高凤山
- 作品数：130 被引量：381H指数：12
- 供职机构：大连大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省大学生创新创业训练计划项目辽宁省教育厅高校重点实验室项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学文化科学医药卫生更多>>
- 托佩克猪SLA-2基因克隆与表达被引量：5
- 2013年
- 为提高托佩克猪SLA-2-TPK基因胞外区在pET-21a的表达量,对其5′端进行密码子优化,并设计表达引物,PCR扩增SLA-2-TPK胞外区,然后克隆入pMD○R19-T Simple Vector,经酶切鉴定后连接至pET-21a载体,转化BL21(Rosseta)进行诱导表达,SDS-PAGE检测目的蛋白。PCR结果显示,SLA-2-TPKe大小约为850bp,并成功克隆入pMD○R19-T Simple Vector,双酶切后大小为834bp。酶切后的SLA-2-TPKe成功与pET-21a链接,重组菌经诱导后目的蛋白大小为30.9ku,与密码子优化前重组菌相比,目的蛋白相对表达含量提高约40%。研究证明,密码子优化可明显提高蛋白的表达量,为进行其他蛋白表达研究提供了参考。
- 刘腾飞冯磊田永发刘畅姜巍严婷婷高凤山
- 关键词：密码子优化
- 猪圆环病毒2型分子致病机理及相关疾病研究进展被引量：27
- 2012年
- 猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)有两个基因型,分别为PCV1和PCV2。PCV2有致病性,它可以引发多种相关的疾病(PCVAD),如断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)等。该病毒主要通过攻击猪的淋巴细胞,产生免疫抑制,诱发细胞凋亡,还可以和其他病毒协同感染,大大增加了动物的发病率及死亡率。文章对PCV2分子致病机理及引起的相关疾病和防治作一综述。
- 乔翠高凤山许崇波
- 关键词：PCV2细胞凋亡
- 烟台黑猪SLA-2基因真核表达载体的构建及表达
- 2021年
- 为构建烟台黑猪SLA-2基因(SLA-2-YT)的真核表达载体SLA-2-YT/pCDH并将其在真核细胞中表达,根据SLA-2-YT编码区基因序列设计1对引物,以SLA-2-YT/pMD18-T全基因克隆表达载体为模板进行PCR扩增获得SLA-2-YT编码区基因片段,在上下游引物的5'端分别添加限制性内切酶Xba I和Not I的酶切位点,将目的基因经pMD 19-T Simple Vector TA克隆后与pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro真核表达载体连接,获得的重组质粒转化至大肠杆菌Stbl 3感受态细胞,对扩大培养的单克隆菌株抽提质粒,使用双酶切和测序验证插入序列。对真核表达载体构建正确的菌株抽提无内毒素质粒,通过慢病毒包装和感染将质粒转染至sT2细胞,通过Western Blotting检测sT2细胞中SLA-2-YT基因的表达情况。结果显示,成功构建了SLA-2-YT/pCDH重组真核表达载体。重组质粒进行慢病毒包装和感染sT2细胞,经嘌呤霉素筛选后,成功获得阳性细胞克隆。Western Blotting检测显示SLA-2-YT/pCDH在sT2细胞中得到了优势表达,其融合蛋白的分子量大小为45 kD,与理论设计值相符。该实验成功构建了SLA-2-YT编码区基因的真核表达载体,并证实了SLA-2-YT编码区基因能够在sT2细胞中优势表达,为下一步开展SLA-2-YT递呈CTL表位的研究提供了材料。
- 胡晓王宝宝窦少华姜南付常振金行高凤山
- 关键词：真核表达载体转染
- 荷包猪SLA-DRB基因cDNA的克隆及分子进化特征分析被引量：2
- 2015年
