李建辉
- 作品数：9 被引量：6H指数：1
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- Y14F/R22L天花粉蛋白的晶体结构研究被引量：1
- 1998年
- Y14F/R2 2LTCS的晶体结构是用同晶差值Fourier法解得 .经X_PLOR程序修正得到Y14F/R2 2LTCS的分子结构 ,并找到了 6 5个水分子 .对 0 2 3nm分辨率衍射数据的晶体学R因子为 0 185,键长和键角的rms偏差分别为 0 0 0 12nm和 2 6 52° .在Y14F/R2 2LTCS中 ,Tyr14变成Phe ,Phe周围变化很小 ,α5的弯折依然存在 ;Arg2 2变成Leu ,余下的空间被水分子 2 56所占据 ,水分子 2 56与Ala16 1,Ala16 2的主链氧成氢键 ,部分代替Arg的作用 .并讨论了二级结构间保守氢键的作用 .
- 吴伸闫军姚宏兵李建辉邵鹏柱董贻诚
- 关键词：天花粉蛋白突变体晶体结构
- 巴马汀结合MYC G-四链体干预结肠癌细胞增殖和凋亡的作用及分子机制被引量：1
- 2021年
- 目的:探究巴马汀是否通过结合MYC原癌基因启动子区G-四链体干预结肠癌HCT116细胞的增殖及凋亡及其可能的分子机制。方法:采用荧光光谱分析巴马汀与MYC基因G-四链体的结合能力,采用圆二色谱分析巴马汀对MYC基因G-四链体构型的影响,采用分子对接预测二者的结合模式,采用荧光显微镜分析巴马汀分子在HCT116细胞中的定位,采用实时荧光定量聚合酶链式反应分析巴马汀对MYC基因转录的影响,采用蛋白免疫印迹法检测巴马汀对MYC蛋白表达的影响,进一步采用噻唑蓝比色法分析巴马汀对HCT116细胞活力的影响,采用流式细胞术分析巴马汀对HCT116细胞凋亡的影响。结果:荧光光谱及分子对接研究表明巴马汀可能以堆积方式与MYC基因G-四链体结合,圆二色谱分析表明马汀能够维持MYC基因G-四链体的平行构型,荧光成像分析表明巴马汀分布于细胞核中且能够与G-四链体结合。此外,巴马汀抑制了MYC基因转录及MYC蛋白表达,抑制了HCT116细胞的增殖并促进了细胞凋亡。结论:巴马汀能够结合MYC基因G-四链体并抑制其基因转录,进而抑制MYC蛋白表达,这可能是巴马汀抑制结肠癌HCT116细胞增殖并促进其凋亡的分子机制之一。
- 温丽娜李建辉石汉平
- 关键词：MYC基因结肠癌增殖
- Q156A天花粉蛋白的晶体结构研究被引量：1
- 1997年
- 核糖体失活蛋白（RIPs）是一类具有RNA N-糖苷酶活性的毒蛋白,它水解真核细胞28SrRNA第4324位腺苷酸的N-糖苷键,释放出一个腺嘌吟碱基,使核糖体失活。天花粉蛋白（TCS）是单链核糖体失活蛋白的重要代表。我们早已报道了天花粉蛋白0.173nm分辨率的晶体结构。关于天花粉蛋白结构与功能关系的深入研究,已经发表了天花粉蛋白与底物类似物的复合物晶体结构。我们还对一些保守残基的突变体进行了研究,其中R22LTCS和Y14F TCS的晶体结构已经测定,Arg22和Tyr14是位于活性口袋外,但与活性口袋又有密切联系的保守残基,其侧链形成的氢键也十分保守。在TCS晶体结构中还有一类保守残基形成的氢（盐）键也是十分保守的,它们是处于活性口袋之内的残基形成的,如Q156的NH_2与E189的OE2,Y111的OH与E160的OE2,R122的NH_2与E189的OE1等。为了探讨活性口袋内这些保守氢键对活性部位构象和活性的影响,我们用基因定位突变方法。
