何国平
- 作品数：25 被引量：75H指数：5
- 供职机构：四川大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划四川省教育厅资助科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- CYP7A1基因-204位点A/C变异对启动子活性的影响(英文)被引量：6
- 2006年
- CYP7A1(cholesterol7α-hydroxylase)在胆固醇向胆汁酸代谢途径中起着至关重要的作用.为研究该基因启动子区-204位点A/C多态性是否影响基因表达,利用荧光素酶作为报告基因,将含有A或C等位基因的启动子区片段分别正向和反向插入不含启动子的pGL3-basic质粒载体中,再以重组体转染4种细胞株,采用双荧光素酶报告基因检测系统测定酶活性并进行比较.实验结果表明,2种基因型的正向序列启动子活性均高于相应的反向序列,含有A等位基因的启动子片段活性比含有C等位基因的片段低约1/3.TRANSFAC数据库分析显示,当-204位点等位基因为C时,可能存在1个Zic3结合位点.研究结果提示,CYP7A1基因启动子区-204位点A/C变异可减少启动子活性从而影响基因表达,其原因可能为1个潜在的Zic3结合位点的丧失.
- 陈玉娟张思仲肖翠英陶大昌何国平王英成刘运强马用信
- 关键词：CYP7A1胆固醇代谢单核苷酸多态性转录抑制
- 乳腺肿瘤端粒酶活性表达及其与病理学指标的相关性研究
- 2002年
- 目的 探讨乳腺肿瘤中端粒酶活性表达及其与病理学指标相关性 .方法 运用银染端粒重复序列扩增法 (SS TRAP)检测 5 2例新鲜乳腺癌及其癌旁组织 ,其中有 32例为乳腺良性病变和 14例为正常乳腺组织中端粒酶的活性表达 .结果 乳腺癌组端粒酶阳性表达率为 90 .38%;乳腺癌旁、乳腺良性病变及正常乳腺组分别为 2 8.85 %(15 / 5 2 ) ,31.2 5 %(10 / 32 )和 0 (0 / 14) ,与乳腺癌组比较 ,3者均具有高度显著性差异 (P <0 .0 1) .乳腺癌组织中端粒酶表达与病理类型、临床分期、肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移状况等指标明显相关 (P <0 .0 5 ) ,而与患者病程、年龄等因素无关(P >0 .0 5 ) .其中 ,中晚期浸润性癌的端粒酶阳性率比早期癌高 (P <0 .0 5 ) ,Ⅱ期 ,Ⅲ期 ,Ⅳ期与Ⅰ期、直径大于 2cm与小于 2cm、中低分化与高分化及淋巴结转移组 (10 0 %)与未转移组 (72 .2 2 %)间比较 ,前者端粒酶阳性率均高于后者 ,均有显著性差异 (P <0 .0 5 ) .结论 端粒酶的激活可能发生在乳腺癌的早期阶段 ,并在其演进过程中起重要作用 .端粒酶有望成为乳腺肿瘤早期诊断和预后判断的特异性指标 .
- 何国平黄燕税青林余红张莉娟
- 关键词：乳腺肿瘤端粒酶端粒酶活性
- 脂质体介导c-myc反义寡核苷酸对乳腺癌MCF-7细胞生物学行为的影响被引量：4
- 2006年
- 目的研究c-myc反义寡核苷酸(ASODN)经脂质体LipfectAMINETM(LR)介导转染对MCF-7细胞中c-myc蛋白表达及细胞增殖、凋亡的影响。方法用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)评价脂质体介导c-myc ASODN对细胞增殖的影响;免疫细胞化学ABC方法检测转染前后c-myc蛋白表达;流式细胞仪(FCM)定量分析细胞凋亡。结果ASODN/LR转染与正义、错义寡核苷酸相比,显著抑制MCF-7细胞增殖(P<0.01)。FCM分析结果显示,转染后可见明显细胞凋亡峰,72h相点细胞凋亡率达(28.76±2.09)%。免疫细胞化学显示c-myc蛋白水平明显降低,阳性表达率为(21.40±1.16)%。结论LR介导c-myc ASODN能明显抑制MCF-7细胞增殖、诱导细胞凋亡和下调c-myc蛋白水平。
- 张莉娟税青林彭春何国平赵小平马莉
- 关键词：脂质体
- RNA干扰分子机制研究进展被引量：5
- 2004年
- RNA干扰 (RNA interference,RNAi)即双链 RNA(double- stranded RNA,ds RNA)介导的同源m RNA特异性降解过程。作为一种简单有效的影响基因表达和一定程度上替代基因敲除的遗传学工具 ,RNAi已在秀丽新小杆线虫、黑腹果蝇、拟南芥、红色面包霉菌等多种模式生物体中得到广泛证实。同时 ,RNAi的分子机制的研究也不断取得进展 ,包括对基因转录后水平、翻译水平、基因组甲基化及沉默信号的传递等层次的研究。清晰地阐明 RNAi作用机理 ,将为大规模的基因系统筛查、新基因的发现、人类肿瘤及难治性疾病的基因治疗提供重要的理论依据和有力的工具。
