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池塘养殖脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)感染血卵涡鞭虫的研究被引量：26: 2010年; 通过现场取样、显微镜检、细菌培养、组织病理、电镜观察以及PCR检测等研究手段,对2008年9月浙江省舟山市普陀区某梭子蟹养殖塘混养的脊尾白虾"白浊病"进行了系统的病原学研究。结果表明,病虾体色发白,反应迟钝,血淋巴液呈浊白色,严重患病白虾血淋巴中的血细胞几乎没有或者极少,代之以大量与血细胞形似的寄生虫;组织病理切片及电镜观察发现,病虾心脏、肝胰腺、肌肉、鳃部等组织寄生有大量单细胞寄生虫,该寄生虫虫体形态特征、显微结构及宿主临床症状与本实验室之前研究报道的感染三疣梭子蟹和锯缘青蟹的血卵涡鞭虫类似;采用已建立的针对血卵涡鞭虫ITS1基因的引物对"白浊病"病虾的血淋巴样品进行PCR检测,可扩增出585bp左右的特异条带。综合以上研究结果,确定该寄生虫为血卵涡鞭虫(Hematodinium sp.)。有关脊尾白虾感染该寄生虫的报道在国内外尚属首次。; 许文军谢建军施慧张静张家松; 关键词：脊尾白虾白浊病病原血卵涡鞭虫

环介导恒温扩增技术检测血卵涡鞭虫被引量：3: 2010年; 血卵涡鞭虫病是海水甲壳类的重要寄生虫病,其流行范围广、死亡率高、危害非常严重。本研究根据GenBank中已登录的血卵涡鞭虫(Hematodinium sp.)ITS1序列设计了1套引物,该引物可识别目标基因中6个不同区段。以此套引物建立了一种基于环介导恒温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)的血卵涡鞕虫病诊断方法。特异性试验结果表明,该套引物对血卵涡鞕虫检测具有较高的特异性,能有效检出血卵涡鞕虫。敏感度试验结果表明,该LAMP技术的灵敏度比常规PCR技术高4个数量级。分别运用LAMP和常规PCR技术对25份临床疑似病例进行检测,LAMP方法共检出感染病例25份,常规PCR检出感染病例23份。该技术能在65℃恒温条件下45～60min完成目的DNA的扩增,可直接通过肉眼观察反应产物中是否产生白色沉淀或经SYBRGreenI染色后通过颜色变化、扩增产物的琼脂糖凝胶电泳来定性判断结果,这将为血卵涡鞕虫病的临床诊断提供一种更加简便、快速、实用的方法。; 施慧张静谢建军许文军徐汉祥史海东

围塘混养脊尾白虾血卵涡鞭虫病感染研究: 脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)又名白虾、五须虾，是我国重要的野生经济虾类，其肉质细嫩，味道鲜美，营养丰富，深受群众喜爱。本文采自浙江舟山普陀区某梭子蟹养殖场的发病池塘，作为病理组织学研究的对照...; 许文军施慧谢建军张静; 关键词：脊尾白虾; 文献传递

围塘混养脊尾白虾血卵涡鞭虫病感染: 2008年9月,舟山普陀区某梭子蟹养殖塘混养脊尾白虾暴发被当地养民称为"白浊病"的疾病,并导致规模性死亡。取样调查发现,病虾体色发白,反应迟钝,病重者缓游于水面或静伏于池边,离开水体后不久即死亡。病虾壳色土黄,肌肉白浊,...; 许文军施慧谢建军张静; 关键词：脊尾白虾白浊病病原; 文献传递

网箱养殖鲈鱼内脏白点病病原的分离与鉴定被引量：12: 2009年; 2007年5-6月,浙江省象山港海区网箱养殖鲈鱼暴发一种较为严重的传染性疾病。从自然发病和人工感染患病鲈鱼分别分离到LY-1、LY-2菌株。采用常规生理生化指标测定和分子生物学16S rRNA测序分析对病原菌进行分类学鉴定,两者鉴定结果一致并初步确定LY-1、LY-2均为哈维氏弧菌Vibrio harveyi。HSP60序列分析表明,所测病原菌HSP60基因序列与Vibrio harveyi同源性为99%,而与其他弧菌属细菌HSP60基因的同源性均小于91%。综合上述结果,LY-1、LY-2菌株被鉴定为哈维氏弧菌。; 张静施慧谢建军许文军; 关键词：鲈鱼病原哈维氏弧菌 RRNA HSP60

