王晴
- 作品数：4 被引量：6H指数：1
- 供职机构：南京农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 1株禽致病性大肠杆菌T4噬菌体的分离及其尾丝蛋白的比较分析
- 2013年
- 禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)是养禽业最重要的细菌病原之一,由于抗生素治疗存在兽药残留及耐药性等问题,噬菌体作为一种替代的治疗方法,应受到重视。T4噬菌体是专性的裂性噬菌体,对其尾丝蛋白的研究对进一步阐明噬菌体与宿主结合以及新型抗菌制剂的开发非常重要。试验中分离到1株禽致病性大肠杆菌T4噬菌体,并且对该株噬菌体以及本实验室前期分离到的2株T4噬菌体的尾丝蛋白基因进行扩增,经测序后,与NCBI上下载的其他T4同名基因进行氨基酸的分析和比对,结果表明在比对的137个氨基酸中,第50至65位之间的氨基酸的保守性最差,同源性不超过25%,推测此区域为影响尾丝蛋白特异性的关键区域。
- 王晴张爔文陈绵绵张炜
- 关键词：禽致病性大肠杆菌T4噬菌体宿主特异性
- 大肠杆菌前噬菌体突变诱导及其噬菌能力的改变
- 引言大肠杆菌是人和多种动物感染和发病的重要病原。目前,抗生素是主要的预防和治疗制剂,然而,抗生素残留及细菌的耐药性日益增强成为现在细菌病防控的重要问题。噬菌体作为一种生物防控细菌病的手段重新得到重视。但噬菌体相对狭窄的宿...
- 陈绵绵徐军田王晴姚火春陆承平张炜
- 鸭疫里氏杆菌多种血清型间接ELISA检测方法的建立被引量：5
- 2015年
- 【目的】鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)是一种重要的禽病病原,分为21个血清型。但一直缺乏一种针对多种血清型广泛适用的抗体检测方法。前期的研究表明,外膜蛋白A(Outer membrane protein A,Omp A)广泛存在于多种血清型的RA菌株中,是一种重要的免疫原性蛋白,并且其基因序列在RA血清型之间具有高度的保守性,提示其可以作为RA感染血清抗体检测的靶点分子。以重组蛋白Omp A建立间接酶联免疫吸附试验检测RA的抗体。【方法】通过诱导表达条件的摸索及蛋白纯化,获得适用于ELISA包被的重组Omp A抗原。通过Western-blot证明重组蛋白Omp A是否与RA多种血清型发生免疫学反应。进行方阵试验以确定ELISA抗原的最佳包被浓度、被检测血清的反应浓度。重复性、特异性和敏感性试验检查该方法的实用性。【结果】实验证实加入1%乙醇的诱导培养基有利于重组蛋白的可溶性表达。Western-blot结果表明,重组蛋白Omp A可以与1、2、6、10、11、13、14和17型多种RA主要流行血清型有良好的免疫反应性。经方阵试验确定抗原的最佳包被浓度为8 mg/L,待检血清的最佳稀释度为1:160。所建立检测方法具有良好的重复性、特异性和敏感性。【结论】实验建立的鸭疫里氏杆菌多种血清型间接ELISA检测方法可以用于免疫后抗体消长以及感染性抗体的检测。
- 季慕寅王晴翟志鹏陈绵绵马彩凤姚火春陆承平张炜
- 关键词：鸭疫里氏杆菌外膜蛋白A间接酶联免疫吸附试验
- 马链球菌兽疫亚种ATCC35246酮基转移酶的原核表达及其免疫保护试验被引量：1
- 2012年
- 根据已发表的马链球菌兽疫亚种MGCS10565酮基转移酶(transketolase)的基因序列,设计并合成引物。以ATCC35246株基因组DNA为模板,通过PCR技术,扩增出目的基因并定向克隆至表达载体pET-28a(+)中,然后将重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,分析并纯化表达产物。选用ICR小鼠作为实验动物模型,以纯化的重组融合蛋白通过皮下注射途径免疫小鼠,并用间接ELISA法监测小鼠血清中的抗体效价。结果表明重组蛋白免疫小鼠后能产生有效的免疫应答,血清中抗体水平有明显的升高。加强免疫2周后,以5LD50的ATCC35246强毒株攻击免疫组及对照组,结果免疫组小鼠的保护率可达37.5%。表明原核表达产物免疫ICR小鼠,可使其对同源菌株攻击产生一定的保护作用,在亚单位疫苗研制中具有潜在的应用价值。
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- 关键词：马链球菌兽疫亚种酮基转移酶原核表达免疫保护