- 何国平张思仲
- 关键词：RNA干扰分子机制转录后基因沉默
- ZNF463/荧光蛋白融合基因表达载体的构建及其在Cos-7细胞中的表达与定位
- 2005年
- 目的观察人类无精症相关基因ZNF463在Cos-7细胞中的蛋白质表达及定位。方法用RT-PCR法从正常人睾丸组织中扩增得到人ZNF463基因的翻译区全长cDNA,并定向克隆到真核表达载体pEGFP-C1质粒中,构建了ZNF463-GFP融合基因表达载体。然后以脂质体介导转入Cos-7细胞中,荧光显微镜下观察。结果在转染重组真核表达载体pEGFP-ZNF463的Cos-7细胞中,荧光主要集中在细胞核内,而在转染空白载体pEGFP-C1的细胞中,荧光布满整个细胞。结论表明转染的Cos-7细胞能高效表达人ZNF463蛋白,ZNF463基因表达的蛋白定位于细胞核内,与其所属家族成员作为转录因子发挥作用的特征相符。
- 陈玉娟肖翠英凌波陶大昌何国平马用信孙岩
- 关键词：绿色荧光蛋白基因表达细胞定位
- 乳腺癌中端粒酶活性半定量及其与病理学指标的关系被引量：6
- 2003年
- 目的 探讨乳腺癌中端粒酶 (TLMA)活性表达及其与病理学指标的关系。方法 运用银染端粒重复序列扩增法 (SS TRAP)检测了 5 2例乳腺癌组织中TLMA活性 ,并与癌旁、良性及正常乳腺组织进行对照 ,其结果予以半定量。结果 乳腺癌组TLMA阳性表达率为 90 .3 8% ,明显高于癌旁、良性及正常组 ( 2 8.85 %、3 1.2 5 %、0 ,P均 <0 .0 1)。Radit分析结果显示 ,乳腺癌中TL MA的表达与病理类型、临床分期、肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移状况明显相关 (P <0 .0 5 ) ,而与患者病程、年龄因素无关 (P >0 .0 5 )。结论 半定量SS TRAP法是一种简便易行、敏感特异的TLMA活性检测方法 ;TLMA的激活可能发生在乳腺癌的早期阶段 ,并在其发生发展过程中起重要作用。
- 何国平税青林张莉娟黄燕余红
- 关键词：乳腺癌端粒酶活性病理学指标
- 乳腺癌中端粒酶活性的研究
- 目的:通过检测端粒酶活性,以探讨乳腺癌中酶活性表达及其与病理学指标的相关性。方法:运用银染端粒重复序列扩增法(SS-TRAP)检测52例新鲜乳腺癌及其癌旁组织,32例乳腺良性病变及14例正常乳腺组织中端粒酶的活性表达,并...
- 何国平税青林张思仲张莉娟黄燕马莉余红
- 文献传递
- RNA干扰技术用于哺乳动物细胞中报告基因、端粒酶相关基因的表达抑制研究
- 本研究选用半衰期仅1h的非稳定型载体pd1EGFP、表Luciferase的pGL3-control及表达红色荧光蛋白的pdsRed2为靶载体，构建了一系列pAVU6+27-shRNA表达载体。通过设计一系列RNAi实验...
- 何国平
- 关键词：RNA干扰报告基因短发夹RNA小干扰RNA肿瘤细胞株
- 端粒酶活性调节机制与端粒酶抑制剂研究进展
- 2002年
- 税青林何国平
- 关键词：端粒酶活性端粒酶抑制剂分子生物学端粒
- 短发夹RNA介导RNA干扰的时间和剂量效应研究被引量：20
- 2005年
- 用RNA干扰(RNAinterference,RNAi)技术抑制哺乳动物细胞中外源报告基因的表达,以探讨该过程中RNAi作用的剂量和时间效应.应用Lipofectamine 2000将外源报告基因的表达载体与编码短发夹RNA(shorthairpin RNA,shRNA)的质粒共转染HEK293H细胞,观察shRNA载体对报告基因的抑制效应.转染后,shRNAs的瞬时表达可特异地抑制细胞内报告基因的表达.在共转染后12,24,48,60,72,96 h时检测EGFP(enhancedgreenfluorescentprotein,EGFP)基因mRNA及蛋白质表达水平,结果显示,EGFPmRNA及蛋白质表达在12 h时略有降低,24～48 h时表达逐渐降低,48～72 h时降低最明显,其后EGFP表达水平逐渐恢复.提示该过程中RNAi效应呈现由弱到强、又由强到弱的逐渐消逝趋势.共转染一系列剂量比例的EGFP干扰载体与靶载体的结果表明,在一定剂量范围内,RNA干扰载体所介导的抑制效应与干扰载体剂量大小有关,当其剂量进一步加大足以抑制外源基因表达时,抑制效应则维持在一'平台期'.此外,通过RNAi抑制HeLa细胞、HEK293细胞中荧光素酶基因的表达,荧光素酶活性变化也表现出上述类似的效应.这些结果表明,在体外哺乳动物细胞中,基于表达载体的RNAi作用呈现剂量和时间依赖性效应.这为基于载体表达的RNAi技术应用研究提供了一定的理论参考及依据.
- 何国平张思仲王英成肖翠英马用信许文明丁兰陶大昌孙岩陈玉娟
- 关键词：RNA干扰短发夹RNA报告基因共转染
