陈溥言
- 作品数：585 被引量：2,818H指数：27
- 供职机构：南京农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生化学工程更多>>
- 应用双重Real-time PCR同步定量检测食品中的副溶血性弧菌及金黄色葡萄球菌被引量：18
- 2006年
- 为同时测定食品中的副溶血性弧菌和金黄色葡萄球菌,建立了基于TaqMan探针的双重Real timePCR方法。针对副溶血性弧菌的gyrB基因序列和金黄色葡萄球菌coa基因序列分别设计引物和TaqMan探针,建立双重Real timePCR检测体系,制作校正曲线,同步定量检测副溶血性弧菌和金黄色葡萄球菌。建立的双重Real timePCR方法对2种细菌菌液的检测敏感度均低于10CFU PCR反应体系,相关系数均为1.00,整个试验可在2h内完成。建立的方法可用于食品中副溶血性弧菌和金黄色葡萄球菌的快速、同步、定量检测。
- 蒋鲁岩蔡潭溪邵景东徐邦兴陈溥言
- 关键词：聚合酶链反应TAQMAN
- 应用聚合酶链反应克隆马立克氏病病毒A抗原基因被引量：1
- 1993年
- 根据马立克氏病病毒(MDV)A抗原基因的头尾DNA序列,设计并人工合成了两套用于聚合酶链反应(PCR)的引物(PCR PⅠ和PCR PⅡ、PCR PⅡ和PCR PⅢ)。以pBSA2.2k为模板DNA进行体外聚合酶链反应,选择性地使两引物间DNA片段扩增。将扩增的DNA片段纯化、酶切后与pBS载体连接克隆,经酶切分析得到能分别适用于真核和原核表达系统的MDV A基因。然后将用于原核表达的A抗原基因分步克隆于M13mp18,分别得到M13A0.4、正反向M13A1.0克隆。用双脱氧法进行DNA序列分析,在1408bp处比Causscns原文少1个A,1475bp处多1个A,但与Binus报道的一致。为此将pBSA2.2k质粒中EcoRI-NcoI片段(包含上述两位点)克隆于M13mp18测序,获得相同结果。
- 杨宝华张鹰陈溥言王启松蔡宝祥
- 关键词：分子克隆马立克病病毒
- 新型鸭肝炎病毒GD1株VP1结构蛋白的基因分析及B细胞抗原表位预测被引量：5
- 2011年
- 对新型鸭肝炎病毒(DHV)GD1株VP1结构蛋白基因进行了扩增、克隆及序列测定。采用DNAStar Protean软件对VP1蛋白的二级结构、可塑性、亲水性、表面可能性及抗原指数等参数进行分析,综合预测其B细胞表位分布。结果表明,VP1基因长720 bp,编码240个氨基酸。与国内和韩国分离的新型毒株的氨基酸序列相似性最高,分别为99.6%,92.9%和92.5%。与台湾新型DHV的序列相似性均较低,分别为80.6%,80.2%,与传统的Ⅰ型DHV毒株的序列相似性最低,相似度仅为25.5%。较1型DHV存在多个氨基酸的插入和较多氨基酸位点的突变,高变区主要集中在180～220位。VP1结构蛋白的二级结构较为复杂,含有较多的β片层结构和转角结构,有多个区域为B细胞优势表位。该方法预测的B细胞表位结果有较高的准确度,为试验确定新型DHV毒株的VP1结构蛋白的B细胞表位和新的多表位疫苗设计提供了理论基础。
- 范卫国杜佳慧曹瑞兵陈溥言
- 关键词：新型鸭肝炎病毒VP1蛋白B细胞表位
- 噬菌体肽库技术筛选抗PRRSV肽及其应用被引量：1
- 2012年
