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国汉邦: 作品数：80 被引量：296H指数：9; 供职机构：北京医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金国家科技支撑计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学社会学更多>>

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人重组载脂蛋白E在大肠杆菌中的表达和纯化被引量：3: 2002年; 用含有载脂蛋白EcDNA的PET32a原核表达载体转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,使之高效表达载脂蛋白E thioredoxin融合蛋白。利用融合蛋白上的一段组氨酸序列 ,用镍离子亲合层析柱进行分离纯化。由于在载脂蛋白E和thioredoxin之间存在凝血酶的识别位点 ,用凝血酶消化后 ,经SephacrylS 30 0凝胶过滤得到人重组载脂蛋白E。用此方法可以从 1L大肠杆菌培养液中纯化 2 0～ 30mg高纯度的各种载脂蛋白E异构体和非自然存在的突变体 ,方法简便 ,产量高 ,纯度达 95 %以上。; 国汉邦董军王抒; 关键词：大肠杆菌载脂蛋白E 重组蛋白纯化

老年痴呆患者apoE基因型分布被引量：20: 1997年; 目的观察中国老年痴呆患者ａｐｏＥ基因型的分布，初步探讨ａｐｏＥ在老年痴呆发病中的作用。方法应用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）对３５例健康人、２３例多梗塞性痴呆（ＭＩＤ）及１７例老年性痴呆（ＡＤ）患者进行ａｐｏＥ基因多态性分析，测定血清胆固醇（ＴＣ）、甘油三酯（ＴＧ）、高密度脂蛋白胆固醇（ＨＤＬ－Ｃ）、低密度脂蛋白胆固醇（ＬＤＬ－Ｃ）、载脂蛋白ＡⅠ（ａｐｏＡⅠ）、载脂蛋白Ｂ（ａｐｏＢ）和载脂蛋白Ｅ（ａｐｏＥ）的浓度。结果ＡＤ组与健康对照组在ａｐｏＥ基因频率及等位基因频率分布上的差异有显著性（χ２＝１１．５，Ｐ＜０．０５；χ２＝１６．２，Ｐ＜０．０１）；ＭＩＤ组与健康对照组间差异无显著性（Ｐ＞０．０５）；应用Ｗｏｏｌｆ公式计算，发现ａｐｏＥε４等位基因与ＡＤ之间有显著性关联（χ２＝７．７，Ｐ＜０．０１），相关危险度（ＲＲ）＝３．０。ＡＤ组血清ａｐｏＥ水平显著高于对照组（Ｐ＜０．０５），而ＴＣ、ＬＤＬ－Ｃ、ａｐｏＡⅠ、ａｐｏＢ显著低于对照组（Ｐ＜０．０５）。结论结果提示ａｐｏＥε４等位基因与老年性痴呆有显著性关联，ａｐｏＥε４可能是ＡＤ发病的危险因素。; 国汉邦唐蔚青秦斌秦斌夏永静国弘蔡晓杰王抒黎健; 关键词：载脂蛋白E 早老性痴呆 APOE 基因型

尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4源性活性氧过量产生抑制胚胎干细胞向心肌细胞的分化(英文): 2007年; 背景:作为信号传导通路中的第二信使,活性氧(主要指超氧离子和过氧化氢)对细胞的生长、分化起重要作用。过量的活性氧在心脏疾病中启动了心肌细胞的凋亡,尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4源性活性氧的过量产生诱导凋亡是否抑制了胚胎干细胞向心肌细胞的分化。目的:探讨尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4活性氧对心肌细胞分化的抑制作用。设计:随机对照实验观察。单位:卫生部北京医院老年医学研究所。材料:胚胎干细胞CGR8为本实验室自存,其他主要试剂除特别注明均购自Sigma公司。方法:实验于2003-10/2005-08在卫生部北京医院老年医学研究所进行。①将小鼠胚胎干细胞分化成胚小体。在分化4d后以不同浓度的过氧化氢(1,10,100,1000nmol/L)处理胚小体1h,在分化8d后观察心肌细胞的生成,分析活性氧对心肌细胞分化的影响。②将pcDNA3.1和pcDNA3.1-NOX4质粒分别转染CGR8细胞,同时以未进行转染的CGR8细胞为对照,以RT-PCR和WesternBlotting测定尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4mRNA和MLC2v蛋白水平,应用定量四唑氮蓝高水平表达尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4干细胞中活性氧水平。③采用活性氧清除剂N-乙酰半胱氨酸(5mmol/L)和过氧化氢酶(200U/mL)转染前处理2h作为对照,用Hoechst染色、TUNEL和DNAladder分析尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4过表达后CGR8细胞凋亡情况,同时检测转染尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶氧化酶4后CGR8细胞中p21、p53及Bcl-2的表达。主要观察指标:①活性氧对心肌细胞分化的影响。②胚胎干细胞中尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶的表达。③尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4过表达后活性氧产生量、心肌细胞的分化和胚胎干细胞凋亡的观察。④p53,p21和Bcl-2是否参与了尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4过表达诱导的细胞�; 张小勇国汉邦黎健; 关键词：活性氧 NADPH氧化酶胚胎干细胞

