周琼
- 作品数：5 被引量：20H指数：3
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- α和β-熊果苷对共培养小鼠黑素细胞黑素生成的影响研究被引量：2
- 2008年
- 目的比较观察熊果苷分子苯环侧链上的糖苷基团α-和β-构象对共培养小鼠黑素细胞酪氨酸酶活性和黑素含量的影响。方法体外melan-a小鼠黑素细胞（MC）与SP-1小鼠角质形成细胞（KC）共培养体系，两种细胞的初始接种比例为1：5。共培养细胞分别用含有0．04、0．2、1mg／ml的α-熊果苷、β-熊果苷、烟酰胺及10、50、100μmol／L的甲氧沙林（8-MOP）新鲜培养基换液，药物处理共4d。用相差倒置显微镜观察细胞表型的改变；用四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法测定细胞增殖率；用放射性核素L-[^14C]-酪氨酸底物标记法测定酪氨酸羟化酶与多巴氧化酶活性；用分光光度计法测定细胞总黑素含量。结果除8-MOP能明显促进共培养细胞（主要是MC）发生增殖外，其他3种化合物对细胞增殖率均无影响。两种熊果苷均能剂量依赖地抑制酪氨酸酶活性和黑素含量。1mg／mlα-熊果苷对酪氨酸酶活性的抑制作用比同等浓度的β-熊果苷强（酪氨酸酶活性：37％±4％vs54％±9％，P=0．034）。经两种熊果苷（1mg／m1）处理的MC树状突延长纤细，黑素产生较对照组明显减少，以α-熊果苷更为明显。相反，100μmol／L8-MOP处理组的MC数目较对照组显著增加，树状突增加，胞质与树状突内有大量黑褐色黑素堆积。结论α-熊果苷能明显抑制共培养小鼠黑素细胞的黑素生成，其临床应用价值有待体内实验进一步确认。
- 周琼雷铁池徐世正
- 关键词：熊果苷甲氧沙林酪氨酸酶
- 与黑素结合的羟氯喹对长波紫外线诱导HaCaT细胞死亡的光保护机制研究被引量：6
- 2008年
- 目的:观察与黑素结合的羟氯喹(HCQ)对细胞内活性氧基(ROS)的清除以及对长波紫外线(UVA)诱导人角质形成细胞(HaCaT细胞)凋亡和坏死的保护。方法:自一株产黑素的嗜麦芽假单胞菌AT18的培养液中分离纯化获得细菌衍生黑素,在体外与不同浓度HCQ结合后处理培养的HaCaT细胞,随后给予半数致死剂量(30J/cm2)的UVA照射。照射12h后,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞存活率;碘化丙啶(PI)染色结合流式细胞仪检测细胞凋亡率;采用二氯荧光素二酯(DCFH-DA)标记法测定细胞内ROS水平。结果:低浓度(10、50μmol/L)HCQ与黑素结合后能明显保护HaCaT细胞抵抗半数致死剂量(30J/cm2)UVA照射,尤其是50μmol/LHCQ+50mg/L黑素处理组细胞存活率较单纯黑素和单纯HCQ组显著增高(P<0.05);相反,用高浓度(250μmol/L)HCQ与黑素结合处理细胞,细胞存活率较单纯黑素和单纯HCQ组减低。与单纯黑素和单纯HCQ组相比,10μmol/LHCQ与黑素结合还能显著提高细胞内ROS的清除能力和抑制UVA诱导HaCaT细胞凋亡。结论:低浓度HCQ与黑素结合能协同增强黑素对细胞内ROS的清除,抑制UVA诱导的皮肤细胞凋亡,这些作用很可能关系到治疗皮肤型红斑狼疮时抗疟药的抗光敏机制。
- 汪小兰车巍周琼雷铁池梁虹徐世正
- 关键词：黑素羟氯喹长波紫外线
- ^14C放射性核素标记硫脲嘧啶掺入法测定黑素小体转移
- 2008年
- 目的建立用^14C放射性核素标记的硫脲嘧啶（^14C—TU）掺入定量测定黑素小体转移的方法。方法^14C—TU被黑素细胞摄入后能迅速与黑素生成中间产物特异性地结合而掺入新生黑素中，用经^14C-TU预标记过夜的melan—a小鼠黑素细胞（MC）与SP-1小鼠角质形成细胞（KC）建立共培养体系，并在共培养后的不同时间，采用二次差异胰酶消化法再将两种细胞分离，用液体闪烁计数仪测定KC内被转移的放射活性量以示黑素小体转移量。同时，应用此方法初步观察毛喉素（一种PKA激动剂）和烟酰胺对黑素小体转移的影响。结果①相同数目（2．