黄坚
- 作品数：13 被引量：42H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：北京市科技计划项目国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术更多>>
- 利用寡聚核苷酸芯片对急性白血病进行分类预测及初步分型
- ＜正＞ 目的ALL与AML的鉴别诊断是化疗成功的关键。虽然目前基于细胞形态学、组织化学、免疫表型以及细胞遗传学分析的白血病诊断分型方法业已建立,但还远不足以全面反映临床白血病各亚型之间的异质性。基因组分析已成为目前白血病...
- 孙薏董陆佳李伍举田方王升启贾治林黄坚陈泽建
- 文献传递
- 用寡核苷酸芯片研究淋巴瘤细胞系细胞与正常淋巴细胞间差异表达的基因
- 2004年
- 陈喜林张伟京董陆佳田芳王升启黄坚李伍举苏航孙薏李莎
- 关键词：寡核苷酸芯片淋巴瘤肿瘤细胞差异表达基因细胞培养
- 肿瘤相关基因表达检测寡核苷酸芯片的制备及其初步应用被引量：3
- 2003年
- 为研制肿瘤相关寡核苷酸芯片 ,并实现其在抗肿瘤反义核酸“癌泰得”作用机理研究方面的初步应用 ,制备了包含近 450种肿瘤相关基因特异寡核苷酸探针的寡核苷酸芯片 ,建立了相应的质控标准 .“癌泰得”用脂质体转染HepG2肿瘤细胞 ,提取细胞总RNA反转录并荧光标记cDNA ,用制备的寡核苷酸芯片检测肝癌细胞HepG2的肿瘤相关基因表达水平 ,用软件分析获得其差异基因表达谱 .0 4μmol/L的反义核酸“癌泰得”作用于HepG2细胞 15h后 ,MDNCF、DHS等基因mRNA表达下调 ,MUC2、MPP11、LAT、HRIF B、JNK3A1等mRNA基因表达上调 ,初步检测到了“癌泰得”的抗肿瘤作用可能的相关基因 ,为进一步的分子作用机理的探讨奠定基础 .结果表明 ,制备的肿瘤相关芯片敏感度高、特异性高、重复性均较好 ,可用于检测肿瘤相关基因的表达谱 。
- 黄坚杜清友丁雨王升启
- 关键词：肿瘤相关基因寡核苷酸芯片癌泰得表达谱
- 应用寡聚核苷酸芯片检测白血病与其同胞供者的白血病基因表达差异被引量：2
- 2004年
- 为了应用寡聚核苷酸基因表达谱芯片研究 9对白血病患者 /同胞供受者对之间的基因表达谱差异以识别主要的疾病相关基因 ,将 16 3条白血病 /肿瘤发病相关基因组群列入芯片设计 ,合成寡核苷酸探针 ,用点样仪点片制成基因芯片。提取病初白血病患者及其供者的骨髓 /外周血标本或其相对应的健康同胞供者经G CSF动员后并经CS 30 0 0细胞分离机采集的浓集的 9份外周血造血干细胞的总RNA ;分别逆转录并进行寡核苷酸探针杂交。结果表明 :与其相应的正常供者配对比较 ,发现 4例ALL患者中存在 6条显著差异表达基因 ,其中上调表达基因 5条(RIZ ,STK 1,T cellleukemia/lymphoma 1A ,Cbp/ p30 0 ,Op18) ,下调表达 1条 (hematopoieticproteoglycancorepro tein) ;5例AML M4和AML M5患者中亦存在 7条显著差异表达基因 ,其中上调表达 6条 (STAT5B ,ligandp6 2fortheLckSH2 ,CST3,LTC4S ,myeloidleukemiafactor 2 ,epb72 ) ,下调表达 1条 (CCR5 )。结论 :选择有高度遗传关联的兄弟姐妹供受者对作为差异研究比照对象 ,利用寡聚核苷酸基因芯片技术进行疾病基因的筛查 ,筛查出了 13条主要异常基因 ;进一步确认了上述基因在白血病分子发病机制中的关键性作用。
- 孙薏董陆佳田方王升启贾治林黄坚陈泽建李伍举陈喜林朱平
- 关键词：白血病差异表达基因
- 基于生物芯片的分子诊断和筛查新技术及其应用研究
- 王升启张文文思远耿永尧陈苏红胡守旺黄坚伯晓晨陈立炎张敏丽张帆王辉
- 该项目对基于生物芯片的分子诊断关键技术及其应用进行了系统研究。建立了多标本芯片检测技术、可视化芯片检测系统、基因突变定量分析技术及基于表达谱的通路分析方法等四项生物芯片制备及分析关键技术；；率先建成了通过GMP认证的生物...
