丁芳
- 作品数：24 被引量：103H指数：7
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家攀登计划国家自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 转染人肿瘤坏死因子-α、白介素-2基因对肺癌细胞耐药基因MDR1、LRP表达的影响被引量：1
- 2004年
- 目的 研究转染人体肿瘤坏死因子 α(huTNF α)、白介素 2 (hIL 2 )基因对肺癌细胞耐药基因MDR1、LRP表达的影响 ,探讨基因治疗逆转肺癌多药耐药的可行性。方法 通过阳离子脂质体将克隆的huTNF α和hIL 2基因导入肺癌细胞系A5 49、GLC 82、H44 6、H460 ,经筛选阳性单克隆 ,用半定量RT PCR方法检测转染目的基因前后肺癌细胞系MDR1、LRP基因在mRNA水平的表达情况。结果 MDR1在A5 49、GLC 82、H44 6、H460 ,LRP在A5 49、GLC 82、H 460中均呈阳性表达 ;转染huTNF α目的基因后各肺癌细胞系MDR1、LRP基因的表达无影响 ,而转染hIL 2目的基因能够明显抑制A5 49、H44 6、H 460细胞系MDR1的表达。结论 MDR1、LRP基因在肺癌细胞系中的阳性表达与肺癌的固有耐药性有关 ;huTNF α、hIL 2目的基因能够在被转染细胞中获得表达 ,而且转染hIL 2目的基因能够明显抑制MDR1在A5 49、H44 6、H460的表达。该结果不仅为探讨肺癌多药耐药性的病理机制提供了一个新的线索 ,而且为基因治疗逆转肺癌的多药耐药性提供了一个新的实验依据。
- 苏雷李泽坚丁芳张恒张志庸戈烽骆爱萍王秀琴刘芝华吴旻
- 关键词：白介素-2肺癌耐药基因LRP
- 抑制消减杂交及反Northern结合高通量筛选食管癌中差异表达基因被引量：9
- 2001年
- 为了解食管癌发生的分子遗传学机理, 分离食管癌中差异表达的基因, 应用抑制消减杂交(SSH)并与PCR合成双链cDNA, 反Northern筛选SSH克隆相结合, 成功地自微克级总RNA中分离出8个食管癌中差异表达的基因, 其中已知基因5个、新基因片段3个, 表达下调的6个、表达上调的2个, 中-高丰度基因6个、低丰度基因2个. 结果显示多个基因的表达改变参与了食管癌的发生发展, 其中新发现的lipocortinⅠ, cystatin A, cystatin B, cytokeratin等13个可能与食管癌的去分化、恶性增殖转化有关. SSH与PCR合成双链cDNA, 反Northern筛选SSH克隆相结合, 是一种高特异性、高通量的自微量 RNA中检出差异表达基因的有效方法.
- 周津刘芝华王秀琴丁芳张春林毛学正韩丽芳吴旻
- 关键词：食管癌分子遗传学差异表达基因抑制消减杂交
- IL-1受体拮抗物基因克隆对人食管癌细胞株生长的影响
- 2001年
- 目的:构建白细胞介素1受体拮抗物interleukin1receptorantagonistIL1RA基因的真核表达载体,并转染人食管癌细胞株,以探讨IL1RA与食管癌发生的关系。方法:利用PCR方法从正常食管组织cDNA中扩增IL1RA,将IL1RA重组到真核表达载体pcDNA3.1中,构建IL1RA的真核表达载体pcDNA3.1IL1RA。然后将重组子导入人食管癌细胞株EC9706中,用RTPCR及Southern杂交的方法,筛选鉴定转染细胞,获得阳性克隆。并采用细胞计数法和流式细胞术(FCM)分析IL1RA对EC9706细胞生长的影响。结果:RTPCR及Southern杂交结果显示转染后的细胞克隆均呈现IL1RA高表达,与对照组EC9706细胞和带有pcDNA3.1空载体的细胞相比,转染有pcDNA3.1IL1RA的EC9706细胞由于IL1RA的表达,细胞增殖速度有不同程度的下降;FCM结果显示IL1RA不能诱导EC9706细胞的凋亡,对细胞生长的影响亦呈现不一致性。结论:提示IL1RA对食管癌的发生可能只起辅助作用。
