温立斌
- 作品数：231 被引量：507H指数：13
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 猪博卡样病毒TaqMan荧光定量PCR方法的建立与应用
- 博卡病毒(Bocavirus)属于细小病毒科、细小病毒亚科、博卡病毒属.近年来,许多国家都报道了人博卡病毒的存在和流行.2009年,瑞典科学家在患有断奶仔猪多系统衰竭综合征的猪淋巴结中检测出猪博卡样病毒(porcineb...
- 李彬马俊杰刘彦玲温立斌张雪寒何孔旺
- 一株无毒ST28猪链球菌及其应用
- 本发明涉及一株无毒ST28猪链球菌及其应用，属生物技术领域。采集健康屠宰猪的扁桃体样品，增菌处理后提取细菌的DNA，应用聚合酶链式反应鉴定<I>cps2j</I>基因，随后经过细菌平板分离获得纯培养细菌，对纯培养细菌进行...
- 周俊明何孔旺虞凤倪艳秀吕立新张雪寒祝昊丹俞正玉茅爱华温立斌李彬郭容利王小敏汪伟周萍沈江萍
- 肠出血性大肠杆菌O157∶H7 Intimin和Tir-Tccp蛋白质对小鼠的免疫保护性
- 2011年
- 为了研究不同浓度的肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7 Intimin和Tir-Tccp蛋白质对接受1010 CFUEHEC O157∶H7小鼠的免疫保护作用,将Intimin和Tir-Tccp蛋白质和佐剂充分乳化后,通过皮下多点注射免疫小鼠,对照组注射等量的磷酸盐缓冲液。共免疫2次,间隔14 d,末次免疫后14 d攻毒1只小鼠EHEC O157∶H7 1010CFU。每次免疫后的14 d通过断尾采血,用间接ELISA法检测血清抗体。攻毒后,观察小鼠精神状态,记录死亡数并检测排菌量。ELISA检测结果表明,Tir-Tccp蛋白质诱导小鼠产生IgG抗体水平明显升高,而Intimin诱导产生的IgG抗体升高不明显。攻毒后,各免疫组小鼠均死亡1只,存活14只,存活率为93.3%;对照组小鼠死亡4只,存活6只,存活率为60.0%。免疫组在攻毒后6 d,粪便中检测不到EHEC O157∶H7,对照组在攻毒后13 d仍有较高的排菌量。表明Intimin和Tir-Tccp蛋白质对小鼠起到了有效的免疫保护作用,能够减少EHEC O157∶H7在小鼠体内的定殖。
- 赵攀登张雪寒何孔旺姜平卢维彩栾晓婷叶青温立斌倪艳秀李彬王小敏郭容利周俊明吕立新俞正玉茅爱华
- 关键词：免疫原性小鼠
- 一种检测猪博卡病毒的PCR方法
- 本发明涉及一种检测猪博卡病毒的PCR检测方法，属于生物技术领域。具体采用25μl的PCR反应体系，在0.2mlPCR反应管内分别加入缓冲液，上、下游引物，DNA聚合酶以及提取的DNA模板，用灭菌超纯水加至总体积，将试剂混...
- 李彬何孔旺温立斌毛立张雪寒倪艳秀
- 文献传递
- 肠出血性大肠杆菌O157:H7Tir与Tccp的重组蛋白
- 本发明涉及肠出血性大肠杆菌O157:H7转位紧密粘附素受体(Tir)与内膜素受体偶联细胞骨架蛋白(TccP)重组蛋白的制备方法及应用，属于生物技术领域。取tir和tccp基因C端序列串联克隆，获得pGEM-T-tir-t...
- 何孔旺张雪寒卢维彩赵攀登温立斌郭容利李彬王小敏倪艳秀吕立新周俊明俞正玉茅爱华周萍沈江萍
- 文献传递
- 6种中药生物碱对内毒素诱导内皮细胞分泌白介素-1α、NO和6-酮-前列腺素F_(1α)的影响被引量：9
- 2012年
- 通过研究青藤碱、防己诺林碱、水苏碱、川芎嗪、苦参碱和吴茱萸碱6种中药生物碱对细菌内毒素(LPS)作用下猪血管内皮细胞分泌细胞因子白介素-1α(IL-1α)、NO和6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)的影响,探讨生物碱抗LPS的药理作用机制.培养猪血管内皮细胞至单层融合状态,加入LPS刺激,3 h后加入高、中、低3种质量浓度的上述6种中药生物碱,继续培养21 h后收集细胞上清液,用ELISA测定IL-1α、NO和6-keto-PGF1α的含量.结果显示青藤碱、苦参碱和吴茱萸碱能显著降低内皮细胞分泌IL-1α的水平;青藤碱、水苏碱和川芎嗪能显著降低内皮细胞分泌NO的水平;防己诺林碱能显著降低内皮细胞分泌6-keto-PGF1α的水平.结果提示6种中药生物碱具有明显的抗细菌内毒素作用,可在由IL-1α、NO和6-keto-PGF1α介导的机体炎症、水肿和凝血等病理损伤过程中发挥治疗作用.
