国娇
- 作品数：8 被引量：33H指数：4
- 供职机构：吉林农业大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家高技术研究发展计划公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 吉林省汉坦病毒宿主动物携带病毒的遗传进化分析被引量：8
- 2014年
- 目的对吉林省汉坦病毒（Hantavirus，Hv）宿主动物携带病毒进行遗传进化分析。方法采集吉林省不同地区鼠肺样品，应用间接免疫荧光法（indirect immunofluorescence assay，IFA）鉴定出HV感染的阳性样本，利用Trizol试剂提取病毒RNA，RT-PCR法扩增阳性样本中M和S片段基因，并进行测序，应用DNASTAR软件对M和S片段基因的核苷酸同源性进行分析，并与汉城病毒（Seoulvirus，SEOV）参考株进行比较；利用MegAligh软件进行蛋白序列中氨基酸差异性分析；利用MEGA5.0软件进行系统发生分析。结果共捕获719只啮齿动物，其中褐家鼠（R.norvegicus）555只，黑线姬鼠（A.agrarius）74只，小家鼠（胍m12sclzllzs）90只，HV抗原阳性率为1.39％（10／719）；10份阳性样本中，7份来自褐家鼠，2份来自小家鼠，1份来自黑线姬鼠。用全长s引物扩增得到的10株病毒全长s基因片段，经同源性分析比较发现，各序列间的核苷酸同源性在92.8％～95.1％之间，与其他SEOV核苷酸同源性在90.2％～94.7％之间；用M引物扩增得到的部分基因片段，经同源性分析比较发现，各序列间的核苷酸同源性在96.5％～99.5％之间，而与其他SEOV核苷酸同源性在91.5％～97.7％之间；10株病毒全部属于SEOV。黑线姬鼠G蛋白365～769位点问有5个氨基酸差异位点（V494L、C546S、Y626C、M630L和V637I），小家鼠G蛋白365～769位点问主要有5个氨基酸差异位点（C378G／R、F420L、Q436P／R、E535G／A和C589G／W），但同种间在378、436、535和589位点也有差异；黑线姬鼠N蛋白1～430位点间存在P298L变异；小家鼠N蛋白变异位点较多，主要在M24K／N、A37D、1140M、M173K、D192E、L219V、P229A、D237E、H265Y、V284L、T333S、A389G和V425E变异。分离得到的10株病毒根据不同的来源地可分为两个不同的进化分支。结论研究表明吉林省宿主动物携带的HV仍以SEOV为主，其遗传进化呈现多
- 范胜涛高晓龙李元果应瑛国娇张钊伟刘红吴静杨松涛赵永坤秦川高玉伟夏咸柱
- 关键词：汉坦病毒进化
- 中国首株H13N6亚型禽流感病毒遗传进化分析及致病性和传播性评估被引量：3
- 2015年
- 为了解我国首次分离的H13N6亚型禽流感病毒(AIV)生物学特性,本研究对该分离株进行全基因序列测定和分析,并对其进行BALB/c小鼠和SPF鸡致病性试验以及豚鼠传播试验。序列分析表明HA碱性裂解位点序列为PAISNR↓G,为低致病性AIV。遗传进化分析表明NA基因属于北美谱系,其余7个基因均属于欧亚谱系;其中NA、NP、M、NS基因来源于鸥类,而HA、PB2、PB1、PA基因来源于野鸭类。动物致病性和传播试验结果显示,该病毒株在鸡和小鼠体内不能进行有效复制,在豚鼠和鸡体内也不能进行排毒和有效传播。基因序列分析结合致病性和传播性试验表明H13N6亚型AIV分离株可能是通过候鸟迁徙而传入我国的新型重组AIV,但该病毒株仍只能感染野生水禽尚未获得跨越种间屏障感染陆生家禽和人的能力,尚不具备哺乳动物间和家禽间的传播能力。