5×10^5）的MC和Kc分别用1μCi ^14C-TU标记12h或48h，放射活性测定显示，MC的放射活性（c／min）分别是KC的80或66倍，表明^14C—TU能高度特异地标记新生黑素，是一理想示踪黑素小体转移的标记物。②与未处理对照组相比，20μmol／L毛喉素能增加黑素小体转移近2．3倍，而1g／L烟酰胺能抑制黑素小体转移达0．67倍。③MC与KC共培养8～12h，MC树突伸展良好，并已有黑素小体发生转移，此时尚未观察到毛喉素诱导的MC增殖。二次差异胰酶消化法用于共培养体系中的KC分离能获得满意的效果（KC纯度约为84．5％）。结论建立体外的MC和KC共培养结合^14C—TU掺入法能定量观察毛喉素和烟酰胺对黑素小体转移的影响。
- 周琼雷铁池徐世正
- 关键词：黑素细胞角蛋白细胞
- 细菌衍生黑素对长波紫外线诱导人皮肤成纤维细胞凋亡和坏死的保护被引量：6
- 2008年
- 目的:探讨细菌衍生黑素(b-melanin)对长波紫外线(UVA)诱导人成纤维细胞凋亡和坏死产生的光保护作用,为今后将其用作皮肤光保护剂提供依据。方法:正常人成纤维细胞(NL-FB)和着色性干皮病患者成纤维细胞(XP-FB)经UVA照射12h后,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,Hoechst33258染色法观察早期凋亡细胞核形态学变化,二氯荧光素二酯(DCFH-DA)标记法测定细胞内活性氧基(ROS)水平。结果:UVA照射诱导细胞的半数致死剂量,XP-FB大约为30J/cm2,而NL-FB>40J/cm2。为了观察不同浓度(0,25,50,100,200,400,和800μg/mL)的b-melanin是否对细胞存在光保护作用,给予半数致死剂量(30J/cm2)UVA照射后,经100～400μg/mLb-melanin处理的XP-FB的细胞存活率均较未处理组明显增高(P<0.01),而NL-FB的细胞存活率变化不明显。细胞内ROS测定结果显示100、400μg/mL的b-melanin能明显清除UVA诱导产生的ROS。100μg/mL b-melanin即能阻止非致死剂量(16J/cm2)UVA照射诱导的早期凋亡细胞核改变。结论:b-melanin能对UVA诱导人成纤维细胞凋亡和坏死提供有效的光保护,这一作用很可能关系到b-melanin对ROS的清除。本研究还首次提出核酸切除修复机制缺陷的XP-FB是一敏感的可用于测试UVA光损伤作用的体外细胞模型。
- 周琼雷铁池耿晶陈向东车巍饶立徐世正
- 关键词：黑素长波光保护着色性干皮病
- 氧对5-氨基酮戊酸光动力疗法诱导HaCaT细胞凋亡和死亡的影响被引量：7
- 2008年
- 目的探讨基态氧和单线态氧对5-氨基酮戊酸光动力疗法（ALA-PDT）诱导HaCaT细胞凋亡和死亡的影响。方法取对数生长期的HaCaT细胞，分别与不同浓度的ALA避光孵育4h，随后给予相应剂量的He-Ne激光照射，照射后12h以MTT法检测细胞存活率；PI单染法检测细胞凋亡率；二氯荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）标记法测定细胞内活性氧基（ROS）水平。为了造成光动力反应前后细胞的化学缺氧以及淬灭产生的单线态氧基（^1O2），将不同浓度的氯化钴（CoCl2）和叠氮钠（NaN3）分别加入培养基，比较ALA-PDT处理组与未处理组HaCaT细胞凋亡和死亡率以及细胞内ROS水平的变化。结果MTT结果表明，ALA-PDT诱导HaCaT细胞的凋亡与死亡率与ALA浓度和He-Ne激光照射剂量呈正相关。经400μmol／LCoCl2处理的细胞，胞内ROS水平显著降低，细胞死亡率未处理组为57．65％±2．88％，处理组降至16．68±1．86％，细胞凋亡率则分别为43．80％和15．40％。10mmol／L NaN3几乎能完全清除ALA-PDT诱导产生的ROS，增强HaCaT细胞对ALA-PDT诱导的细胞死亡或凋亡的抵抗。结论改变光动力反应前后细胞内的基态氧与单线态氧含量，能调控ALA-PDT诱导的HaCaT细胞凋亡和死亡。
- 车巍周琼雷铁池方春红徐世正
- 关键词：氨基酮戊酸光化学疗法细胞凋亡坏死
