杨峻
- 作品数：183 被引量：359H指数：9
- 供职机构：湖北省农业科学院更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目公益性行业(农业)科研专项湖北省农业科技创新中心资助项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生化学工程更多>>
- 猪圆环病毒Ⅱ型抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：3
- 2009年
- 建立了检测猪圆环病毒2型血清抗体的间接ELISA方法，并初步应用于临床血清样品的检测。用PCR方法从PCV2 HBZX株中获得截短的核衣壳（capsid，Cap）基因，将该基因克隆到原核表达载体pET-32a（＋）中，构建重组表达质粒pET-Cap，将该重组质粒转化宿主菌Ecoli BL21-CodonPlus（DE3），用IPTG诱导，SDS-PAGE和Western—blot鉴定蛋白的正确表达，表达蛋白Cap分子质量为42ku，可与6×HIS抗体反应；KCI预染切胶纯化目的蛋白，以其为抗原建立检测PCV2感染猪血清抗体的间接ELISA方法。ELISA检测5份血清样品结果变异系数均小于10％。用该方法分别检测湖北、河南等地的91份临床血清样品，阳性率为25％～100％。上述结果表明，所制备的目的蛋白具有较高的纯度和良好的免疫原性，所建立的间接ELISA检测抗体方法，具有良好的重复性，初步临床试用效果良好。
- 李坤温国元罗青平商雨艾地云罗玲王红琳杨峻邵华斌程国富
- 关键词：猪圆环病毒2型原核表达间接ELISA
- 禽霍乱-新城疫二联油乳剂灭活疫苗研究Ⅱ报——疫苗的免疫持续期及保存期试验被引量：6
- 2007年
- 采用新城疫病毒(NDV)Lasota株感染鸡胚尿囊液毒和多杀性巴氏杆菌(禽A型)接种固体培养基收获菌液,经灭活后制备成5批油乳剂灭活苗(批号2001-1～2001-5),用于免疫2月龄以上的青年鸡,试验分一次免疫组和二次免疫组,分别在免疫后1个月、3个月、6个月、9个月进行ND和FC强毒攻击保护试验,结果表明,相同剂量分两次免疫,近期效果差异不明显。一次免疫组,6个月攻毒ND的保护为100/、FC保护为80/;8个月攻毒ND的保护为95/、FC保护为52.5/。二次免疫组,6个月攻毒ND的保护为100/,HI抗体1∶64以上;FC攻毒保护87.5/;8个月攻毒ND的保护为100/,FC保护为77.5/。疫苗保存期试验证明,4～8℃冰箱保存可达18个月,10～20℃保存的有效期为4个月。
- 邵华斌杨峻刘泽文艾地云廖永洪王红琳
- 关键词：禽霍乱新城疫二联疫苗免疫持续期保存期
- 湖北1型鸭疫里默氏杆菌的分离与鉴定被引量：1
- 2010年
- 湖北地区某鸭场20日龄樱桃谷鸭发生疑似鸭疫里默氏杆菌病,临床表现为缩脖、腿发软,部分病鸭表现为仰卧、双腿划动呈游泳状,临死前出现典型的神经症状。剖检病变呈典型的心包炎、肝周炎和气囊炎。用含5%小牛血清的TSA平板从病鸭中分离到8株细菌,经过染色、PCR及测序分析、玻片凝集和动物回归试验,综合分析鉴定为1型鸭疫里默氏杆菌。
- 廖永洪邵璐璐邵华斌杨峻罗玲王红琳杨前平罗青平温国元张蓉蓉艾地云
- 关键词：鸭疫里默氏杆菌
- 新城疫病毒HB92株M基因的克隆和序列分析被引量：3
- 2003年
- 采用RT PCR方法扩增了新城疫病毒 (NDV)无毒耐热株 (HB92株 )M基因 ,将其克隆于 pGEM T载体 ,并进行了序列测定和分析 .结果显示 ,测定的M基因长 12 2 3个核苷酸 ,包含一个 10 95个核苷酸的开放阅读框(ORF) ,编码 36 4个氨基酸 .与已报道的 10株NDVM基因比较 ,核苷酸同源性为 88.4 %～ 95 .8% ,氨基酸同源性为 89.8%～ 95 .3% ,HB92株与V4株M基因核苷酸的同源性最高 (达 95 .8% ) .NDVM蛋白分子中有 9对碱性氨基酸 ,在多肽的第 117～ 12 0位有一个含 4个氨基酸CKKS的特征性结构 .这些结果为揭示NDVHB92株的分子生物学背景 ,了解NDV的分子进化和遗传变异机理 ,进而开发利用HB92株奠定了基础 。
