刘明瑶
- 作品数：2 被引量：8H指数：2
- 供职机构：东北农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：黑龙江省科技攻关计划博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 定点突变FGF21提高表达量研究被引量：2
- 2013年
- FGF21是一类具有重要糖脂代谢调节功能因子,是治疗2型糖尿病候选药物。但其在大肠杆菌中表达量低且主要以包涵体形式表达,为此根据FGF21与FGF家族同源序列差异,对FGF21进行定点突变以提高其表达量。以pSUMO-FGF21表达载体为模板,在突变位点两端设计引物,采用定点突变方法,将FGF21141位甘氨酸(G)突变为苯丙氨酸(F),构建突变FGF21表达载体pSUMO-mutFGF21;在大肠杆菌中进行表达,纯化mutFGF21蛋白。利用SDS-PAGE和Western blot鉴定分析突变蛋白,HepG2细胞糖吸收试验检测突变蛋白活性。结果成功对pSUMO-hFGF21进行突变,突变蛋白在大肠杆菌中成功表达,经SDS-PAGE分析,主要以可溶形式表达;与野生型FGF21(hFGF21)相比,表达量提高50%。Western blot表明mutFGF21可与FGF21抗体特异性反应。糖吸收试验显示mutFGF21具有与hFGF21一样生物活性并存在剂量依赖性,相比hFGF21,mutFGF21活性略有提高,说明定点突变FGF21(141位G突变为F)可显著提高FGF21表达量。
- 李德山曹荣邱高华山任桂萍刘明瑶
- 关键词：定点突变表达量
- FGF21基因优化及其生物活性研究被引量：6
- 2012年
- 成纤维细胞生长因子21(FGF21)是FGF家族的一员,它具有独立、安全以及有效地调节生物体内血糖水平的能力。为了提高FGF21蛋白的活性,将人FGF21(hFGF21)与鼠FGF21(mFGF21)的功能区互换,构建了一种新的FGF21基因(命名为hmFGF21)。通过基因重组的方法构建SUMO-hmFGF21表达载体后,转化大肠杆菌Rosetta中诱导表达。对融合蛋白进行纯化和酶切,获得的hmFGF21突变体纯度在95%以上,并在细胞水平和动物水平上检测了突变体的生物学活性。结果表明,与野生型hFGF21相比,相同菌量hmFGF21可溶性蛋白表达量提高了约2倍。人肝细胞模型HepG2的糖吸收实验显示,hmFGF21的葡萄糖吸收显著优于野生型hFGF21。2型糖尿病动物速效降糖实验和长效降糖实验表明,hmFGF21的降糖效果显著优于野生型hFGF21。这些结果说明,野生型hFGF21经优化改造后显著提高了其生物学活性。
- 叶贤龙高华山王文飞任桂萍刘明瑶何昆张雅坤赵景壮于丹李德山
- 关键词：葡萄糖吸收2型糖尿病