- 高晓龙范胜涛李胜楠国娇王爱荣孙伟洋李雪虞一聪王铁成李元果桑晓宇于志君张坤高玉伟夏咸柱
- 关键词：致病力小鼠
- H5N1亚型流感病毒血凝素(HA)蛋白的表达鉴定及免疫原性研究被引量：5
- 2016年
- 目的为了获得H5N1HA蛋白,利用昆虫杆状病毒表达系统表达了A/meerkat/Shanghai/SH-1/2012(clade2.3.2.1)的HA基因并获得重组H5N1亚型流感病毒HA蛋白。方法将H5N1亚型2.3.2.1谱系的HA蛋白基因扩增并克隆到pFastBacⅠ载体中,构建重组穿梭质粒,转染昆虫sf9细胞后获得重组杆状病毒,对大量培养后表达的H5N1HA蛋白进行SDS-PAGE、Western blot和间接免疫荧光检测。分别在0d和14d用纯化的表达产物HA蛋白免疫小鼠,免疫两周后进行H5N1攻毒试验,记录小鼠体重变化率及生存率。结果测序鉴定重组表达载体构建正确;SDS-PAGE显示纯化的表达蛋白分子质量为65ku;Western blot分析该蛋白能够被兔抗流感病毒IgG识别;鸡抗流感病毒抗体间接免疫荧光法测定HA蛋白的表达,在感染HA的昆虫细胞中出现特异性荧光;攻毒试验表明HA蛋白能够在小鼠体内诱导产生免疫应答并且保护H5N1流感病毒的致死性攻击。结论成功的表达了H5N1的HA蛋白,并且此HA蛋白能成功的诱导小鼠体内的免疫反应,并起到良好的保护作用。
- 孟令楠任志广冀显亮于竟杰李元果李胜楠于志君孙伟阳国娇赵永坤王铁成冯娜王化磊杨松涛高玉伟夏咸柱胡桂学
- 关键词：流感病毒疫苗杆状病毒表达系统
- B型流感病毒B/Yamagata/16/88反向遗传操作平台的搭建及BALB/c小鼠感染模型的建立被引量：1
- 2015年
- 目的利用基因工程技术全基因合成B型流感病毒B/Yamagata/16/88的8个基因节段,并利用反向遗传技术从体外拯救B型流感病毒B/Yamagata/16/88,同时建立BALB/c小鼠感染模型,为下一步研究B型流感病毒致病机制、传播机制以及开发新型疫苗奠定基础。方法通过基因合成和反向遗传技术体外拯救B型流感病毒B/Yamagata/16/88。全基因组测序验证拯救病毒基因组序列与Genbank序列的一致性。将拯救病毒以105EID50的攻毒剂量人工感染BALB/c小鼠,通过体重变化、生存率、肺脏病毒复制等方面进行致病性分析,建立小鼠感染模型。结果成功从体外拯救出B型流感病毒B/Yamagata/16/88,命名为B-S9。全基因组测序结果表明,B-S9基因组序列与Genbank公布序列一致。B-S9能够人工感染BALB/c小鼠,但不致死,对BALB/c小鼠呈现低致病性;攻毒后第3天,B-S9感染小鼠体重出现下降,攻毒后第8天,小鼠体重开始回升;攻毒后第3天和第6天,B-S9感染小鼠的肺脏内均能检测到病毒复制,且攻毒后第3天的小鼠肺脏病毒滴度比攻毒后第6天的小鼠肺脏滴度高132倍。结论成功搭建B型流感病毒B/Yamagata/16/88反向遗传操作平台,并建立BALB/c小鼠感染模型。目前国内外对B型流感病毒的研究比较少,该反向遗传操作平台的建立为B型流感病毒致病机制和传播机制的研究奠定了基础,同时也为包括B型流感病毒减毒活疫苗在内的新型疫苗的研制开辟了新途径。
- 孙伟洋于志君李雪陈强高晓龙国娇张坤李元果王铁成杨松涛黄耕赵永坤高玉伟夏咸柱
- 关键词：B型流感病毒反向遗传操作BALB/C小鼠
- 圈养白虎H5N1亚型禽流感病毒的分离鉴定及其HA和NA基因的生物信息分析被引量：3
- 2017年
- 采集某动物园病死白虎(Panthera tigers)的组织样本,置于灭菌的PBS中充分研磨,离心后取上清液并加入双抗后,接种于9~10日龄鸡胚,分离到1株具有血凝性的病毒。HA和HI试验表明该病毒为H5亚型禽流感病毒;HA和NA基因序列分析表明该病毒为H5N1亚型禽流感病毒,其HA基因属于Clade 2.3.2.1分支。结果表明:该虎感染了H5N1亚型禽流感病毒,本试验对我国圈养野生虎流感疾病的防控具有重要作用。