- 董贻诚朱日荣陈世芝李建辉邵鹏柱
- 关键词：突变体晶体结构天花粉蛋白核糖体失活蛋白
- E160A天花粉蛋白晶体结构研究
- 李建辉吴伸
- 关键词：天花粉蛋白晶体结构
- 天花粉蛋白Glu160在N-糖苷酶活性中的作用
- 1999年
- 用浸泡法得到了（Ｅ１６０Ａ）天花粉蛋白（ｔｒｉｃｈｏｓａｎｔｈｉｎ， ＴＣＳ），（Ｅ１６０Ｄ）ＴＣＳ与Ａｄｅ 和（Ｅ１６０Ａ）ＴＣＳ与ＦＭＰ复合物的晶体．在Ｍａｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ 面探测器系统上分别收集了０．２０ ｎｍ ，０．１９ｎｍ 和０．２０５ ｎｍ 分辨率的Ｘ 射线衍射数据，数据处理用Ｍａｒ Ｓｃａｌｅ 程序系统完成．用同晶差值Ｆｏｕｒｉｅｒ法解析了（Ｅ１６０Ａ）ＴＣＳ－Ａｄｅ，（Ｅ１６０Ｄ）ＴＣＳ－Ａｄｅ 和（Ｅ１６０Ａ）ＴＣＳ－ＦＭＰ的晶体结构，结构修正利用Ｘ－ＰＬＯＲ程序，修正结果，晶体学Ｒ因子分别为０．１６６，０．１７６，０．１７９．键长和键角的ＲＭＳ偏差分别为０．００１０ ｎｍ 和２．５０３°，０．００１３ ｎｍ 和２．６６５°，０．００１２ ｎｍ 和２．６７６°．在这三个结构中均未见到Ｇｌｕ１８９侧链方向的改变．Ａｄｅ 或ＦＭＰ仍结合在Ｎ－糖苷酶活性口袋之中，它夹在Ｔｙｒ７０和Ｔｙｒ１１１两个侧链环之间，与Ｔｙｒ７０环近乎平行．这一结果表明：ＴＣＳ中的Ｇｌｕ１６０分别突变成Ａｌａ 和Ａｓｐ，仍能与ＡＭＰ发生Ｎ－糖苷酶反应，但是活性降低了一些．可见Ｇｌｕ１６０对ＴＣＳ与ＡＭＰ的作用是重要的，但不是必要的．
- 李建辉吴伸姚宏兵邵鹏柱董贻诚
- 关键词：天花粉蛋白N-糖苷酶晶体结构AMP
- (E160A)和(E160D)天花粉蛋白两种突变体晶体结构研究被引量：3
- 1998年
- 培养了（Ｅ１６０Ａ）ＴＣＳ和（Ｅ１６０Ｄ）ＴＣＳ的单晶。在ＭＡＲＲｅｓｅａｒｃｈ面探测器系统上分别收集了０．１９３ｎｍ和０．２０ｎｍ分辨率的Ｘ射线衍射数据。数据处理用ＭＡＲＳＣＡＬＥ程序系统完成。用同晶差值Ｆｏｕｒｉｅｒ法解析了突变体的晶体结构，结构修正利用Ｘ－ＰＬＯＲ程序。修正结果，晶体学Ｒ因子分别为０．１７５，０．１７９，键长和键角的ＲＭＳ偏差分别为０．００１１ｎｍ和２．４５７°，０．００１３ｎｍ和２．６７５°。在这两个突变体的结构中均未见到Ｇｌｕ１８９侧链方向的改变。通过对（Ｅ１６０Ａ）ＴＣＳ和（Ｅ１６０Ｄ）ＴＣＳ的结构比较，说明（Ｅ１６０Ｄ）ＴＣＳ活性低于（Ｅ１６０Ａ）ＴＣＳ的原因：这可能是由于在（Ｅ１６０Ｄ）ＴＣＳ中Ｔｙｒ１１１和Ｔｙｒ７０的侧链都具有较大的运动性，使它们与腺嘌呤碱基的芳香堆垛作用减弱。
- 李建辉吴伸姚宏兵邵鹏柱董贻诚
- 关键词：天花粉蛋白突变体晶体结构
- neo Trichosanthin及其突变体Y70A neo Trichosanthin的晶体结构研究
- 1999年