- 陈玉栋潘兹书邵华斌杨峻张楚瑜
- 关键词：新城疫病毒M基因基因克隆分子进化RT-PCR方法
- 禽白血病病毒p27蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2013年
- 以纯化的禽白血病病毒p27重组蛋白作为免疫原,按常规方法免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,通过细胞培养和有限稀释法制备单克隆抗体,最终获得了3株能稳定分泌禽白血病病毒p27蛋白单克隆抗体的细胞株2F3、5C2和5C7。经生物学特性分析,3株杂交瘤细胞染色体数均为90条左右,通过ELISA、Western blot和间接免疫荧光等方法对所获得的3株单克隆抗体进行了鉴定,证明3株单克隆抗体细胞株所分泌的抗体效价高,而且均能够和禽白血病病毒p27蛋白特异性发生反应。说明该3株单克隆抗体均具有与禽白血病病毒p27蛋白发生反应的反应原性。3株单克隆抗体的成功获得为禽白血病病毒抗原表位的分析,病毒的检测以及试剂盒的研发奠定了基础。
- 谢华丽邵华斌杨峻程国富胡薛英谷长勤张万坡罗青平
- 关键词：禽白血病病毒P27蛋白单克隆抗体
- J亚群禽白血病病毒gp85基因的原核表达及间接ELISA方法建立被引量：7
- 2014年
- 为建立检测J亚群禽白血病病毒(ALV-J)抗体间接ELISA方法,本实验根据已发表的ALV-J gp85基因序列设计一对特异性引物,以该病毒cDNA为模板进行PCR扩增,将目的基因克隆于pET-28a(+)载体中,原核表达的重组蛋白约为38 ku,经western blot分析表明,重组蛋白gp85具有良好的反应原性。以纯化的重组蛋白作为包被抗原建立了间接ELISA抗体检测方法,该方法对其它相关的禽类病原无交叉反应,其组内和组间的变异系数均低于13%,具有良好的重复性。对458份临床血清样品进行检测,同时用IDEXX的同类ELISA抗体检测试剂盒进行对比,总符合率达到96.29%。本研究为ALV-J的流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。
- 刘丽娜邵华斌程国富杨峻张琳谢华丽栗绍文罗青平
- 关键词：J亚群禽白血病GP85基因蛋白表达酶联免疫吸附试验
- 鸽源空肠弯曲杆菌的分离鉴定及毒力因子分析被引量：2
- 2013年
- 通过从活禽市场上取鸽子泄殖腔拭子,分离鉴定了4株空肠弯曲杆菌(Campylobater jejuni)菌株,PCR调查发现,4株菌株均具有细胞膨胀毒素等9个重要的毒力相关因子。选取其中2株进行毒力基因序列分析,序列比对结果显示该鸽子源空肠弯曲杆菌的毒力基因序列与已测序的同时从人和禽屠宰场中分离到的空肠弯曲杆菌M1株的毒力基因相似度最高。
- 张腾飞詹丽超罗玲罗青平汪宏才杨峻邵华斌
- 关键词：鸽子毒力因子
- 新城疫病毒TS09耐热株HN基因的序列测定与耐热机制分析
- 前言:国内外很多学者都致力于新型高效新城疫(Newcastle Disease,ND)疫苗的研发,课题组于1989年引入澳大利亚V4耐热株,对其进行了耐热选育,获得了一株新的耐热疫苗株TS09株。本研究对TS09株HN基...
- 温国元商雨王红琳杨峻胡薛英程国富邵华斌
- 文献传递
- 两株A型禽流感病毒NP基因的PCR扩增及序列分析被引量：2
- 2004年
- 研究选择 AIV NP基因为目的基因 ,设计了一对特异性引物 ,筛选出最佳的 RT-PCR扩增条件 ,特异性地扩增出了两株 A型禽流感病毒的部分 NP基因片段 ,并对其进行了序列分析 ,结果表明 ,两株来源于不同禽类的 AIV的NP基因同源率高达 92 %。AIV
- 刘泽文徐涤平周平华段正赢汪宏才杨峻
- 关键词：A型禽流感病毒NP基因PCR扩增禽流感
- 竞争性PCR定量检测鸡传染性贫血病毒核酸
- 将删除33个碱基序列的CAV DNA克隆进质粒pSBⅡ,提取质粒DNA,经过纯化、定量后作为竞争性模板,建立了一种定量检测鸡传染性贫血病毒核酸方法。该方法能够检测出的最低CAVDNA为103.5Molecules/μl,...
- 刘泽文徐涤平周平华杨峻段正赢汪宏才邵华斌
- 关键词：CAV
- 文献传递