肿瘤坏死因子α引起脐静脉内皮细胞粘附功能损伤的作用机制的研究: <正>目的:本研究旨在通过观察肿瘤坏死因子α(TNFα)对脐静脉内皮细胞粘附功能的损伤,明确核酸解旋酶家族成员p68在其中可能起到的作用,并证实脐静脉内皮细胞中p68的调节机制,探讨其活化的相关信号通路。方法:1.用酶消...; 朱玉萍沈涛王抒黎健国汉邦黄秀清; 关键词：肿瘤坏死因子Α; 文献传递

一种高密度脂蛋白胆固醇分数酯化速率的测定方法: 本发明公开了一种高密度脂蛋白胆固醇分数酯化速率的测定方法，包括a)在新鲜全血样本中加入卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性抑制剂；b)加入沉淀剂得到只含有高密度脂蛋白的样品；c)将样品分成两份，一份加入卵磷脂胆固醇酰基转移酶活性恢...; 陈文祥董军彭涛王抒国汉邦李红霞满永; 文献传递

单纯性肥胖青少年血清脂蛋白亚组分胆固醇含量分析: 肥胖已成为影响城市学生的健康的重要问题。肥胖与动脉粥样硬化(As)性疾病在发病机制上关系密切,其中血脂代谢异常在肥胖相关疾病的发生过程中起重要作用。本研究旨在通过对单纯性肥胖青少年的血脂、脂蛋白及其亚组分分布特点进行分析...; 国汉邦黄秀清董军李红霞满永王抒黎健; 文献传递

HDL抑制人脐静脉内皮细胞NADPH氧化酶4表达和活性氧生成被引量：1: 2008年; 目的分析HDL对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)内NAD-PH氧化酶4(NADPH oxidase4,NOX4)及其亚组分p22phox、p67phox、Rac1与活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成的影响,研究HDL对LDL的拮抗作用。方法用Ⅱ型胶原酶消化法分离培养HUVEC;用RT-PCR、Western印迹观察NOX4、p22phox、p67phox、Rac1表达的变化;用流式细胞仪检测细胞内ROS的变化。结果HDL处理HUVEC能下调NOX4和p67phox mRNA和蛋白水平,但不影响p22phox和Rac1的表达。高浓度LDL刺激HUVEC时,NOX4表达上调,细胞内ROS生成增加,但p22phox、p67phox和Rac1的表达没有明显变化。用HDL预处理再加高浓度LDL刺激时,NOX4表达下调,ROS生成量减少;结论HDL可通过下调HUVEC NOX4表达降低ROS水平。; 王蕾国汉邦张小勇屈顺林丁莉满永王抒黎健; 关键词：活性氧人脐静脉内皮细胞高密度脂蛋白

