刘慧敏
- 作品数：62 被引量：137H指数：7
- 供职机构：河南农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金河南省高校科技创新团队支持计划河南省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生文化科学生物学更多>>
- 猪流行性腹泻病毒coe基因的克隆表达及卵黄抗体的制备被引量：5
- 2018年
- 通过RT-PCR技术扩增猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV)coe基因,将其克隆至原核表达载体p ET32a中,构建重组表达质粒p ET32a-coe,鉴定正确后进行诱导表达。结果表明,重组菌可表达相对分子量约为33 k D的融合蛋白;Western-Blotting结果显示,COE蛋白能与抗PEDV的阳性血清发生特异性结合反应,表明研究的COE蛋白具有良好的反应原性。纯化后的COE蛋白与弗氏佐剂按比率混合作为免疫抗原,免疫产蛋鸡,获得特异性抗猪流性腹泻病毒COE蛋白的卵黄抗体(Ig Y)。氯仿抽提法提取卵黄抗体,通过SDSPAGE、Western-Blotting对提取的卵黄抗体进行鉴定并用间接酶联免疫吸附实验(ELISA)对其进行效价检测。结果显示,纯化后的卵黄抗体Ig Y具有高度的特异性,其抗体效价可达1∶1 000。研究结果表明,表达的COE蛋白具有良好的免疫原性,作为免疫抗原制备的卵黄抗体具有较高的抗体效价。
- 朱文姣常琛朱玉虎周国丽尹志安杨国庆刘慧敏
- 关键词：猪流行性腹泻卵黄抗体
- 抗猪流行性腹泻病毒猪源化单链抗体及其制备方法
- 本发明公开了一种抗猪流行性腹泻病毒猪源化单链抗体及其制备方法，属于生物技术领域。该单链抗体的重链可变区基因序列如SEQ ID NO.1所示，轻链可变区基因序列如SEQ ID NO.2所示；其还包括猪抗体恒定区Fc段基因序...
- 杨国庆刘慧敏常洪涛宋晓峰
- 文献传递
- 高G-C含量突变型Foxo1转基因动物基因型鉴定PCR方法的建立被引量：2
- 2017年
- 为解决因目的基因G-C(鸟嘌呤-胞嘧啶碱基对)含量过高导致的目的基因扩增困难,以及操作过程中多环节引起的DNA污染导致的假阳性问题.本研究以突变型Foxo1(Forkhead转录因子1)转基因小鼠作为对象,就高G-C含量转基因的PCR方法和多个环节避免DNA污染进行了探索,结果显示,实验中消除了PCR的假阴性和假阳性现象,得到了准确的突变型Foxo1转基因小鼠的基因型鉴定结果.
- 张赟周国丽杨冉刘慧敏杨国庆
- 关键词：基因型鉴定转基因小鼠
- 抑制伪狂犬病病毒复制的宿主蛋白的筛选与鉴定被引量：1
- 2023年
- 本试验旨在利用TMT蛋白组学分析并筛选出抑制伪狂犬病病毒(pseudorabies virus, PRV)复制的关键宿主蛋白。前期通过TMT定量蛋白组学技术筛选出241个差异蛋白,Western blot和RT-qPCR验证4个差异表达的蛋白,结果与蛋白组学结果一致,表明蛋白组学结果真实可信。通过构建4个差异表达蛋白的真核表达载体,Western blot、RT-qPCR、病毒噬斑结果显示这4个宿主蛋白均可抑制PRV的复制;然后通过双荧光素报告基因检测IFN-β启动子活性,结果显示,MCCC1、STRAP促进IFN-β启动子活性效果更为显著;针对MCCC1和STRAP设计siRNA,Western blot和病毒噬斑结果显示,敲低STRAP显著促进PRV的复制。本试验最终筛选出显著影响PRV复制的宿主蛋白STRAP,为研究PRV与宿主互作的分子机制奠定基础。
