金怡
- 作品数：4 被引量：4H指数：2
- 供职机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>
- 发文基金：贵州省中药现代化科技产业研究开发专项项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Setd^(2−/−)急性髓系白血病小鼠模型中白血病起始细胞的转录和化疗抵抗异质性
- 2022年
- 背景与目的白血病起始细胞(leukemia-initiating cell,LIC)的异质性是急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)治疗的主要障碍。越来越多的证据表明,AML中同一患者体内经常共存多种具不同致病性的LIC。然而,这些共存的LIC在药物反应性等功能方面是否存在异质性尚不明确。因此,本研究旨在阐明LIC的内在异质性以帮助预测白血病的行为以开发更有效的治疗手段。方法将原代Setd2^(-/-)-AML发病鼠的全脾细胞移植入C57BL/6受体小鼠中,建立疾病的可移植模型。采用流式细胞术对白血病小鼠进行免疫表型分析,并利用全基因组测序技术检测诱导白血病发生的二次打击事件。另外,通过连续移植实验评判Setd2^(-/-)-AML细胞的自我更新能力,进行有限稀释实验确定不同细胞亚群中的LIC频率。群体细胞和单细胞RNA测序技术被用于分析LIC的转录异质性。同时,通过小分子抑制剂筛选以及体内药物实验揭示了不同LICs亚群在药物反应方面的差异性。结果本研究中,我们观察到一只年老Setd^(2−/−)小鼠出现了AML表型,并伴有Nras^(G12S)和Braf^(K520E)共突变。进一步研究发现,此小鼠体内共存2种不同的LIC,分别富集于c-Kit^(+)B220^(+)Mac-1^(−)和c-Kit^(+)B220^(+)Mac-1^(+)亚群。体内移植实验揭示,这2种LIC存在分化差异。此外,转录组分析显示c-Kit^(+)B220^(+)Mac-1^(+)亚群富集了阿霉素抗性相关的转录信号。后续实验证实,AML标准化疗方案阿霉素联用阿糖胞苷确实可以特异性杀伤c-Kit^(+)B220^(+)Mac-1^(−)细胞,但几乎不影响c-Kit^(+)B220^(+)Mac-1^(+)细胞的存活。进一步的研究显示,c-Kit^(+)B220^(+)Mac-1+亚群RAS下游信号通路的激活水平高于c-Kit^(+)B220^(+)Mac-1^(−)亚群,DA联合RAS通路抑制剂可同时有效杀伤这两个亚群,进而显著减缓Setd2^(-/-)-AML小鼠的疾病进展。结论本研究在Setd^(2−/−)-AML小鼠模型中鉴定到2个LIC富集群,同时揭示�
- 宋佳纯杜龙廷刘萍王福慧张波谢银银鲁静金怡周雁吕纲张建明陈赛娟陈竺孙晓建张元亮黄秋花
- 关键词：药物反应性
- 转基因斑马鱼分析胰岛β-细胞发育情况(英文)被引量：2
- 2009年
- 斑马鱼的个体小、高产和体外受精等特点使其已经迅速成为研究脊椎动物器官发育和人类疾病的模式生物之一。我们建立了一个转基因斑马鱼动物模型来研究胰岛β-细胞的发育。首先,构建了斑马鱼胰岛素(Insulin,INS)启动子与绿色荧光蛋白(GFP)组成的表达载体,命名为INS:GFP。其次,将质粒在斑马鱼1-细胞期注射到细胞质内。最后我们成功获得了生殖系稳定遗传胰岛素转基因斑马鱼,在成鱼和幼鱼期均可以通过GFP标记β-细胞。通过方便的荧光筛选,我们观察到胰岛在受精后18h开始形成,1—5d后由初始的脊索中线两侧向右迁移。从我们构建的胰岛素转基因斑马鱼,可以直观判断胰岛的发育情况,为研究胰岛的发育、损伤和再生提供了一个简便和直观的新型工具。
- 夏铭潘雪李敏燕邓敏张勇张勇金怡陈漪王和生
- 关键词：斑马鱼Β-细胞绿色荧光蛋白胰岛素
- 转基因系构建斑马鱼胰岛β-细胞发育模型被引量：1
- 2009年
- 目的:斑马鱼的发育周期短和胚胎透明等特点使其已经迅速成为研究脊椎动物器官发育和人类疾病的模式生物之一。为研究斑马鱼的胰岛β细胞的发育,构建了胰岛素生殖系转基因斑马鱼系。方法:构建了斑马鱼胰岛素(insu lin,INS)启动子与增强型绿色荧光蛋白(eGFP)组成的表达载体,命名为INS:eGFP。通过显微注射的方法将INS:eGFP注射到斑马鱼1-细胞期内的细胞质中,荧光筛选获得生殖系胰岛素转基因斑马鱼,并稳定表达传代。结果:建立生殖系胰岛素转基因斑马鱼,活体动态研究胰岛β细胞发育,原位杂交证实eGFP对胰岛β细胞可靠的示踪性。结论:通过胰岛素转基因斑马鱼的构建,可以直观判断胰岛的发育情况,为研究胰岛的损伤和修复提供了一个简便和直观的新型工具。
- 夏铭潘雪王和生邓敏金怡陈漪李敏燕孔德明
- 关键词：斑马鱼胰岛Β细胞发育绿色荧光蛋白胰岛素
- 新型的动物模型-可示踪胰岛β细胞发育的转基因斑马鱼被引量：2
- 2009年
- 目的建立活体可视化胰岛β细胞发育的立体表达动物模型。方法利用分子克隆、显微注射、全胚胎原位杂交和活体摄像等方法,建立绿色荧光蛋白标记胰岛β细胞的转基因斑马鱼。结果建立并筛选获得胰岛β细胞发育的转基因斑马鱼,证实荧光蛋白与内源性胰岛素的共定位表达,实现活体动态监测胰岛β细胞的发育情况。结论胰岛β细胞的转基因斑马鱼动物模型实现在整体动物水平上研究胰岛β细胞的发育。
- 夏铭潘雪邓敏金怡陈漪王和生孔德明
- 关键词：斑马鱼胰岛Β细胞转基因胰岛素荧光蛋白