- 王海军王开李元果李胜楠国娇胡桂学高玉伟夏咸柱
- 关键词：H5N1亚型禽流感生物信息
- 7株野鸟源新城疫病毒F基因和HN基因遗传变异分析被引量：5
- 2015年
- 目的了解野生鸟类新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）感染情况,分析NDV的基因型与遗传变异特点。方法采用HA试验和RT-PCR检测野生鸟类新城疫病毒感染情况,对新城疫病毒分离株的融合蛋白基因（F基因）和血凝素-神经氨酸酶基因（HN基因）进行遗传进化分析,了解F和HN基因相关分子特性。结果 7株NDV的F基因序列分析表明显示其编码区核苷酸为1 662bp,编码553个氨基酸。F基因碱性裂解位点序列为112G-K/RQ-G-R-L117,均符合新城疫弱毒特征,与Ⅱ类NDV代表株核苷酸同源性为93.5%~99.9%。M46与M52为Ⅱ类Ⅱ亚型,其余5株为Ⅱ类Ⅰ亚型。HN基因序列分析显示,M46、M52编码区核苷酸为1 734bp,编码577个氨基酸,其余5株编码区氨基酸为1 851bp,编码616个氨基酸,与Ⅱ类代表毒株核苷酸同源性为92%~99.6%。结论分离的7株新城疫病毒在基因上均符合弱毒特点。其中有5株为Ⅱ类Ⅰ型,2株为Ⅱ类Ⅱ型。
- 李胜楠王海军高晓龙李元果国娇陈迪王铁成于志君高玉伟夏咸柱王全凯
- 关键词：新城疫病毒融合蛋白基因
- 东北三省圈养东北虎重要病毒性传染病血清学调查与分析被引量：5
- 2017年
- 东北虎(Pantheratigris)是我国国家Ⅰ级保护动物。截至目前,危害东北虎的重要病毒性传染病主要有犬瘟热(CDV)、禽流感(AIV)和细小病毒病(FPV)。为了解我国东北三省圈养东北虎CDV、AIV和FPV的潜伏感染和免疫情况,利用血凝及血凝抑制试验、中和试验,对75只圈养东北虎进行了CDV、AIV和FPV的血清学调查。结果表明:我国东北地区圈养东北虎H5亚型禽流感、H9亚型禽流感和犬瘟热病毒抗体阳性率分别为9.33%(7/75)、61.33%(46/75)和16.00%(12/75)。说明,我国圈养东北虎AIV和CDV感染率较高,对圈养虎健康构成一定威胁。圈养虎群细小病毒抗体阳性率为100%,这与其接种猫瘟热、传染性鼻气管炎和鼻结膜炎三联疫苗有关。
- 王海军王开李元果国娇胡桂学高玉伟夏咸柱
- 关键词：东北虎犬瘟热细小病毒血清学调查
- 重组H7N9亚型流感病毒血凝素(HA)的表达及鉴定被引量：3
- 2016年
- 目的为了获得H7N9HA蛋白,利用昆虫杆状病毒表达系统表达了H7N9HA基因并获得重组H7N9亚型流感病毒HA蛋白。方法将H7N9亚型流感病毒的HA蛋白基因扩增并克隆到pFastBacⅠ载体中,构建重组穿梭质粒,转染昆虫sf9细胞后获得重组杆状病毒,对大量培养后表达的H7N9HA蛋白进行SDS-PAGE、Western blot和间接免疫荧光检测。分别在0d和14d用纯化的表达产物HA蛋白免疫小鼠。结果测序鉴定重组表达载体构建正确;SDS-PAGE显示纯化的表达蛋白分子质量为67ku;Western blot分析该蛋白能够被鸡抗流感病毒IgG识别;鸡抗流感病毒抗体间接免疫荧光法测定HA蛋白的表达,在感染HA的昆虫细胞中出现特异性荧光。结论成功的表达了H7N9的HA蛋白,并且此HA蛋白能成功的诱导小鼠体内的免疫反应,并起到良好的保护作用。
- 孟令楠任志广冀显亮李元果李胜楠于志君孙伟洋国娇赵永坤王铁成冯娜王化磊杨松涛高玉伟胡桂学夏咸柱YU Jing-jie
- 关键词：流感病毒杆状病毒表达系统
