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糙耳孔蜈蚣毒素多肽STX-Osp1的基因工程制备被引量：3: 2015年; 目的:通过基因工程技术制备糙耳孔蜈蚣毒素多肽STX-Osp1。方法:构建STX-Osp1的p GEX-4T-1原核表达载体,采用GST融合表达方法对毒素多肽进行诱导表达和分离纯化,MALDI-TOF-MS鉴定成熟肽分子量。结果:通过p GEX-4T-1系统的GST融合表达方法能够成功获得STX-Osp1成熟多肽,质谱鉴定其分子量与理论值基本吻合。结论:本研究成功实现了STX-Osp1成熟肽的基因工程制备,为进一步研究其结构与功能关系奠定了物质基础。; 陆春兰陈璇张丰胡青兰王冠黄鑫尹世金; 关键词：GST融合表达

龙血竭总黄酮对Kv1.3通道的调节作用被引量：1: 2019年; 目的:探究龙血竭阻断Kv1.3通道的主要活性组分.方法:龙血竭总黄酮经优化工艺提取后,采用全细胞膜片钳实验检测其对内源性和外源性表达的Kv1.3通道调节作用.结果:龙血竭总黄酮对内源性和外源性表达的Kv1.3通道均具有较强的抑制作用,呈浓度依赖性和通道选择性.结论:总黄酮介导了龙血竭阻断Kv1.3通道,为进一步发现龙血竭中Kv1.3通道阻断剂提供了重要线索.; 尹世金张丰邹艳王少兵石书娟龙思如何回香黎莉; 关键词：龙血竭总黄酮自身免疫疾病

武当地区道医药特色诊疗及药用植物资源调查被引量：2: 2013年; 目的对武当地区药用植物资源进行调查,为合理开发药用植物资源提供参考;了解道医的起源和发展,特色诊疗方法,溯源扩充民族医药理论体系。方法实地调查采访、标本采集鉴定、问卷调查、查阅文献等。结果道医在诊断方法上,极为重视望、闻、问、切四诊合参;在治疗过程中则尤其强调心理调节;武当地区拥有中药资源的种类达2158种,其中,常用中草药品种近600种,道地药材近百种。结论道教医药具有自己的诊疗特色,应发扬光大;武当地区药用植物资源丰富,但多种野生品种已濒临灭绝,应合理开发资源,达到可持续发展。; 程寒陈月娟徐鹏杨沫张丰黄先菊; 关键词：药用植物

少棘蜈蚣钾通道毒素多肽KTX-Ssm175的表达、纯化与鉴定被引量：1: 2016年; 采用Illumina II代转录组测序技术构建了湖北少棘蜈蚣毒腺转录组数据库,从中筛选到一个全新的毒素多肽编码基因KTX-Ssm175.经序列比对显示KTX-Ssm175多肽与κ-SLPTX-Ssm1a高度同源,提示KTX-Ssm175多肽为一种新的电压门控性钾通道阻断剂.采用基因工程技术构建了p GEX-4T-1-KTX-Ssm175原核表达载体,通过GST融合蛋白表达法对KTX-Ssm175多肽在大肠杆菌Rosetta中进行诱导表达和分离纯化.MALDI-TOF-MS质谱测定显示纯化的KTX-Ssm175多肽分子量与理论值相吻合,说明成功实现了KTX-Ssm175多肽的基因工程制备,为深入研究其结构与功能提供了物质基础.; 尹世金陈璇闻闫瀚陆春兰胡青兰邹艳张丰王冠黄鑫黄谨; 关键词：转录组钾通道阻断剂基因工程

利用CRISPR/Cas9系统靶向敲除Jurkat T细胞Kcna3及其功能研究: 2020年; 为探究如何利用CRISPR/Cas9系统靶向敲除Jurkat T细胞Kv1.3通道编码基因Kcna3,以期阐明Jurkat T细胞中Kv1.3通道介导的病理生理功能,本研究设计Kcna3第一个外显子sgRNA,将构建的pX458-sgRNA重组质粒经电穿孔方式转染Jurkat T细胞,联合使用T7EN1酶切、基因组PCR产物和TA克隆测序、Western Blot检测以及电生理、钙成像和ELISA等功能检测技术鉴定Jurkat T细胞中Kcna3敲除效果.测序结果显示,靶向Kcna3基因CRISPR/Cas9重组质粒pX458-sgRNA建立成功,设计的sgRNA2可高效切割基因组DNA.Western Blot未检测出Kv1.3蛋白表达,基因组PCR产物及TA克隆测序显示发生Indel突变.全细胞膜片钳实验结果表明,Kcna3敲除成功的Jurkat T细胞未记录到Kv1.3通道电流,钙成像技术显示Kcna3敲除Jurkat T细胞内自由Ca^2+浓度上升的幅度显著低于野生型Jurkat T细胞.ELISA实验结果显示,与野生型Jurkat T细胞相比,Kcna3敲除Jurkat T细胞IL-2水平显著下降(P<0.001).本研究成功利用CRISPR/Cas9系统靶向敲除Jurkat T细胞Kcna3,有力证明Kv1.3介导了Jurkat T细胞的免疫炎症反应,为深入研究Kv1.3通道的病理生理功能提供了新的细胞模型.; 石书娟柯才华龙思如张丰何回香姜嘉欣邹宁尹世金; 关键词：基因敲除 JURKAT T细胞

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张丰