- 徐琪刘芝华丁芳王秀琴吴旻
- 关键词：IL-1RA食管肿瘤基因克隆基因转染
- 全反式维甲酸激活人肺腺癌细胞系GLC-82中-PIG-B高度同源基因—PIGB1被引量：1
- 1999年
- 目的 :探讨全反式维甲酸 (all transretinoicacid ,ATRA)诱导肿瘤细胞分化的分子机制。方法 :采用Southern和Northern杂交方法对本室用ATRA诱导人肺腺癌细胞GLC 82 ,经消减杂交所构建的cDNA消减文库进一步鉴定 ;序列分析后用RT PCR方法研究胎儿组织中的表达情况。结果 :分离到一为ATRA激活表达的基因—PIGB1,该基因与人PIG B (phosphatidylinositolglycanofcomplementationclassB)基因高度同源 ,在多种胎儿组织中均有表达。结论
- 王雪皎王秀琴张睿丁芳郭明洲刘芝华于振涛吴旻
- 关键词：全反式维甲酸肺腺癌
- 肺癌及配对癌旁组织中MRP8蛋白的表达及其临床意义被引量：1
- 2007年
- 目的:研究MRP8蛋白与肺癌分化转移的关系。方法:采用免疫组化法和Western蛋白印迹法,观察肺癌及配对癌旁组织中MRP8蛋白的表达,并结合临床资料分析其意义。结果:在54.9%(45/82)的肺癌石蜡标本中有MRP8蛋白阳性表达,且阳性表达与细胞分化、淋巴结转移、临床分期有关,配对癌旁正常支气管上皮细胞中无阳性表达;Western蛋白印迹显示在65.5%(19/29)肺癌组织中有MRP8蛋白高表达。结论:MRP8蛋白与肺癌的演进有密切关系。
- 矫文捷吴永国丁芳王天佑孔建平刘芝华
- 关键词：肺肿瘤分化
- 胃肠富集Kruppel样因子在食管癌的表达被引量：3
- 2002年
- 胃肠富集Kruppel样因子 (GKLF)是一个新近发现的真核锌指蛋白 ,它在胃肠道表达丰富 ,其表达与细胞生长停滞有关联 .用半定量的RT PCR的方法 ,比较了食管鳞癌病人癌组织和正常粘膜的GKLF表达 .17例食管鳞癌病人均检测到GKLFmRNA的表达 ,其中 14例癌组织中GKLF表达比临近正常组织减少 .人原代培养成纤维细胞中GKLF的去血清诱导作用明显 ,而在一食管鳞癌细胞系EC970 6中该诱导作用减弱 .对EC970 6细胞GKLFcDNA的序列分析表明 ,该基因的cDNA编码区未发生突变 .结果证实 ,食管鳞癌中GKLF表达下调 .
- 王楠刘芝华丁芳王秀琴周传农王明荣吴旻
- 关键词：食管癌RT-PCR基因表达
- 全反式维甲酸激活的人肺腺癌细胞基因的筛选被引量：1
- 1999年
- 目的：筛选人肺腺癌细胞中全反式维甲酸（ａｌｔｒａｎｓ－ｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄ，ＡＴＲＡ）激活表达的基因。方法：以我室构建的ＡＴＲＡ诱导前后人肺腺癌细胞系ＧＬＣ－８２的ｃＤＮＡ削减文库各克隆作为探针，与ＡＴＲＡ处理前后ＧＬＣ－８２的ｃＤＮＡ文库Ｌｉｂ．ＧＬＣ－８２，Ｌｉｂ，ＧＬＣ－８２．ＲＡ１，Ｌｉｂ．ＧＬＣ－８２．ＲＡ４进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，以筛选在ＡＴＲＡ处理后ＧＬＣ－８２ｃＤＮＡ文库中特异存在的ｃＤＮＡ片段。以筛选出的特异存在于ＡＴＲＡ处理后ＧＬＣ－８２ｃＤＮＡ文库中的ｃＤＮＡ片段作为探针，与胎儿各组织总ＲＮＡ进行Ｎｏｒｔｈｅｒ杂交，以检测其在胎儿各组织中的表达情况。结果：其中一克隆ＲＡ９７特异存在于ＡＴＲＡ诱导１天ｃＤＮＡ文库，核酸序列同源分析表明，ＲＡ９７与人２２号染色体长臂１３区－ＰＡＣ克隆ＰＡＣ４０８Ｎ２３同源性很强，其中一段（约６００ｂｐ）与ＰＡＣ４０８Ｎ２３几乎完全同源；此片段与可能的肿瘤抑制基因ＳＮＣ６同源性也相当强，其中一段（约３５０ｂｐ）与ＳＮＣ６几乎完全同源。ＲＡ９７在多种胎儿组织中均有表达，转录本有两个，分别为４．３ｋｂ和４．８ｋｂ。结论：获得一特异存在与ＡＴＲＡ诱导１天ＧＬ?