- 旨在研究荷包猪SLA-DRB基因的分子特征,设计引物用RT-PCR扩增3头荷包猪DRB基因c DNA,并克隆至p MD18-T Vector,阳性克隆测序并做序列分析,分别进行同源性、分子进化及主要氨基酸变异位点分析。结果表明,成功从3头荷包猪中扩增得到SLA-DRB基因,分别命名为SLA-DRB-HB01-03,经序列测定后,证实c DNA全长为836 bp,其中1-801为ORF区,共编码266个氨基酸。同源性分析显示,SLA-DRB-HB与其他SLA-DRB等位基因的同源性介于90.3%-99.8%之间。分子进化分析表明,荷包猪SLA-DRB-HB独立分支,与其他等位基因相比较,进化更加原始。氨基酸变异位点和多态性分析结果显示,SLA-DRBHB本身存在一定的多态性。
- 姜平额尔敦木图高凤山
- 关键词：荷包猪SLA-DRB分子进化多态性
- 猪β2m四聚体前体链重组表达载体的构建和表达被引量：5
- 2013年
- 为构建猪β2m轻链四聚体前体链,通过PCR定点突变技术,将猪主要组织相容性复合体Ⅰ类分子轻链β2m羧基端69位苯丙氨酸(Phe)突变为半胱氨酸(Cys),然后将突变体基因插入到pET-28a载体,转化BL21细胞,经诱导后SDS-PAGE检测蛋白质表达情况。结果显示,β2m突变体基因全长297bp,编码98个氨基酸,其中羧基端69位Phe突变为Cys。突变体基因经诱导表达后进行SDS-PAGE检测,结果显示蛋白质表达大小为10.6ku。本研究构建了猪β2m轻链突变体基因重组表达载体,并成功表达了目的蛋白,为今后构建四聚体链奠定基础。
- 刘昌华刘筏张晶乔震高凤山
- 关键词：四聚体定点突变
- 一种稳定表达VP1融合EGFP的单克隆细胞株的制备方法
- 一种稳定表达VP1融合EGFP的单克隆细胞株的制备方法，属于疫苗技术领域。本发明解决技术问题的技术方案包括以下步骤：培养细胞PK15、G418的适用浓度应为500μg/mL、将LipofectamineTM2000与pE...
- 高凤山
- 文献传递
- 表位疫苗的设计及应用研究进展被引量：7
- 2012年
- 表位疫苗相对传统疫苗拥有较多优势,其最大的优点就是可以克服传统疫苗造成的毒力恢复或散毒的可能。另外表位疫苗本身无毒、稳定,符合未来疫苗发展的方向。表位疫苗的设计需要从表位的筛选、优化及表位的组合等多方面展开。现对表位疫苗的设计策略及应用作一介绍。
- 赵德冯磊张强郭建宏高凤山
- 关键词：表位疫苗抗原
- 一种O型口蹄疫CTL表位肽及筛选方法
- 本发明公开了一种O型口蹄疫CTL表位肽及其筛选方法和应用。所述CTL表位肽是由九个氨基酸残基组成，其氨基酸序列为：Ala-Thr-Arg-Val-Thr-Glu-Leu-Leu-Tyr。该表位肽能够与来源于不同品系猪的S...
- 高凤山
- 文献传递
- 猪主要组织相容性复合体研究进展被引量：12
- 2012年
- 主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)分子首先作为主要组织相容性抗原被发现,进而以此命名。随着其抗原结合分子及T细胞信使生物学功能本质的揭示,关于MHC结构与功能的研究就进入了一个崭新时代,并在这一领域中取得了许多可喜的成果。论述了近年来猪MHC(SLA)结构与功能方面的研究进展,包括SLA的分类及多态性、SLA分子结构特点、SLA分子功能及SLA分子相关领域的最新研究进展。
- 冯磊赵德高凤山
- 关键词：主要组织相容性复合体
- 重构猪SLA-I单链复合体及其口蹄疫病毒VP1蛋白限制性表位的筛选被引量：4
- 2007年
- 目前,没有研究猪SLA-I类复合体限制性表位的系统.为了构建猪的SLA-I类复合体,研究其相应重要病毒的限制性表位,亚克隆猪主要组织相容性复合体重链基因SLA-2胞外区和轻链基因β2m成熟肽区,利用一富含甘氨酸和丝氨酸的Linker(G4S)3连接两个基因,通过SOEPCR体外构建了猪可溶性的单链复合体SC-SLA-I[SLA-2-(G4S)3-β2m],计算机方法设计3类口蹄疫病毒VP1蛋白的T细胞表位,经化学合成,分别命名为PepⅠ(FMDV/VP126—34)、PepⅡ(FMDV/VP1157—165)和PepⅢ(FMDV/VP145—53),用以结合单链复合体蛋白SC-SLA-I.酸洗脱结合质谱法测定SC-SLA-I结合表位,同时设定非相关蛋白和多肽的对照试验.结果显示,Pep Ⅰ和Pep Ⅱ均能和SC-SLA-I结合,而Pep Ⅲ及非相关多肽不能结合,对照蛋白MBP的肽结合试验显示阴性.结果表明,多肽Pep Ⅰ和Pep Ⅱ属于SLA-I类限制性表位.
- 高凤山姜平方青美李云岗李新生王钦富迟彦夏春
- 关键词：T细胞表位口蹄疫病毒