液相色谱串联质谱测定血清胆固醇酯n-3脂肪酸方法的建立被引量：2: 2013年; 目的建立液相色谱串联质谱（liquid chromatography tandem mass spectrometry, LC-MS/MS）测定血清胆固醇酯n-3脂肪酸（CE-n-3FA）的方法，以进行营养监测和心血管疾病危险分析。方法本研究为方法学建立及评价。2012年1-8月征集111名北京地区健康志愿者（年龄19-72岁），其中男55名，女56名。建立各胆固醇酯（CEs）质谱测定条件，异丙醇提取血清CEs，稀释后用LC-MS／MS分析各种CEs，归一化法定量。评价新方法的精密度。用新建立的LC-MS／MS方法测定血清CE-n-3FA含量，同时用试剂盒测定三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和超敏c反应蛋白（hs-CRP）。用Spearman相关分析CE-n-3FA与年龄、体质指数（BMI）、TG、HDL-C、LDL-C和hs-CRP的关系。结果样本分析在5rain内完成，11种主要CEs分离良好；CE20：5和CE22：6平均批内CV分别为1．6％-2．3％和1．5％-2．3％，总CV分别为3．9％-7．6％和3．5％-7．4％，未见明显干扰因素。111名健康志愿者血清分析结果显示，CE20：5和CE22：6均呈正偏态分布（偏度分别为1．81和1．09；峰度分别为4．50和1．40），中位数分别为0．37％（0．13％-1．26％）和0．50％（0．29％-0．94％）。CE20：5与年龄、TG、TC、hs-CRP呈正相关（P〈0．05）。结论成功建立了LC-MS／MS测定血清CE-n-3FA含量的方法，有望用于营养监测，CE-n-3FA与心血管疾病的关系还有待进一步研究。; 禹松林董军周伟燕赵海建杨睿悦李红霞张天娇国汉邦王抒张传宝陈文祥; 关键词：串联质谱法胆固醇酯类

血清-巨噬细胞间胆固醇净流动测定研究: 2013年; 目的建立一种高效液相色谱（HPLC）测定血清-巨噬细胞间胆固醇净流动的方法，用以分析与动脉粥样硬化危险因素的关系。方法培养小鼠巨噬细胞J774，用含5％个体血清的培养基进行孵育8h，HPLC测定孵育前后细胞胆固醇，计算个体血清介导的细胞胆固醇净流动，建立血清-巨噬细胞间胆固醇净流动的测定方法。2010年10至12月征集75名北京医院健康志愿者，男38例、女37例，采集空腹静脉血，用所建方法测定胆固醇净流动；Spearman相关分析胆固醇净流动与血脂、脂蛋白、超敏C反应蛋白（hsCRP）等动脉粥样硬化危险因素的关系。结果发现个体血清孵育细胞时导致细胞胆固醇内流，细胞胆固醇随培养基中血清浓度和孵育时间的增加而增多。HPLC测定细胞胆固醇净流动的平均批内变异和总变异分别为0．81％-4．03％和4．25％-6．58％。75例健康志愿者胆固醇净流动均值为10．27μg／mg蛋白，标准差2．69μg/mg蛋白，中位数10．12μg/mg蛋白。胆固醇净流动与血清总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、hsCRP，载脂蛋白（Apo）CⅡ、ApoCⅢ、小而密低密度脂蛋白胆固醇（LDLb-C）、高密度脂蛋白（HDL）胆固醇摩尔酯化速率（MERHDI）（P〈0．001），HDL胆固醇分数酯化速率FERHDL、Preβ．HDL（P〈0．01）等呈显著正相关，但与HDL及其亚类胆固醇无相关性（P〉0．05）。结论本研究建立了血清-巨噬细胞间胆固醇净流动的细胞分析体系和HPLC准确测定净流动的方法，为进一步研究血清．巨噬细胞间胆固醇净流动、HDL功能评价和心血管病危险分析提供了方法学基础。; 王默国汉邦赵海建杨睿悦李红霞王抒董军陈文祥; 关键词：巨噬细胞胆固醇动脉粥样硬化

高效液相色谱检测全血贮存对血清总胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇的影响被引量：13: 2005年; 目的检查全血贮存对血清总胆固醇(TC)和高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)的影响,并探讨其可能机制。方法建立高效液相色谱(HPLC)方法,测定不同个体全血样品经不同温育后血清TC、总游离胆固醇(TFC)、HDLC和高密度脂蛋白游离胆固醇(HDLFC),计算有关参数或指标并做统计分析。结果建立的HPLC方法平均批内变异系数0.22%～0.51%;全血温育造成血清TC和HDLC变化(平均0.6%～2.1%和2.0%～4.1%),有些个体变化明显(TC>±3%,HDLC>±5%)。结论建立血清TC、TFC、HDLC和HDLFC的精密测定方法;血清TC和HDLC在不同条件下的全血贮存中,受血清体积变化、血细胞-脂蛋白间胆固醇交换或转移等许多复杂因素的影响而发生变化;血脂测定标本应尽量减少不必要的贮存。; 张江涛董军李红霞国汉邦满咏王抒陈文祥; 关键词：高密度脂蛋白胆固醇血清总胆固醇游离胆固醇血清TC 血脂测定 TFC

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