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高滴度表达抑制转录因子的重组腺相关病毒的制备: 2004年; 目的　获得表达小鼠抑制转录因子ROG(repressorofGATA -3)基因 ;构建表达ROG的重组腺相关病毒载体 ,制备腺相关病毒。方法　设计、合成引物 ,通过逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)从CTLL- 2细胞总RNA中扩增ROG基因 ,测序成功后 ,最终连接于pAAV- MCS ,双酶切、PCR鉴定阳性重组质粒 ,并在Hela细胞中表达 ;制备高滴度重组腺相关病毒。结果　成功扩增了小鼠ROG基因 ,构建表达ROG基因的重组腺相关病毒表达载体 ,并成功表达于Hela细胞。结论　本实验构建的小鼠ROG重组腺相关病毒将为哮喘的基因治疗研究奠定物质基础。; 王桂芳杨丹榕修清玉施柯吴丹黎怀星孙树汉; 关键词：重组腺相关病毒转录因子 HELA细胞高滴度酶切总RNA

猪白细胞介素4的基因克隆及其在囊尾蚴DNA疫苗中的应用被引量：14: 2002年; 目的:克隆猪白细胞介素4(IL-4)cDNA,观察其在抗囊尾蚴免疫中的疫苗佐剂作用。方法:通过RT-PCR法获得带有5'AUG侧翼翻译优化突变序列的猪IL-4 cDNA,测序后重组入真核表达载体pcDNA,在体外瞬时表达的基础上与囊尾蚴保护性抗原DNA疫苗联合免疫仔猪。结果:获得的猪IL-4 cDNA序列与文献报道的完全一致,在体外瞬时表达中获得了有生物学活性的猪IL-4。其与囊尾蚴保护性抗原DNA疫苗联合应用可有效提高个体体液免疫应答水平。结论:构建了一高效表达猪IL-4的真核表达质粒,初步实验证实了其在抗囊尾蚴DNA疫苗中的佐剂效应。; 吴丹郭瀛军王庆敏孙树汉; 关键词：基因克隆囊尾蚴 DNA疫苗

猪囊尾蚴抗原cC1与γ-干扰素融合蛋白在大肠杆菌中的表达被引量：8: 1999年; 目的：构建含猪囊尾蚴抗原ｃＣ１ｃＤＮＡ与猪γ干扰素（ＩＦＮγ）的融合表达载体。方法：从已克隆的含人猪囊尾蚴共通抗原ｃＣ１的质粒中，用ＰＣＲ方法扩增出含酶切位点及接头的ｃＣ１和ＩＦＮγｃＤＮＡ，两ｃＤＮＡ经接头融合后构建成融合形式的原核表达载体转入大肠杆菌ＸＬ Ｂｌｕｅ。结果：经酶切分析，表明重组载体中含１５ｋｂ插入片段。ＳＤＳ ＰＡＧＥ显示一５２ｋＤａ的诱导产物。结论：猪ＩＦＮγ和猪囊尾蚴抗原ｃＣ１融合ｃＤＮＡ在大肠杆菌中获得表达。; 郭瀛军吴丹孙树汉; 关键词：囊尾蚴病融合蛋白 Γ-干扰素

建立高表达小鼠Retn基因的3T3-L1细胞系的研究被引量：2: 2004年; 目的:建立一个组成性地高表达小鼠Retn基因的3T3-L1细胞系。方法:(1)采用重组DNA技术将小鼠Retn基因的全长cDNA克隆到质粒pcDNA3的CMV启动子下面而获得一个能在真核细胞内组成性表达小鼠Resistin蛋白的表达载体pcDNA3-mRetn。(2)用电穿孔转染和G418筛选等方法建立能组成性地高表达小鼠Retn基因的3T3-L1细胞系。(3)诱导细胞分化为脂肪细胞,并用实时荧光RT-PCR法分析这些脂肪细胞内Retn基因mRNA的水平。结果:构建了一个能在真核细胞内表达小鼠Retn基因的表达载体;建立了一个携带有pcDNA3-mRetn载体并组成性地高表达小鼠Retn基因的细胞系。结论:成功地建立了一个组成性地高表达小鼠Retn基因细胞系,为进一步研究Retn基因的功能和小鼠Resistin蛋白的获得奠定了基础。; 李雅慧黎怀星吴丹蔡东联孙树汉; 关键词：基因表达