- 何文峰李琛常洪涛李隆熙陈静杨国庆刘慧敏
- 关键词：蛋白组学伪狂犬病病毒差异蛋白STRAP
- IBV肾型毒株与呼吸型疫苗株鉴别方法的建立与应用被引量：3
- 2011年
- 【目的】建立基于鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1基因的反转录-复合PCR方法,为IBV流行毒株和呼吸型疫苗株的分型鉴定提供技术支持。【方法】根据IBVN基因序列设计合成1对特异性通用引物,建立IBV的分子生物学检测方法,用以对IBV进行检测。通过对GenBank上公布的IBVS1基因全序列的分析比对,找出呼吸型疫苗株和地方肾型流行毒株相对保守的差异序列,设计合成2对引物,建立可以对这2类IBV毒株进行鉴别的反转录-复合PCR方法,同时对该方法的敏感性和重复性进行检测,并对该方法进行了实际应用。【结果】建立了区别IBV肾型毒株和呼吸型毒株的分型方法,该方法敏感性好,能检出经106稀释后的基因组RNA,且具有可重复性;临床应用显示,该方法对呼吸型毒株和近年来的地方肾型分离株具有较好的分型效果,而对较早时期的肾型分离株(YI株和澳大利亚T株)的扩增结果为阴性;经鉴定,近年来感染鸡群并引起高死亡率的分离毒株主要为肾型IBV。【结论】建立了区别IBV肾型毒株和呼吸型毒株的分型方法,该方法特异性强、敏感性高、重复性好,能将我国地方流行的肾型IBV毒株与呼吸型疫苗株完全区分开来。
- 徐雪高冬生王川庆陈陆杨霞皇甫和平刘慧敏郑鹿平杨猛张金来李昆明张九洲
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒N基因S1基因
- 杭州市人感染H7N9禽流感病原生态学和早期预警技术研究
- 丁华谢立潘劲草孙昼黄春萍杨旭辉王婧吴彦考庆君任晓宾黄仁杰温圆圆王兵于新芬何宏轩王承民罗静王玉军黄柏顺刘慧敏苏文
- 该研究针对杭州市人感染H7N9流感病毒病例集中暴发的现状，利用病原生态学视角和手段，监测病例集中周边地区的人、家禽及野生鸟类携带和感染H7N9流感病毒的情况，分析H7N9流感病毒的进化、变异及重组特点，进行H7N9流感病...
- 关键词：
- 关键词：禽流感疫情病原生态学诊断试剂盒
- SPF蛋鸡人工感染鸡杆菌的病理形态学观察被引量：4
- 2010年
- 采用鸡杆菌自然病例分离纯化的鸡杆菌人工感染开产前(105日龄)和开产后(163日龄)的SPF蛋鸡,运用组织学的方法对鸡杆菌自然病例和试验病例进行比较病理学观察。结果表明,自然病例和试验病例均可引起蛋鸡产蛋高峰推迟,产蛋量下降,且多产畸形蛋;病变主要在呼吸道和生殖道,主要表现为呼吸道和生殖道黏膜层严重充血、水肿、浆液性及炎性渗出等反应。但是试验病例未出现自然病例中常见的腹膜炎和输卵管炎症状。输卵管的病变主要在膨大部和子宫部,这种特征性病变可作为该病病理诊断的重要指征之一。这表明鸡杆菌单因子感染可引起SPF开产蛋鸡生产性能明显降低以及呼吸道和生殖道的病理变化。
- 刘慧敏陈陆杨霞常洪涛郑鹿平王永生高冬生王珊王川庆
- 关键词：病理学输卵管
- Foxo1突变体转基因,ob/ob小鼠建立与表型分析
- 2019年
