孙卫东 作品数:132 被引量:441 H指数:13 供职机构: 南京农业大学动物医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家教育部博士点基金 江苏高校优势学科建设工程资助项目 更多>> 相关领域: 农业科学 文化科学 医药卫生 生物学 更多>>
肠出血性大肠杆菌O157:H7抗原基因及毒力基因多重荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:10 2016年 根据Gen Bank公布的大肠杆菌O157:H7的菌体抗原基因rfb E、鞭毛抗原基因fli C、溶血素基因hly A、紧密黏附素基因eae A和志贺样毒素基因stx1和stx2的序列,同源性比较后选择保守序列分别设计6对特异性的引物及相应的Taqman探针,rfb E/eae A、Stx1/hly A、fli C/Stx2探针5'端分别标记为FAM、HEX、CY5荧光报告基团,3'端均标记为BHQ1荧光淬灭基团。通过优化反应体系和程序,建立2个能够快速、特异性地检测大肠杆菌O157:H7及其4个主要毒力基因的三重荧光定量PCR方法。结果显示,该方法灵敏度高,stx1、rfb E、fli C、eae A、hly A、stx2的最低检测限分别为20、30、20、20、30和40拷贝数/μL;特异性试验证明,该菌与其他菌种无交叉反应;重复性好,变异系数均小于2%;检测过程耗时约1 h。将建立的荧光定量PCR体系应用到人工染菌模拟猪肉样品试验中,未富集或富集8 h后测得大肠杆菌O157:H7的最低检出限分别为200 cfu/m L与1 cfu/m L。以上结果表明,本试验所建立的三重荧光定量PCR方法的敏感性、重复性及特异性均较好,可作为同时快速检测肠出血性大肠杆菌O157:H7及其毒力基因的方法。 夏灿 蒋蔚 刘迎春 陈永军 龙梦瑶 薛俊欣 王权 孙卫东关键词:肠出血性大肠杆菌 O157:H7 毒力基因 TAQMAN探针 兽医临床误诊案例教学对提高学生临证思维能力的探讨 被引量:6 2015年 兽医临床误诊案例教学是案例教学方法的一种,是正向经典案例教学的一种补充方式。选择少而精、与教材重点、难点相对应的临床误诊案例运用到临床兽医学课程的教学中,让学生在学习过程中能运用已有的兽医学理论和经验对疾病现象进行思维和推理,深刻认识疾病的本质。这种教学方式不仅能使学生弄明白误诊案例的根源,强化学生对基础理论、基本知识、基本技能的理解与掌握,而且还能帮助学生构建一种良好的临床思辨模式,提高学生临证逆向思维能力,是目前临床兽医学课程教学改革中值得尝试的一个方向。 孙卫东 何成华 邓益锋 周斌关键词:教学改革 肉种鸡沙门菌病的诊治 2021年 目前我国多采用种鸡净化和商品鸡抗菌药物预防的方式来减轻鸡白痢和鸡伤寒的危害,取得了明显的效果。但随着2019年肉鸡大行情的到来,一些肉种鸡养殖户采用多次强制换羽的方式来加快种蛋的供应,在此过程中发生了多起苗鸡感染沙门菌的病例。鉴于此,本研究对1家孵化场的死胚、弱雏以及提供种蛋的种鸡进行了鸡沙门菌的分离和鉴定,并做了药物敏感性试验,以此来分析鸡沙门菌的感染来源,为养殖户的种鸡和苗鸡抗菌药物的使用提供借鉴。 王秋生 张勇 何成华 孙卫东关键词:药物敏感性试验 肉种鸡 强制换羽 鸡伤寒 商品鸡 死胚 VPA1500基因缺失对副溶血弧菌生物学特性和致病性的影响 被引量:3 2021年 型分泌系统(T6SS)是细菌的一种毒力因子分泌系统,通过分泌蛋白参与调控细菌的环境适应性和毒力。副溶血弧菌具有两个T6SS系统(T6SS1和T6SS2)。【目的】前期通过差异蛋白质组学技术筛选到副溶血弧菌T6SS1相关的分泌蛋白,本文选择其中的VPA1500为研究对象,研究其基因缺失对副溶血弧菌的生物学特性及致病性的影响。