G2蛋白在原核细胞中的表达。; 王美莲刘兵史俊岩郑兰艳罗恩杰; 关键词：汉坦病毒原核表达载体蛋白表达

双单链抗体夹心法诊断汉坦病毒感染的初步研究: 2009年; 目的制备检测汉坦病毒感染的双单链抗体夹心ELISA诊断试剂,并予以评价。方法以抗汉坦病毒NP抗原单链抗体包被反应板,以辣根过氧化物酶(HRP)标记大肠埃希菌表达的抗NP抗原单链抗体,并制成双单链抗体夹心诊断试剂,检测56份早期肾综合征出血热(HFRS)患者血清及66份非HFRS对照血清。结果56份HFRS患者血清中,检测出29例阳性,阳性率为51.8%,对照组66例,检测结果均为阴性。结论研制的试剂特异性好,价格低廉。; 刘兵史俊岩王舰王美莲王斯郑兰艳牟玲罗恩杰; 关键词：汉坦病毒试剂

汉坦病毒76-118株M2基因的克隆及蛋白表达: 目的：汉坦病毒(HV)属于布尼亚病毒科汉坦病毒属，是引起急性病毒性传染病肾综合症出血热(HFRS)的病原体。目前，根据血清学及分子生物学方法汉坦病毒又可分为汉滩病毒、汉城病毒、普马拉病毒、希望山病毒等不同的型别，其中汉滩...; 王美莲; 关键词：汉坦病毒原核表达载体蛋白表达肾综合症出血热; 文献传递

抑制麻疹病毒体外复制的效应性小干扰RNA的鉴定被引量：1: 2009年; 为了鉴定抑制麻疹病毒体外复制的靶向Rab9 GTPase基因效应性小干扰RNA(siRNA),根据siRNA设计原则和Rab9 GTPase基因的mRNA序列,设计并化学合成8对靶向Rab9 GTPase基因的siRNAs和1对阴性对照siRNA,经脂质体法转染Vero-E6细胞株,转染10 h后感染麻疹病毒Edmonston株。通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染后细胞内Rab9 GTPase mRNA水平;通过标准蚀斑试验检测麻疹病毒滴度。同对照组相比,8对靶向Rab9 GTPase基因siRNAs中的2对(Rab9-4和Rab9-7),以时间和剂量依赖性的方式显著地抑制细胞内Rab9 GTPase mRNA表达和麻疹病毒的复制(抑制率高达90%以上),其他的siRNAs对细胞内Rab9 GTPase mRNA表达和麻疹病毒的复制的抑制性效应则低于50%。结果表明,Rab9-4和Rab9-7是体外抑制麻疹病毒复制的最有效的siRNAs,这些siRNAs靶序列能被用来深入研究RNA干扰治疗麻疹病毒感染的可能性。; 史俊岩王美莲刘兵罗恩杰; 关键词：麻疹病毒 SIRNA

抗汉坦病毒核衣壳蛋白单链抗体基因的克隆与鉴定: 2009年; 目的将已筛选出的抗汉坦病毒核衣壳蛋白(NP)抗原单链抗体基因克隆入原核表达载体pGEX-6p-1,构建重组表达质粒pGEX-6P-1-scFv。方法提取含抗NP抗原单链抗体基因的T7噬菌体DNA,此为模板,PCR扩增单链抗体基因,BamHⅠ和SalⅠ双酶切,经连接酶与BamHⅠ和SalⅠ双酶切的表达载体pGEX-6p-1连接;重组DNA转化入宿主菌E.coliBL-21(DE3),琼脂糖凝胶电泳初筛选阳性重组质粒,并用PCR法、双酶切法及DNA测序鉴定。结果重组质粒pGEX-6P-1-scFv经BamHⅠ和SalⅠ双酶切,片段大小分别为5 000 bp和750 bp,与预期值一致;重组质粒PCR产物大小为750 bp,与预期值一致;测定重组质粒序列,并与scFv序列比较,结果相一致。抗NP单链抗体基因序列克隆入表达载体pGEX-6p-1。结论成功构建了含抗汉坦病毒NP抗原单链抗体基因的重组原核表达质粒pGEX-6P-1-scFv。; 刘兵史俊岩王舰王美莲王斯郑兰艳牟玲罗恩杰; 关键词：汉坦病毒单链抗体克隆