- 噬菌体展示肽库是一种被广泛用于抗原表位鉴定,结合蛋白筛选的技术。该试验利用噬菌体展示技术筛选与猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒(PRRSV)ORF1B复制酶蛋白相互作用的蛋白,并进一步验证筛选蛋白的抗病毒作用。以表达纯化的PRRSV ORF1B蛋白CTD包被高亲和性96孔板作为靶蛋白,应用T7噬菌体展示技术对随机12肽库cDNA文库进行筛选,并分析测序筛选的克隆。将筛选出的克隆序列合成后,在体外验证合成多肽的抗PRRSV效果。结果表明,在4轮的噬菌体筛选后,共得到87个阳性克隆,经测序鉴定出11个筛选的12肽,并通过体外抗病毒试验得到P10是一个具有高抗病毒活性的12肽。试验结果为PRRSV的抗病毒研究奠定了基础。
- 侯凤香刘珂李培德涂宜强陈溥言涂国众
- 关键词：噬菌体展示肽库抗病毒
- 抗猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定被引量：5
- 2000年
- 用 PEG60 0 0沉淀和蔗糖密度梯度离心从细胞培养物中纯化猫泛白细胞减少症病毒 ( FPV) ,以纯化FPV免疫 BALB/c小鼠 ,运用淋巴细胞杂交瘤技术 ,获得了 4株抗 FPV的特异性单克隆抗体 ( Mc Ab)。其腹水 Mc Ab的 ELISA效价在 1 0 - 4～ 1 0 - 5之间 ,其中 1株具有血凝抑制能力。经 ELISA阻断试验及 ELISA交叉反应性试验测定 ,这 4株 Mc Ab可与 FPV、犬细小病毒 ( CPV)和水貂肠炎病毒 ( MEV)呈特异性反应 ,因此可作为检测 FPV、CPV和
- 钱建飞陈溥言蔡宝祥张振兴凌雯李银
- 关键词：猫泛白细胞减少症病毒单克隆抗体生物学特性
- 用RT-PCR技术诊断猪繁殖与呼吸综合征被引量：2
- 1999年
- 利用一对国内自行设计的PCR引物,经反应条件优化,临床样品选择,建立了RT-PCR法,用于猪繁殖与呼吸综合征病原诊断。以模拟临床样品检测,该法敏感度为10TCID50病毒。13个被检猪场中,12个猪场诊断结果与美国IDEXXPRRSV抗体诊断结果相一致。说明该法具有很高的特异性、敏感性和准确性。
- 于学辉刘内生姜平许家荣陈溥言
- 关键词：猪繁殖和呼吸综合征RT-PCR
- 法氏囊活性五肽BP5的抗肿瘤作用被引量：2
- 2015年
- 【目的】法氏囊活性五肽Bursopentin(BP5)是一种多功能生物学活性因子,不仅具有免疫调节和抗氧化功能,还具有抗肿瘤活性。目前,BP5发挥抗肿瘤生物功能的作用机制尚不清晰。【方法】本研究利用T7噬菌体展示技术构建鸡DT40细胞T7噬菌体c DNA文库,以BP5-BSA为靶分子对文库进行亲和淘选,通过序列测定和生物信息学分析,获得BP5的结合蛋白。通过分析BP5诱导的鸡DT40细胞mRNA基因表达谱和检测BP5对HCT116细胞中p53 Luciferase活性和p53信号通路中相关蛋白表达的影响来探讨BP5抗肿瘤的作用机制。【结果】构建的鸡DT40细胞T7噬菌体c DNA文库原始滴度为1.2×104pfu/m L,重组率为91.7%,扩增后滴度为1.9×109pfu/m L;通过生物淘选获得3条与BP5结合的鸡源蛋白血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A)、细胞周期蛋白E1(cyclin E1)和运输蛋白颗粒复合体2(trafficking protein particle complex 2)。基因表达谱分析结果显示,BP5参与调节多条与抗肿瘤功能有关的通路,其中包括p53信号通路,且p53信号通路涉及的5个差异表达基因均与细胞周期调控或抗肿瘤相关,其中SIAH1、TP53(p53)、CIP1(p21)基因被上调,CHEK2、CCNE1基因被下调。