【方法】利用同源重组技术构建缺失株ΔVPA1500和互补株CΔVPA1500;分析各菌株生长特性、在体外的细菌竞争能力、运动性、细菌鞭毛相关基因的转录水平及生物被膜形成能力的差异,比较各菌株对细胞毒性、小鼠毒力、动物组织载菌量以及组织病理学变化的影响。【结果】与野生株相比,VPA1500基因缺失后不影响细菌的生长能力、生物被膜形成能力和群集运动,然而ΔVPA1500的浮泳运动能力显著下降;进一步通过透射电镜观察和实时定量PCR检测发现,VPA1500缺失影响副溶血弧菌鞭毛的形成;细菌竞争实验显示缺失VPA1500基因降低了副溶血弧菌野生株体外对大肠杆菌的杀伤能力;ΔVPA1500对细胞毒性、小鼠毒力以及在动物组织的定殖能力均显著低于野生株,互补株毒力基本恢复至野生株水平;组织病理学结果进一步表明,缺失VPA1500基因能够降低副溶血弧菌对小鼠组织的损伤。【结论】VPA1500参与副溶血弧菌的体外细菌竞争能力、浮游运动能力和致病性。 李洋洋 王权 郭容 张海洋 刘鹏选 齐瑜 方维焕 孙卫东 蒋蔚关键词:副溶血弧菌 运动性 鞭毛 副溶血弧菌主要毒力因子三重荧光定量PCR检测方法的建立与应用 被引量:4 2019年 为建立快捷、准确、高效检测副溶血弧菌的方法,以副溶血弧菌种属特异性基因toxR和毒力因子tdh、trh基因序列,分别设计3对特异性引物及相应TaqMan探针,并在toxR、tdh和trh基因的3个探针的5'端分别标记FAM、HEX、CY5荧光报告基团,3'端标记BHQ1淬灭荧光基团,通过优化反应体系和反应参数,确定最佳反应体系,建立一种基于Taq Man探针定量检测副溶血弧菌的三重荧光定量PCR方法。结果:本试验所建立三重荧光定量PCR方法与其他菌株无交叉反应,其最低检出限达到了10 CFU/m L,重复性试验中每组变异系数均小于1%;检测人工染菌的虾肉和贝类样品时,最低检出限亦达到10 CFU/m L,且整个检测扩增时间大约为1 h。结果表明,本研究建立的三重荧光PCR检测方法,特异性强、敏感性高、重复性好且耗时短,是高通量检测致病性副溶血弧菌的有效手段。 万莹 凌娇 王权 孙卫东 蒋蔚关键词:副溶血弧菌 TDH TRH 对蛋鸡痛风症的病因调查研究 被引量:5 1997年 对蛋鸡痛风症的病因调查研究■邱许黄有才蒋建兵杨建彬张国栋(江苏省通州市畜牧兽医站226000)■陈祥庶王林勋孙卫东王小龙(南京农业大学210000)痛风,又称肾功能衰竭症、尿酸盐沉积症、尿石症。临床上以运动迟缓,腿、翅关节肿胀,厌食,腹泻,尿酸及尿酸... 邱许 黄有才 蒋建兵 杨建彬 张国栋 陈祥庶 王林勋 孙卫东 王小龙关键词:鸡病 卵用鸡 痛风症 病因 副溶血弧菌极性鞭毛超微结构的电镜观察 2017年 为了观察副溶血弧菌从液体到固体表面的环境过渡中极性鞭毛的形态结构,选用副溶血弧菌的临床分离株SH112为研究对象,以副溶血弧菌ATCC33847为参考菌株,采用磷钨酸负染色法,通过高分辨透射电子显微镜观察细菌极性鞭毛的超微结构。结果显示:在这个过渡时期,副溶血弧菌的极性鞭毛有特殊的结构,包括不完整外鞘,"帽"状结构,以及长短和粗细变化等。推测这些结构的形成与环境的诱导以及鞭毛系统的调控机制有关。 白雪瑞 王权 习润南 凌娇 孙卫东 蒋蔚关键词:副溶血弧菌 透射电镜 超微结构 静脉注射L-NAME对肉鸡肺动脉压的影响 2001年 目的 :观察静脉注射一氧化氮合酶抑制剂L -NAME对肉鸡肺动脉压的影响。方法 :AA肉鸡 4 0羽随机等分为A、B、C、D组 ,按常规条件饲养至 4 4d龄进行实验。A组为对照组 ,B、C、D组分别为静脉注射一氧化氮合酶抑制剂L -NAME 1、2、4h的 3个实验组。