李建栋
- 作品数：23 被引量：105H指数：7
- 供职机构：莱阳农学院动物科技学院动物科学系更多>>
- 发文基金：山东省优秀中青年科学家科研奖励基金国家科技攻关计划山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 应用负压气相培养系统生产体细胞克隆牛的研究被引量：12
- 2002年
- 以 - 35℃低温冷冻保存 3个月的Vari Fe 8mos和Fahru Fe 9mos死亡牛胎儿皮肤上皮细胞 ,为核供体细胞 ,应用点击去核方法 ,和 - 30 0mmHg、2 %CO2 、8%～ 10 %O2 、38.5℃和 10 0 %湿度负压气相培养系统 (负压组 ) ,进行了克隆牛试验研究 ,并与吸引和挤压及常压培养法进行了比较。结果表明 ,采用点击去核法对体外成熟培养18h、2 2h、2 4h的卵母细胞进行去核 ,去核成功率分别为 90 .0 %、75 .8%和 5 5 .6 %,18h组显著高于 2 2h组 (P <0 .0 5 ) ,极显著高于 2 4h组 (P <0 .0 1) ;而且 ,点击去核法去核率为 90 .0 %,极显著地高于吸引法的 6 8.3%(P <0 .0 1) ,与挤压法去核率 88.3%差异不显著 ;采用点击去核法囊胚发育率达 34 .1%,显著高于吸引法的 18.0 %(P <0 .0 5 ) ,与挤压法的 2 0 .9%差异不显著。负压组重构胚的卵裂率达 70 .0 %,显著高于常压组的 6 3.8%(P <0 .0 5 ) ,负压组囊胚发育率达 35 .8%,极显著高于常压组的 2 3.2 %(P <0 .0 1) ,负压组克隆囊胚细胞数为 10 8± 3.3个 ,极显著多于常压组的 98± 3.3(P <0 .0 1)。将第 6天的克隆桑椹胚和囊胚每 2～ 3枚装入 1支 0 .2 5ml塑料细管中 ,移植给同期发情处理的 5头受体奶牛的黄体侧子宫角中 ,最终获得 2头牛妊娠 ,并于 2 0 0 1年 11月 3日和 11月
- 董雅娟柏学进M.D.VarisangaN.R.Mtango李建栋铃木达行
- 关键词：体细胞克隆牛核移植
- 输精部位对奶牛超排效果的影响被引量：4
- 2005年
- 对奶牛超排时输精部位进行了研究。结果发现,在其它实验条件相同的情况下,在子宫角部位输精的供体牛的超排效果好于在子宫体部位输精的供体牛,其可用胚数(7±6.353)极显著高于子宫体部位输精的(4.182±1.870)(P<0.01),且无精卵数和停滞卵数(0.222±0.183和0.222±0.183)都分别极显著低于子宫体部位输精的(1.091±0.848和0.909±0.468)(P<0.01)。这说明超排时在子宫角部位进行输精能够提高超排效果。
- 李建栋史福艳董雅娟柏学进于进亮张圆王雪红
- 关键词：奶牛输精部位超排效果
- 奶牛超排前卵巢状态对超排效果的影响被引量：15
- 2000年
- 本试验初步研究了超排前卵巢状态对超排效果的影响。据直肠检查结果将供体奶牛分为两组 :1组供体卵巢上只有黄体存在 ;2组供体卵巢上不仅有黄体存在还有卵泡存在。经超排处理后 ,1组中 2头供体无发情表现 ;2组中 6头供体无发情表现。 2组供体的不发情率 2 7 3 %显著高于 1组的 6 3 %(P <0 0 5)。两组供体在平均获胚数和平均获可用胚数无显著差异 (P >0 0 5)。
- 李建栋柏学进董雅娟吴胜权
- 关键词：奶牛超数排卵胚胎移植卵泡
- 猪IVM卵母细胞孤雌激活及in vitro发育试验被引量：11