- 王雪皎张睿王秀琴郭明洲郭明洲蔡岩丁芳王明荣黎伯铨
- 关键词：维甲酸CDNA腺癌基因筛选
- 肺癌组织频繁出现FHIT基因转录本的缺失被引量：8
- 1999年
- 目的研究肺癌组织中脆性组氨酸三位体（ＦＨＩＴ）基因的改变。方法采用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）和逆转录聚合酶链反应单链构象多态性（ＲＴＰＣＲＳＳＣＰ）方法分析４７例肺癌组织和其中１６例相应的转移性肺门淋巴结。结果６８％（３２／４７）肺癌原发灶（包括２例肺鳞状细胞原位癌）和９４％（１５／１６）转移性肺门淋巴结出现ＦＨＩＴ转录本缺失，二者统计学差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。ＦＨＩＴ基因转录本缺失主要发生于编码区。ＲＴＰＣＲＳＳＣＰ分析未发现突变。结论（１）在肺癌组织中ＦＨＩＴ基因转录本缺失是频发事件，且可能为早期事件；（２）ＦＨＩＴ基因突变可能是少见事件；（３）转移性肺门淋巴结ＦＨＩＴ基因转录本缺失频率与肺癌原发灶相比差异有显著性。
- 王兴元孙燕李卫东李卫东王秀琴丁芳
- 关键词：肺肿瘤FHIT基因基因突变
- 抑癌基因DCC在肺癌中的表达及杂合性丢失被引量：2
- 1995年
- 为探讨结肠癌缺失基因（ＤＣＣ）与肺癌发病的关系，利用半定量的逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）结合Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析了７例肺癌患者（４例鳞癌和３例腺癌）癌组织及正常肺组织中ＤＣＣ基因ｍＲＮＡ的表达，发现４例肿瘤组织中ＤＣＣ基因表达明显低于对照肺组织。７例标本分析结果表明肺癌组织中ＤＣＣ基因的表达水平为正常肺组织的４５％左右。对上述７例及另外８例标本的两个多态位点进行ＰＣＲ杂合性丢失（ＬＯＨ）分析，信息性个体占９例，其中５例表现杂合性丢失：２例在ＭｓｐＩ限制性长度多态片段（ＲＦＬＦ），３例为可变数量串连重复序列（ＶＮＴＲ）。本结果证明在肺癌组织中存在ＤＣＣ基因表达低下及ＬＯＨ改变，提示其可能为肺癌发病的易感基因之一。
- 张金三丁芳王秀琴宋晓明吴
- 关键词：肺肿瘤基因聚合酶链反应病因
- CalgranulinB蛋白在配对肺癌组织中的表达及其意义
- 2006年
- 目的研究CalgranulinB蛋白与肺癌分化转移的关系。方法采用免疫组化法和Western蛋白印迹等方法,分别检测新鲜肺癌组织及肺癌标本切片中CalgranulinB蛋白的表达,并结合临床资料分析其意义。结果在58.5%(48/82)的肺癌石蜡标本中有CalgranulinB蛋白阳性表达,且阳性表达与细胞分化、淋巴结转移、临床分期有关;Western蛋白印迹显示在62.1%(18/29)肺癌组织中有CalgranulinB蛋白高表达。结论Cal-granulinB蛋白与肺癌的演进有密切关系。
- 矫文捷王天佑刘桐林丁芳孔建平刘芝华
- 关键词：肺癌免疫组织化学