应用右心导管技术逐羽测定肺动脉压 ,并采集血样作一氧化氮 (nitricox ide ,NO)和内皮素 (endothelin - 1,ET - 1)水平测定。结果 :与A组相比 ,静注L -NAME 1- 2h后肉鸡血浆NO含量低于A组 (P <0 .0 5 ) ,肺动脉压高于A组 (P <0 .0 5 ) ,血浆ET - 1未见明显差异 ;静注 4h后 ,血浆NO含量、肺动脉压与A组水平无明显差异 ,但血浆ET - 1水平明显高于A、B、C组 (P <0 .0 5 )。结论 :L 王金勇 王小龙 孙卫东 向瑞平关键词:内皮缩血管肽 肉鸡腹水综合征 静脉注射 早期限饲对肉鸡体内脂质过氧化作用和抗氧化酶活性的影响 被引量:16 2005年 采用低温诱发肉鸡腹水综合征(AS),并观察早期限饲对常温和低温饲养时肉鸡AS的发病率、肉鸡体内脂质过氧化作用和抗氧化酶活性的影响.试验1,限饲处理组肉鸡分别于7~14日龄或7~21日龄每天给料8 h,对照组肉鸡全程自由采食.试验2,限饲组肉鸡分别于7~14日龄给予对照组肉鸡前一天饲料消耗量的60%或80%,对照组肉鸡自由采食.试验过程中连续测定肉鸡血浆超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)水平和腹水心脏指数(RV/TV值).结果显示低温显著升高了肉鸡血浆MDA浓度,降低了血浆SOD和GSH-Px的活性;低温饲养肉鸡5~6周龄时的RV/TV值显著升高,AS的发病率显著增加.限饲处理显著降低了肉鸡血浆MDA含量,并且限饲处理肉鸡生长后期血浆中SOD和GSH-Px活性显著高于自由采食组肉鸡.所有的限饲处理均能降低肉鸡AS的发病率,并且早期限饲处理肉鸡42日龄的RV/TV值显著低于非限饲肉鸡.这表明早期限饲能够减轻肉鸡体内脂质过氧化作用,提高机体抗氧化酶的活性,从而降低AS的发病率. 潘家强 孙卫东 谭勋 李锦春 王小龙关键词:抗氧化酶活性 早期限饲 肉鸡腹水综合征 饲料消耗量 心脏指数 水牛静脉注射葡萄糖后血糖水平的调节机制研究 被引量:2 2006年 12头健康禁食公水牛分为3组。组Ⅰ(n=6)与组Ⅱ(n=3)分别经颈静脉快速注射50%葡萄糖和0.9%生理盐水各2 mL.kg-1;组Ⅲ(n=3)为对照,不作处理。分别于注射前60、10 m in及注射后1、5、10、30、60、120、180、240、300、360和420 m in采血,立即测定血浆葡萄糖及胰岛素和胰高血糖素,分析各指标间的相关性及血浆胰岛素/血糖值(IGR1)和胰岛素/胰高血糖素值(IGR2)。结果显示:注射前,各组水牛血浆葡萄糖、胰岛素和胰高血糖素的浓度接近。组Ⅱ和组Ⅲ水牛的上述指标在所有采样时间点上组内和组间均未表现出显著性差异(P>0.05),IGR1和IGR2也没有明显变化。组Ⅰ水牛静注葡萄糖1 m in后血糖浓度迅速升至峰值,而血浆胰岛素30 m in后才升高(约20倍)至峰值,然后两者均缓慢下降,直到420 m in仍明显高于注射前的水平(P<0.05)。而胰高血糖素仅在注射葡萄糖后1和5 m in时显示出差异(P<0.05),IGR1在注射葡萄糖(组Ⅰ)后立即下降,至注射后180 m in,组Ⅰ的IGR1和IGR2与组Ⅱ和组Ⅲ的基本持平。相关性分析表明,血糖浓度与血浆胰岛素水平呈极显著正相关(r=0.73,P<0.01),与胰高血糖素浓度呈显著负相关(r=-0.58,P<0.05),但胰岛素水平与胰高血糖素浓度相关性不显著(r=0.06,P>0.05)。提示:水牛胰岛素代谢迟缓,对静注的葡萄糖清除缓慢,表现出持续性高血糖症和高胰岛素血症;水牛对于静注葡萄糖的反应不同于奶牛、犬、马等其他动物。 刘家国 刘艳娟 孙卫东 赵洪进 王小龙关键词:水牛 糖代谢 血糖