- 2004年
- 利用不同的电刺激条件对猪体外成熟卵母细胞进行孤雌激活试验 ,并探讨了不同成熟培养时间对孤雌发育的影响。试验结果 ,应用 2 .2 5kv/cm ,5 0 μs,1次电脉冲进行孤雌激活处理组获得了 2 2 % (2 2 / 10 0 )囊胚发育率 ,极显著高于 1.2 5kv/cm、5 0 μs、3次电脉冲处理组的 9.1% (9/ 98)和 2 .0 0kv/cm、5 0 μs、2次电脉冲处理组的 7.2 % (8/111) (P <0 .0 1) ;其囊胚细胞数为 6 7.8± 2 .7极显著 (P <0 .0 1)高于后两组的 5 3± 3.3、5 1.2± 5 .1。采用以上最佳电脉冲组处理成熟培养 4 2h、4 6h和 4 8h的 3组卵母细胞 ,各组间的卵裂率差异不显著 ,桑椹胚率 4 8h组为 5 7.8%(133/ 2 10 )极显著高于 4 2h组的 4 5 .7% (10 5 / 2 0 6 )和 4 6h组的 38.3% (88/ 2 11) (P <0 .0 1) ,4 2h组和 4 6h组间差异不显著 ;囊胚发育率 4 8h组 2 2 .6 % (5 2 / 2 10 )极显著高于 4 2h组的 9.6 % (2 2 / 2 0 6 )和 4 6h组的 6 .9% (16 / 2 15 ) (P<0 .0 1) ,4 2h组和 4 6h组间差异不显著 ;其囊胚细胞数 4 8h组为 6 8.9± 2 .8极显著高于 4 2h组的 5 5 .3± 3.4 (P <0 .0 1) ,显著高于 4 6h组的 5 0 .2± 5 .6 (P <0 .0 5 ) ,4 2h组极显著高于 4 6h组 (P <0 .0 1)。试验结果表明
- 董雅娟柏学进李建栋程明张涌
- 关键词：卵母细胞孤雌激活发育体外成熟
- 体细胞克隆牛超排胚胎玻璃化冷冻及移植试验
- 2004年
- 对体细胞克隆牛进行了超数排卵、胚胎玻璃化冷冻及胚胎移植试验。首先对体外受精卵进行了玻璃化冷冻保存试验,结果表明,体外受精囊胚经过EPS10和EPS20的TCM-199液玻璃化冷冻-解冻后胚胎形态正常率和发育率各组间差异不显著,囊胚孵出率EPS20组为31.3%(35/112)极显著高于EPS10组的12.2%(13/107)(P<0.01),选择玻璃化冷冻液EPS20作为体细胞克隆牛超排采卵获得胚胎的冷冻保存液。本试验对体细胞克隆牛“康康”和“双双”进行了超排试验,分别获得6枚(4枚可用胚)和10枚(9枚可用胚)胚胎,各取2枚1级胚胎应用EPS20玻璃化液进行玻璃化冷冻,解冻后分别移植到4头同期发情处理的中国荷斯坦奶牛的黄体侧子宫角内,结果为1头9908号受体母牛妊娠,并且产下1头健康的体细胞克隆牛“双双”的胚胎移植后代。试验结果表明,①体细胞克隆牛与正常牛一样对外源激素(FSH)具有较好的应答能力和超数排卵的能力;②体细胞克隆牛的胚胎可用于玻璃化冷冻保存。
- 董雅娟柏学进李建栋程明
- 关键词：体细胞克隆牛玻璃化冷冻超数排卵超排采卵精囊
- GnRH类似物(LHRH-A3)注射方案对奶牛超排效果的影响被引量：3
- 2006年
- 本实验对奶牛超排时LHRH-A3注射方案分别进行了研究。结果发现在其它实验条件相同的情况下,两次输精同时都注射LHRH-A3的供体(第1次注射50μg,第2次注射25μg)的平均无精卵数(0±0)显著低于只在第1次输精同时注射LHRH-A3的(剂量为50μg)(0.222±0.183)(P<0.05),其平均黄体数、平均获胚数、平均获可用胚数都稍高,但差异不显著。这说明采用两次输精同时都注射LHRH-A3的方案可以提高奶牛的超排效果。