RNA干扰抑制麻疹病毒体外复制的实验研究被引量：1: 2010年; 为了研究短发夹RNA（shRNA）介导的RNA干扰对麻疹病毒体外复制的抑制作用,构建靶向与麻疹病毒复制密切相关的宿主细胞基因Rab9 GTPase基因特异性shRNA表达载体,分别转染Vero-E6和B95a细胞后感染麻疹病毒Edmonston株和野生株。逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印迹技术（Western-blot）检测转染细胞内Rab9 GTPase基因表达水平;标准蚀斑试验测定麻疹病毒滴度。结果显示转染细胞内Rab9 GTPase mRNA和蛋白质的表达水平同对照组相比明显降低,标准蚀斑试验显示麻疹病毒的复制受到显著抑制,抑制率达到90%以上。结果表明载体介导的shRNAs能通过特异性下调Rab9 GTPase基因表达抑制麻疹病毒体外复制,Rab9 GTPase可能成为治疗麻疹病毒感染的RNA干扰靶。; 史俊岩王美莲刘兵罗恩杰; 关键词：麻疹病毒 RNA干扰 SHRNA GTPASE

人源抗汉坦病毒核衣壳蛋白T7噬菌体抗体库的构建被引量：5: 2007年; 构建人源T7噬菌体单链抗体(scFv)库筛选抗汉坦病毒核衣壳蛋白(NP)抗体。从肾综合征出血热恢复期患者外周血淋巴细胞中提取总RNA,反转录合成cDNA第一条链,PCR分别扩增抗体重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL),经重叠延伸拼接(SOE)PCR组成scFv基因,并将其与T7噬菌体载体的2个臂相连接。体外包装后,在宿主菌BLT5403中,扩增重组噬菌体抗体库。以基因工程表达NP进行4轮“吸附-洗脱-扩增”的筛选,酶免疫实验检测抗体活性。所建抗体库库容为1.35×107,扩增后初级库滴度为2.12×1010pfu/mL。以NP抗原筛选后抗体出现特异性富集,经酶免疫实验鉴定,得到2株与NP抗原特异结合的噬菌体抗体。结果表明,研究成功构建了人源抗NP蛋白T7噬菌体抗体库。; 刘兵王美莲王斯史俊岩郑兰艳牟玲罗恩杰; 关键词：汉坦病毒 SCFV

疟原虫和蠕虫混合感染免疫相关机制的研究进展: 2012年; 疟疾是一类由疟原虫引起的寄生虫传染病,疟原虫与蠕虫混合感染现象在热带和亚热带等疟疾流行区普遍存在,是当前寄生虫免疫研究领域内的热点之一。本文就疟原虫与蠕虫混合感染的研究现状及相关免疫机制作一综述。; 王美莲罗恩杰; 关键词：疟疾蠕虫

PBL教学模式在病原生物学理论教学中的应用被引量：4: 2008年; PBL教学法是一种源自西方,近年来引入我国全新教学模式,它主要培养学生的自学能力,发展学生综合思考能力和解决实际问题能力。本文作者总结了中国医科大学病原生物学教研室三年来在理论课教学中采用PBL教学模式的实践经验,通过样本成绩分析证明了PBL教学方法对于提高学生综合思考能力很有帮助,同时在意见反馈结果中也显示学生对于PBL教学模式有很高的热情,可以很好地发挥学生的主观能动性。; 王斯王美莲王继春郑兰艳史俊岩罗恩杰; 关键词：PBL 病原生物学主观能动性

七年制医学生及教师对于在整合课程中开展PBL教学的评价研究被引量：16: 2015年; PBL教学方法是一套基于学习情境的教学方法 ,也称之为问题式教学方法 ,其是医学教育中的一种重要教学方法 ,是我国医学教育改革提倡的新方法。由于该方法在我国的发展时间较短,还没有积累起足够的实践经验,所以有必要在目前的七年制医学教育中探索和评价其适应性和效果,以为日后的医学教育提供有利的参考。鉴于此,本文主要分析了PBL教学在目前的医学教育中的效果和适应性,以期有利于医学教育改革的发展。; 孙颖王美莲曹雅明祁赞梅庞维罗恩杰; 关键词：PBL教学方法适应性

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