致病性哈维氏弧菌ToxR基因序列分析与LAMP快速检测方法的建立: 从浙江宁波的发病鲈(Lateolabrax japonicus)分离到1株致病性哈维氏弧菌(Vibrio harveyi) LY-1.从该菌的DNA样本中成功扩增出大小为873bp的ToxR基因片段.DNA序列分析表明：...; 张静施慧谢建军许文军; 关键词：哈维氏弧菌 LAMP

海产蟹类血卵涡鞭虫间接荧光抗体快速检测技术被引量：7: 2009年; 以寄生于三疣梭子蟹血淋巴中的血卵涡鞭虫虫体为抗原,制备了多克隆血清抗体。抗体经健康梭子蟹血淋巴吸附处理后,间接ELISA检测效价达7 680。应用该抗体建立了血卵涡鞭虫的间接荧光抗体检测技术(IFAT)。采用常规显微镜检、PCR及IFAT 3种方法对采集的养殖青蟹、梭子蟹及海捕梭子蟹等18个样本进行了检测。检测结果显示:常规显微镜检阳性检出率为33.3%,而IFAT及PCR检测阳性率77.8%,符合率达100%;阳性虫体被染上黄绿色荧光,而正常梭子蟹血细胞则未被染色;可检测到血卵涡鞭虫不同生活阶段的营养体、腰鞭孢子及合孢体阶段。为血卵涡鞭虫的流行病学调查及生活史研究提供了简便实用的方法。; 谢建军许文军施慧徐汉祥史海东张静; 关键词：血卵涡鞭虫三疣梭子蟹锯缘青蟹间接荧光抗体

几种常见水产药品对日本黄姑鱼幼鱼的急性毒性试验被引量：19: 2010年; 采用静水法,用高锰酸钾、二溴海因、CuSO4+FeSO4合剂(5:2)、敌百虫、阿维菌素、二氧化氯共6种常见水产药品对体长(5.73±1.50)cm、体重(2.00±0.32)g的日本黄姑鱼(Nibea japonica)幼鱼进行了急性毒性试验,得出6种药品对其24、48、96h的半致死浓度,高锰酸钾为1.37、1.26、1.24mg/L,二溴海因为10.59、8.61、7.86mg/L,CuSO4+FeSO4合剂为2.57、1.76、1.43mg/L,敌百虫为1.72、1.43、1.18mg/L,阿维菌素为0.30、0.23、0.19mg/L,二氧化氯为3.34、2.81、1.67mg/L;6种药物的安全浓度依次为0.12、0.79、0.14、0.12、0.02、0.17mg/L。; 査智辉许文军谢建军张静柴学军; 关键词：日本黄姑鱼急性毒性

利用LAMP法快速检测致病性哈维氏弧菌被引量：12: 2010年; 从浙江宁波的发病鲈鱼(Lateolabraxjaponicus)分离到1株致病性哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)LY-1。从该菌的DNA样本中成功扩增出大小为873 bp的ToxR基因片段。DNA序列分析表明:该序列与已登录哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)ToxR基因同源性为96.57%,与副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)、鳗弧菌(V.anguilarum)、创伤弧菌(V.vulnificus)、费氏弧菌(V.fisheri)、溶藻胶弧菌(V.alginolyticus)、霍利斯弧菌(V.hollisae)、拟态弧菌(V.mimicus)、河弧菌(V.fluvialis)的ToxR基因相似性为27.62%～72.49%。选择哈维氏弧菌ToxR基因种内保守区段,设计1套环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术的特异引物,对扩增条件进行优化实验,在65℃孵育45 min的条件下即可完成哈维氏弧菌特异性扩增,成功建立了海水致病菌-哈维氏弧菌的LAMP快速检测方法。结果分析表明:该方法对哈维氏弧菌DNA的最小检出量为1 fg,比PCR法灵敏度高3个数量级。利用LAMP方法快速检测哈维氏弧菌,目前在国内外还未见报道。; 张静施慧谢建军许文军; 关键词：哈维氏弧菌 LAMP

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张静