- 关键词：
- 关键词：分子诊断生物芯片病原微生物
- 流感病毒分子检测/诊断技术综述
- 本文简单说明了世界猪流感疫情的发生情况，阐述了猪流感病毒感染后的症状和危害，并分析了该病毒的结构，探讨了相关的临床或实验室诊断方法，如外周血、病毒分离、血清学诊断及基因芯片法等。
- 文思远黄坚陈苏红王升启
- 关键词：猪流感病毒分子检测实验室
- 文献传递
- SARS冠状病毒实时荧光RT-PCR定量检测被引量：8
- 2004年
- 为建立一种快速、准确、特异的SARS病毒RNA定量检测方法 ,根据复合探针荧光定量分析原理 ,对SARS病毒核酸进行实时荧光定量RT PCR检测 .借助计算机辅助 ,对SARS病毒基因靶序列以及检测引物和探针进行了优化筛选 ;利用体外转录SARS病毒RNA靶序列 ,对RT PCR反应的镁离子浓度参数进行了优化 ;比较Trizol法、磁珠法、Qiagen法、煮沸法等 4种方法提取RNA的检测效果 ,建立了样本处理方法 ;通过对构建的体外转录靶序列模型的检测 ,对本方法的灵敏度、特异性、定量线性关系、精确度等进行了评价 ,并通过对4 2例临床标本的检测对本方法的检测效果进行了评估 .通过克隆SARS病毒核酸靶序列并进行体外转录 ,获得了长度约 1 2kb的体外转录RNA靶序列 ;经优化 ,荧光RT PCR反应液中的Mg2 + 浓度以 4 0mmol/L为最好 ;RNA提取方法采用磁珠法效果较好 ;本方法的检测灵敏度最低可达 5个拷贝的体外转录RNA分子 ,特异性10 0 % ,Ct 值的CV值小于 5 % .对临床确诊的 4 2份SARS病人血清和漱口水标本的检测结果表明 ,该方法的检出率为 79% ,与荧光抗体检测法的符合率为 70 % .上述结果表明 ,该方法建立的荧光定量RT PCR技术能够快速准确、特异、敏感地对SARS病毒核酸进行定量分析 ,为临床SARS冠状病毒RNA的检测提供了新的 。
- 陈苏红张敏丽黄坚丁雨伯晓晨王升启
- 关键词：SARS冠状病毒荧光RT-PCR非典型性肺炎
- 分子诊断新技术的建立及其在重要病原微生物检测中的应用研究
- 王升启陈苏红伯晓晨张敏丽戚红卷刘志红刘琪琦黄坚
- 一、研究领域： 项目属于预防医学领域，适用于重要病原微生物的检测。 二、主要内容： 发明了两种分子检测新技术并用于11种重要病原微生物检测相关产品的研制。 三、技术创新点： 1.建立了“复合探针”实时荧光定量P...
- 关键词：
- 关键词：病原微生物PCR
- 电离辐射相关低密度寡核苷酸基因芯片的制备被引量：2
- 2006年
- 目的:构建一种适用于辐射研究领域的低密度寡核苷酸基因芯片.方法:根据以往的研究报告,筛选参与辐射生物效应的基因和相关基因,从GenBank获取mRNA序列,使用Mprobe软件设计特异的探针,构建低密度辐射相关的基因芯片.在不同辐射敏感性肺癌细胞系中对该芯片的灵敏度和特异性进行评价,并对一些差异表达基因进行RT-PCR验证,以确认芯片检测结果的可信性.结果:构建出了辐射相关的寡核苷酸基因芯片,该芯片共含有143个基因,即127个辐射相关基因和16个对照基因.在不同辐射敏感性的A549和NCI-H446细胞中,筛选出18个差异表达基因.经RT-PCR对4个基因的验证,结果与芯片资料较一致.结论:辐射相关低密度寡核苷酸基因芯片可以检测不同辐射敏感性肿瘤细胞的差异表达基因,为辐射领域的研究提供了一种技术平台.
- 郭万峰王升启黄坚郭国祯
- 关键词：基因芯片电离辐射肺癌肿瘤细胞系
- 辐射相关基因芯片的制备及其在肺癌细胞中的应用被引量：9
- 2005年
- 目的寻找参与肺癌细胞辐射抗性的基因。方法构建辐射相关的基因芯片,初步筛选出在不同辐射敏感性肺癌细胞系中差异表达的基因。为了评价芯片结果的可靠性,我们对一些差异表达基因进行了RTPCR验证。结果和辐射敏感的NCIH446细胞相比,辐射抗性的A549中有18个基因有明显的改变,8个基因是上调,10个基因是下调。在照射后6h和24h,A549细胞中分别有22个基因(19个基因上调,3个下调)和26个基因(8个上调,18个下调)的差异表达;NCIH446细胞中分别有17个基因(9个基因上调,8个下调)和18个基因(6个上调,12个下调)差异表达。从这些基因中,我们发现一些参与细胞增殖和抗凋亡的基因,在照射后的A549细胞中是增高的,而在NCIH446细胞中是降低的。另外一些参与DNA修复的基因,在A549中比在NCIH446细胞中有更高的表达。结论一些参与细胞DNA修复、细胞周期调控、细胞增殖和抗凋亡作用的基因可能有助于A549细胞辐射抗性的形成。
- 郭万峰林汝仙黄坚郭国祯王升启
- 关键词：基因芯片H446细胞辐射抗性细胞周期调控肺癌细胞系抗凋亡作用