- 李建栋史福艳董雅娟柏学进于进亮张圆王雪红
- 关键词：奶牛超排效果
- 昆明小鼠胚胎干细胞的体外分离培养被引量：2
- 2006年
- 利用昆明小鼠13.5dpc的胚胎制备小鼠胚胎成纤维细胞,并以小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层;收集3.5dICR小鼠的囊胚和桑椹胚进行体外培养,筛选纯化ES细胞集落,使其稳定传代后,对其形态学和生物学性状进行初步鉴定,获得阳性细胞集落。
- 杨恕玲董雅娟柏学进程明李建栋王雪红董方圆
- 关键词：昆明小鼠胚胎干细胞饲养层
- 小鼠MEF的制备及ES细胞的分离培养试验被引量：4
- 2005年
- 本试验采用两种方法制备小鼠胎儿成纤维细胞饲养层(mouse embryonic fibroblast, MEF),两种方法的差别在于用丝裂霉素-C(mitomycine-C,MMC)处理后,一种是用PBS-洗净MMC后直接使用;另一种是丝裂霉素-C处理后,用胰酶消化后重新接种,待细胞融合后再使用.将获得的小鼠胚胎直接接种在MEF上,分别在5～6d后取增殖的ICM团块,消化再接种培养,观察胚胎干细胞(embryonic stem cell, ES细胞)样集落的生长情况,并对获得的ES细胞样集落进行碱性磷酸酶(AKP)染色鉴定.结果发现两种处理方法得到的MEF培养体系均具有促进ES细胞增殖以及抑制ES细胞的分化的作用,而且得到的ES细胞样集落符合ES细胞的形态特征,AKP呈强阳性.采用本试验的第一种方法的优点是简化了胎儿成纤维细胞饲养层的制备过程,并且适合做ES细胞的饲养层.
- 杨恕玲董雅娟柏学进李建栋程明
- 关键词：小鼠MEFES细胞
- 卵细胞质不均—对牛卵母细胞体外成熟和体外受精的影响
- 1998年
- 本试验旨在卵细胞质不均一的牛卵母细胞和均一的牛卵母细胞体外成熟和体外受精方面进行了探讨。结果，同样经过24h培养不均一组的成熟率（96．7％）高于均一组（80．8％），两者差异显著（P＜0．05）、受精率为不均一组（63．8％）稍高于均一组（46．9％），（P＜0．01）。
- 董雅娟柏学进薛建华李建栋吴胜权罗明玖张新慧周景明
- 关键词：卵母细胞细胞质体外成熟体外受精
- 牛体细胞核移植技术被引量：25
- 2002年
- 对牛体细胞核移植技术中核供体细胞周期同期化处理、电融合条件及去核方法等进行了研究。结果表明 ,血清 -饥饿组 (细胞周期同期化处理组 )的移核重构胚细胞融合率 (83.3% )、卵裂率 (70 % )和囊胚发育率 (33.8% )与血清 -选择组对应指标间无显著性差异 (82 .3%、6 9.2 %、32 .4 % ,P >0 .0 5 ) ;但上述 2组分别极显著高于血清 -随机组(6 4 .8%、33.8%、4 .35 % ,P <0 .0 1)。试验确立了场强 1.0 2 5 k V/cm、脉冲宽度 5 0μs、连续 2次电脉冲为最佳电融合条件。摸索出的点击去核法 ,对卵母细胞进行去核 ,去核成功率达 90 % ,极显著高于吸引法的 6 8.3% (P <0 .0 1) ;其囊胚发育率为 34.1% ,显著高于吸引法的 18.0 % (P <0 .0 5 ) ,与挤压法 (2 0 .9% )相比差异不显著 (P >0 .0 5 )。移核重构胚胎移植后 ,产
- 董雅娟柏学进李建栋M.D.VarisangaN.R.Mtango李云龙铃木达行
- 关键词：核移植技术体细胞细胞周期电融合