- 天花粉蛋白（Ｔｒｉｃｈｏｓａｎｔｈｉｎ，ＴＣＳ）的一个亚型，ｎｅｏＴｒｉｃｈｏｓａｎｔｈｉｎ（ｎ－ＴＣＳ），及其突变体Ｙ７０Ａｎ－ＴＣＳ被克隆和表达为重组蛋白。用悬滴汽相扩散法得到ｎ－ＴＣＳ和Ｙ７０Ａｎ－ＴＣＳ的晶体。在ＭａｒＲｅｓｅａｒｃｈ面探测器系统上分别收集了０．２０ｎｍ和０．２０５ｎｍ分辨率的Ｘ射线衍射数据。用同晶差值傅立叶法解析了结构。最后晶体学Ｒ因子分别为０．１８３和０．１８４。键长的ｒ．ｍ．ｓ．偏差分别为０．００１６ｎｍ和０．００１４ｎｍ，键角的ｒ．ｍ．ｓ．偏差分别为２．９３０°和２．７３２°。ｎ－ＴＣＳ虽然与ＴＣＳ有１１个氨基酸的差别，但它们都不是活性口袋区的关键残基。并且这些氨基酸的替换绝大多数属于保守替换。和ＴＣＳ相比，这１１个残基及其附近残基的主链间形成的保守氢键在ｎ－ＴＣＳ中没被破坏，它们所处的二级结构也保持不变。所以ｎ－ＴＣＳ的整体结构与ＴＣＳ十分相近。Ｙ７０Ａｎ－ＴＣＳ的晶体在收集数据前曾用含５＇ＡＭＰ的缓冲液浸泡过，活性口袋区没发现可与Ａｄｅｎｉｎｅ相匹配的密度。用ＨＰＬＣ检测Ｙ７０Ａｎ－ＴＣＳ与５＇ＡＭＰ作用后产物，层析图谱上相应位置也没有出现Ａｄｅｎｉｎｅ。上述结果表明，７?
- 颜丽吴伸李会广李建辉黄岳顺施庆利董贻诚
- 关键词：天花粉蛋白失活蛋白晶体结构
- 天花粉蛋白Glu189在N-糖苷酶活性中的作用
- 1999年
- 培养了(E160A,E189A)TCS(天花粉蛋白)的单晶。用浸泡法得到了(E160A,E189A)TCS与Ade复合物的晶体。在MarResearch面探测器系统上分别收集了均为0.20nm分辨率的X射线衍射数据,数据处理用MarScale程序系统完成。用同晶差值Fourier法解析了(E160A,E189A)TCS和(E160A,E189A)TCS-Ade的晶体结构,结构修正利用X-PLOR程序.修正结果,晶体学R因子分别为0.180、0.184,键长和键角的RMS偏差分别为0.0012nm和2.566°、0.0012nm和2.622°。在(E160A,E189A)TCS-Ade中,Ade仍结合在N-糖苷酶活性口袋之中,它夹在Tyr70和Tyr111两个侧链环之间,与Tyr70环近乎平行。这一结果表明:TCS中的Glu160和Glu189同时突变成Ala,仍能与AMP发生N-糖苷酶反应.前文已经证明在(E160A)TCS中Glu189没有援救作用。目前,没有发现Glu189对TCS与AMP的直接作用,但Glu189与其它残基的协同作用及其在TCS与rRNA作用中扮演什么角色,尚待进一步研究。
- 李建辉吴伸姚宏兵邵鹏柱董贻诚
- 关键词：天花粉蛋白突变体N-糖苷酶晶体结构
- 亚天花粉蛋白突变体(R163H n-TCS和R163Q n-TCS)的晶体结构研究
- 1999年
- 用悬滴汽相扩散法得到了Ｒ１６３Ｈｎ－ＴＣＳ和Ｒ６１３Ｑｎ－ＴＣＳ的晶体，在Ｍａｒ－Ｒｅｓｅａｒｃｈ面探测器系统上分别收集了０．２００和０．２０５ｎｍ分辨率的Ｘ－射线衍射数据。采用同晶差值傅立叶法解析结构，用Ｘ－ＰＬＯＲ软件包进行修正，最后的晶体学Ｒ因子分别为０．１８４和０．１８５，键长偏差分别为０．００１３ｎｍ和０．００１４ｎｍ，键角偏差分别为２．５９０°和２．８１５°。结构测定显示Ｒ１６３Ｈｎ－ＴＣＳ和Ｒ１６３Ｑｎ－ＴＣＳ与ｎ－ＴＣＳ的主链结构无较大变化，活性口袋区的结构和氢键体系发生了明显变化。生化分析表明Ｒ１６３Ｈｎ－ＴＣＳ具有糖苷酶活性，Ｒ１６３Ｑｎ－ＴＣＳ没有糖苷酶活性。这说明，第１６３位侧链的Ｈ＋对ｎ－ＴＣＳ发挥Ｎ－糖苷酶活性至关重要。
- 李会广吴伸颜丽李建辉李建辉施庆利黄岳顺
- 关键词：突变体晶体结构