膜联蛋白家族新成员Anx B1的基因表达、结构及生物活性研究: 孙树汉郭瀛军颜宏利陈蕊雯胡振林张毅吴丹王庆敏; 1997年9月1日～2003年10月30日，由国家九五“863”计划、国家十五“863” 计划、国家自然科学基金等资助，进行了研究。以猪带绦虫囊尾蚴克隆到的膜联蛋白B1(Annexins B1)为研究对象，用20000...; 关键词：; 关键词：膜联蛋白囊虫病核酸疫苗生物合成基因表达生物活性

HIF-1α与自噬在乳腺癌中的临床病理意义: 目的：从mRNA水平及蛋白质水平检测HIF-1α和自噬关键基因在乳腺癌中的表达情况，并探讨它们与乳腺癌发生发展的关系及临床病理学意义。　　方法：（1）采用Real-time PCR技术，检测80例乳腺癌癌组织和10例正常...; 吴丹; 关键词：乳腺癌临床病理低氧诱导因子-1Α

重组人α8型干扰素的纯化与鉴定: 1996年; 采用酵母表达载体进行重组人α８型干扰素（ＨｕＩＦＮα８）的表达，该表达菌株可将重组α８型干扰素分泌进入培养基中，回收培养基进行纯化，然后利用超滤浓缩，先过Ｓ．ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ柱，再进行ＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ层析和Ｇ２５脱盐，最后用高效液相ＨＰＬＣ，ＳＤＳＰＡＧＥ丙烯酰胺凝胶电泳及肽图等方法对纯化产品进行鉴定。采用以上两步纯化方法纯化酵母分泌表达的重组人α８型干扰素纯度可达９５％以上，其比活性为３０×１０８ｕ／ｍｇ。; 郭嘉陆峰金永明瞿卉吴丹陆德如; 关键词：蛋白质纯化

人IL-2真核表达质粒对副肌球蛋白核酸疫苗的免疫调节作用被引量：6: 2002年; 目的　观察IL 2表达质粒对副肌球蛋白 (AgB)核酸疫苗的免疫调节作用。方法　将人的IL 2全长cDNA插入到真核表达质粒pcDNA3中构建成pcDNA3 IL 2重组质粒 ;然后接种C5 7BL 6小鼠 (分为pcDNA3组、AgB组、联合免疫组 ) ,ELISA法检测小鼠血清中的IgG和IgG2a的水平 ;用MTT法检测小鼠脾细胞增殖反应 ,用ELISA法检测其分泌的IL 2和IL 4的水平。最后在仔猪中进行攻击实验 ,观察pcDNA3 IL 2质粒的免疫刺激作用。结果　注射疫苗后 ,pcDNA3 IL 2协同注射组增强了副肌球蛋白特异性的IgG和IgG2a的水平 ,增强了脾细胞的增殖反应 ,提高了其分泌IL 2的水平 ,但对IL 4的水平产生轻微影响。仔猪攻击实验中 ,共同注射IL 2基因组提高了仔猪的相对保护率。结论对于副肌球蛋白核酸疫苗而言 ,人的IL; 王庆敏陈蕊雯吴丹孙树汉; 关键词：副肌球蛋白猪囊尾蚴人IL-2 核酸疫苗囊虫病

猪囊尾蚴抗原DNA疫苗诱导的免疫保护效应被引量：43: 2000年; 目的 :观察猪囊尾蚴保护性抗原 c C1DNA疫苗诱导的小鼠免疫应答 ,及对仔猪的免疫保护作用。方法 :将全长 c C1c DNA插入真核表达质粒载体 pc DNA3,构建了重组质粒 p3- c C1,肌注小鼠 ,EL ISA检测小鼠血清抗 c C1抗体 Ig G及 Ig G2 a水平 ,并进行仔猪的免疫保护实验。结果 :免疫小鼠第 3周出现特异性 Ig G应答 ,第 8周 Ig G水平达到最高 ;小鼠血清的 Ig G2 a检测显示 ,第 2周 Ig G2 a应答即为阳性 ,且长时间保持较高应答水平。用该疫苗免疫仔猪使其获得了 73%的保护率。结论 :猪囊尾蚴保护性抗原 c C1DNA疫苗能有效诱导仔猪的免疫保护效应。; 吴丹郭瀛军林懿孙树汉; 关键词：猪囊尾蚴免疫保护

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吴丹