- Foxo1是瘦素作用的负调控因子,实验室前期工作发现,其突变体Foxo1ΔDBD可导致转基因小鼠体重降低等表现型,本实验旨在研究转基因小鼠此表型与瘦素作用的关系.首先采用ALZET■渗透泵的方法对成年雄性的具有瘦素基因缺陷(ob/ob)小鼠进行10 d的瘦素处理,使其获得生育能力,然后采用动物杂交的方法制备双基因改造鼠,即ob/ob基因遗传背景的Foxo1ΔDBD转基因小鼠(Foxo1ΔDBD/+,ob/ob).经PCR扩增的方法进行基因型鉴定后,对双基因改造鼠的体重、体温等表型进行分析.结果显示:①植入含瘦素溶液的ALZET■渗透泵10 d后的4只雄性ob/ob小鼠全部获得了生育能力.②成功制备了46只双基因改造鼠,39只ob/ob小鼠等.③表型分析结果显示,无ob/ob遗传背景的转基因Foxo1ΔDBD小鼠(Foxo1ΔDBD/+)与野生型小鼠相比,体重显著性降低(P<0.05),棕色脂肪内的UCP1转录水平显著升高(P<0.05);而双基因改造鼠和ob/ob小鼠相比,体重、体温、空腹血糖和采食量均无显著性差异(P>0.05),且UCP1转录水平上的表达也无显著性差异(P>0.05).本实验成功制备了双基因改造鼠,并进行了表型分析,结果表明Foxo1ΔDBD转基因小鼠的体重降低和棕色脂肪UCP1转录升高等表现依赖瘦素的作用。
- 路万平李浩刘慧敏肖传斌杨国庆
- 关键词：转基因小鼠瘦素表型分析
- 鸡卡氏杆菌的PCR检测及自然病例的组织病理学观察被引量：6
- 2010年
- 为研究鸡卡氏杆菌引起输卵管囊肿的病理学变化,对9例自然感染病例进行症状观察,病理剖检,并采集气管、肺脏、输卵管和卵巢组织,从组织中提取基因组DNA,采用卡氏杆菌属特异性引物,用PCR方法成功扩增出卡氏杆菌目的基因;经PCR鉴定的卡氏杆菌阳性病料经甲醛固定,梯度乙醇脱水,石蜡切片,HE染色,光镜观察。结果表明:呼吸道的病变主要在黏膜层,黏膜上皮细胞脱落,固有层内毛细血管充血,炎性细胞浸润;输卵管主要表现在膨大和子宫的黏膜层有大量炎性细胞浸润,且黏膜上皮分泌细胞的细胞核破裂。输卵管的病变可作为该病病理诊断的重要指征之一,为阐明该病的输卵管特征性病理变化及进一步探讨其发生机制奠定了基础。
- 刘慧敏王川庆陈陆杨霞郑鹿平
- 关键词：卡氏杆菌输卵管囊肿组织病理学
- 抗猪流行性腹泻病毒纳米单链抗体CNC-CBD-scFv的制备及鉴定被引量：3
- 2019年
- 为防治猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV),本文制备纳米化抗PEDV单链抗体(singlechain fragment,scFv)并验证其生物学特性。通过PCR方法扩增含有纤维素结合结构域(cellulose binding domain,CBD)的单链抗体基因CBD-scFv,构建抗PEDV的原核重组表达载体pET19b-CBD-scFv,鉴定正确后进行蛋白表达与鉴定。经硫酸水解法制备纳米纤维素(cellulose nanocrystal,CNC)后,将纯化复性后的CBD-scFv蛋白与CNC孵育结合得到纳米抗体CNC-CBD-scFv,通过SDS-PAGE和透射电镜鉴定复合物的结合效果。SDS-PAGE与Westernblot结果表明抗体蛋白CBD-scFv正确表达;制备的纳米纤维素粒度均达到纳米材料级别;CNC与CBD-scFv结合后SDS-PAGE与透射电镜结果说明CNC与CBD-scFv在室温条件下可高效结合。本试验在高效表达合成复合纳米抗体材料的同时为PEDV的防治及应用奠定了一定的试验基础。
- 刘慧敏李浩朱文娇常琛路万平杨国庆
- 关键词：猪流行性腹泻病毒纳米纤维素