- 胡屹屹何孔旺温立斌
- 关键词：内毒素白介素-1Α6-酮-前列腺素F1Α
- 国内病猪中猪链球菌2型分离株溶血素基因的PCR检测及序列分析
- 2009年
- 以探明猪链球菌2型（SS2）国内病猪分离株的溶血素基因（sly）的分布情况及其序列为目的。通过聚合酶链反应（PCR）方法检测29株不同年代、不同地区SS2国内分离株的sly，并将其中的5株（SS2-1、HA9801、HA0507、JR0507和ZY05719）sly进行克隆及序列分析。结果显示：29株菌都有sly，其中5株菌的sly的ORF的碱基数目都为1494bp、编码497个氨基酸，核苷酸序列的同源性为99．7％～100．0％，所推导的蛋白质序列的同源性为99．8％～100．0％，其中SS2—1、HA9801、HA0507、JR0507与国外参考株P1／7的序列完全一致。表明中国猪链球菌2型病猪分离株普遍具有sly，且基因序列极为保守。
- 倪艳秀何孔旺俞正玉温立斌吕立新张雪寒郭容利周俊明茅爱华陆承平
- 关键词：猪链球菌2型溶血素基因
- 多重荧光定量PCR检测猪圆环病毒2a、2b和2d基因型方法的建立与应用
- 2023年
- 为建立一种检测猪圆环病毒2型多重实时荧光定量PCR方法,可对3种基因型PCV2a、PCV2b、PCV2d检出并分型。针对3种基因型ORF2基因,在保守序列设计通用引物并分别设计特异Taq Man探针,3条探针分别标记NED、JOE和FAM荧光报告基团,建立多重实时荧光定量PCR反应体系,检测其灵敏性、重复性和特异性。经条件优化多重荧光定量PCR的反应体系为30μL,各型探针加样为0.6μL,退火温度为60℃;最低检测值为PCV2a 100 copies/μL、PCV2b 57 copies/μL和PCV2d 100 copies/μL,而且该方法对猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等其他6种猪源主要病毒核酸检测均为阴性,具有良好的特异性;组内和组间的检测变异系数均小于等于3.6%;通过检测218份阳性样本,结果表明该方法能快速检测猪圆环病毒2型三种主要流行型并同时分型,为PCV2快速分型的诊断提供新方法。
- 钱雯娴肖琦赵霞玲温立斌索朗斯珠何孔旺
- 关键词：猪圆环病毒2型基因型
- 两株猪圆环病毒2型病毒的分离鉴定及其序列分析被引量：1
- 2009年
- 利用PK15细胞从猪断奶后多系统衰竭综合征（PMWS）临床发病与死亡猪中分离到2株病毒；分别命名为Haian（登录号为FJ712216）和Xuancheng（登录号为FJ712215）。利用间接免疫荧光（IFA）和聚合酶链式反应（PCR）对其进行鉴定，并对其全基因组序列进行了测定和分析。结果表明，分离株感染细胞后病毒抗原主要分布在细胞核中，2分离株的基因组全长为1767nt，与世界上其他地区的PCV2分离株密切相关，核苷酸序列同源性达93．7％-97．7％，属于毒力较强的Genotype1。
- 郭容利何孔旺钟书霖温立斌潘群兴
- 关键词：猪圆环病毒2型
- 猪流行性腹泻病毒双抗体夹心ELISA定量检测试剂盒及其应用
- 本发明提供猪流行性腹泻病毒双抗体夹心ELISA定量检测试剂盒及其应用，涉及生物检测领域。抗PEDV N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株PEDV，保藏编号为CCTCC NO:C201710。猪流行性腹泻病毒双抗体夹心ELISA...
- 李彬何孔旺孙杰俞正玉范宝超郭容利茅爱华倪艳秀温立斌袁万哲张雪寒肖琦
- 文献传递