RT-PCR方法检测10个表达水平有明显变化的差异基因,其结果与基因芯片分析结果相符;BP5对p53 Luciferase活性的影响实验结果显示,BP5在0.2-20μg/m L浓度下能够明显提高HCT116细胞中p53相对Luciferase活性,Western blotting结果证实,BP5能显著促进p53、p21蛋白的表达水平,而CCNE1和CHEK2蛋白的表达水平则明显降低。【结论】本研究结果表明BP5通过p53信号通路途径发挥其抗肿瘤生物学功能,为进一步研究BP5抗肿瘤具体的分子机制提供了参考依据。
- 郭香玲王臣李小康吴庭才李德元陈溥言
- 关键词：DNA文库相互作用蛋白抗肿瘤
- 重组酵母鸡α干扰素的诱导表达及其抗MDV、NDV能力被引量：8
- 2010年
- 【目的】获得鸡α干扰素重组酵母菌诱导表达的最佳诱导时间和甲醇的体积分数,并测定诱导表达产物对鸡马立克氏病毒(MDV)和鸡新城疫病毒(NDV)的抑制能力。【方法】挑取2个鸡α干扰素重组酵母菌单菌落至BMGY培养基中培养,待菌液OD600为4左右时,分别转接至BMMY培养液诱导,1瓶每隔12 h补加1次体积分数0.5%甲醇,另1瓶每隔12 h补加1次体积分数1%甲醇,于24,48,72 h收集样品,备SDS-PAGE检测用。根据不同时间(24,48,72,96 h)诱导上清液表达量的差异,留用表达量最高时段的上清液,经初步纯化后,利用鸡胚成纤维细胞(CEF),分别测定重组酵母鸡α干扰素抑制MDV及NDV的能力。【结果】鸡α干扰素重组酵母菌在每隔12 h补加1次体积分数1%甲醇诱导48 h时,或每隔12 h补加1次体积分数0.5%甲醇诱导72 h时,重组酵母鸡α干扰素表达量均达到最高;且诱导上清液具有较好地抑制MDV、NDV的能力。【结论】获得了鸡α干扰素重组酵母菌小量发酵的最佳条件;获得的重组酵母鸡α干扰素对MDV和NDV有明显的抑制作用。
- 蔡梅红曹瑞兵曹景立王秀红陈溥言
- 关键词：酵母MDVNDV
- 一种重组鸡α干扰素基因及其重组载体
- 本发明涉及一种新型重组鸡α干扰素基因序列，并构建其重组表达载体，属于用分子生物学方法获得的基因工程生物制品。将新设计的鸡α干扰素的基因序列重组到pPICZα-A载体，然后通过电转化方式整合到酵母菌上的特定位置。并采用毕赤...
- 陈溥言侯凤香刘珂
- 文献传递
- 插入单个loxP位点的伪狂犬病病毒上海株TK基因缺失株的构建被引量：3
- 2006年
- 根据GenBank已发表的pEGFP-C1序列,设计并合成两对引物,PCR扩增出两端各含一loxP位点的GFP表达盒GFP-loxP。克隆于转移载体pSKLR获得pSKLR-GFP-loxP。基于同源重组原理,pSKLR-GFP-loxP与PRVSH株基因组DNA共转染293T细胞,在BrdU的筛选压力下,利用蚀斑法在TK-143细胞上筛选出表达GFP的TK基因缺失的重组毒株rPRV1。将表达Cre酶的质粒载体pPOG231与rPRV1基因组DNA共转染293T细胞,在Cre酶的作用下去除GFP表达盒以及一个loxP位点,筛选得到含单个loxP位点的重组病毒株rPRV2。PCR扩增证实所获得的重组病毒TK缺失270bp,只有一个34bp的loxP位点,并且能在RK-13细胞上稳定传代。LD50试验表明rPrV2的毒力下降。
- 王敏秀苏鑫铭于春梅曹瑞兵陈溥言
- 关键词：TK基因CRELOXP
