邱锡尔
- 作品数：12 被引量：37H指数：4
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- 三疣梭子蟹FAMeT基因克隆及其在蜕皮周期中的表达水平被引量：12
- 2013年
- 为了研究法尼酸甲基转移酶(FAMeT)在甲壳动物蜕皮调控中的作用,采用反转录PCR(RT-PCR)和cDNA末端快速扩增技术(RACE)克隆得到了三疣梭子蟹FAMeT的全长cDNA序列(GenBank登录号:KC192659),它包括一个201 bp的5'非编码区、一个318 bp的3'非编码区和一个825 bp的开放阅读框(ORF),编码274个氨基酸;推导的氨基酸序列与已公布的其他甲壳动物FAMeT进行比对,发现一致性达75%～97%,其中与远海梭子蟹FAMeT的一致性最高;而且该氨基酸序列由两个CF(CPAMD8/FAMeT)区域组成,这两个CF区域是FAMeT的标志,在所有甲壳动物的FAMeT里均有发现,因此推导的氨基酸序列是三疣梭子蟹FAMeT基因。运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)的方法分析了其在不同组织中、不同蜕皮周期中的表达量变化,发现FAMeT在三疣梭子蟹的各个组织里均有表达,且在胸神经节里表达最强;在三疣梭子蟹蜕皮过程中,大颚器中FAMeT在D1期表达最强,然后逐渐下降至D4最低。该结果表明FAMeT在三疣梭子蟹蜕皮调控中起着重要的作用。
- 谢熙朱冬发崔晓雨汤洁邱锡尔
- 关键词：三疣梭子蟹克隆
- 甲基法尼酯在甲壳动物中的生理作用及其机制的研究进展被引量：7
- 2015年
- 甲基法尼酯是一种类倍半萜烯激素,与昆虫的保幼激素在结构和功能上相似,是重要的内分泌调控因子。MF与甲壳动物的蜕皮、形态建成、渗透压调节、卵巢发育等生理活动的调控密切相关。主要就甲基法尼酯在甲壳动物中的生理功能、分子作用机制及其合成代谢等方面的研究进展进行综述,为进一步深入探讨甲基法尼酯的作用机制和解决虾蟹类养殖实践中的性早熟与亲本发育不良等难题奠定基础。
- 邱锡尔朱冬发汤洁崔晓雨周彦琦柳志业
- 关键词：生理功能甲壳动物
- 三疣梭子蟹CYP302a1基因克隆及其表达分析被引量：4
- 2015年
- 细胞色素P450(CYP)302a1是昆虫蜕皮激素合成通路中的关键酶,为了研究其在三疣梭子蟹蜕皮过程中的调控作用,实验采用反转录PCR(RT-PCR)和c DNA末端快速扩增(RACE)技术,克隆得到了三疣梭子蟹CYP302a1全长c DNA序列(Gen Bank登录号:KM596851)。该序列全长为3 171 bp,包含一个长度为1 626 bp的开放阅读框,编码541个氨基酸;序列分析显示该氨基酸含helix-C、helix-K、helix-I、PERF及heme-binding共5个P450特征保守区域;系统进化树分析发现三疣梭子蟹CYP302a1与日本剑水蚤CYP302a1聚为一小支,再与其他物种CYP302a1聚为一支。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析了CYP302a1在不同组织和蜕皮过程中的表达水平变化。结果显示,CYP302a1的表达量在Y器中最高,而在其他组织中均极低(P<0.05);蜕皮过程中,CYP302a1在蜕皮后期(A、B期)表达量最低,从蜕皮间期(C期)开始上升,至蜕皮前期的D1亚期达到最大值,随后下降。结果表明CYP302a1在三疣梭子蟹蜕皮调控中可能起着重要作用。
- 柳志业朱冬发谢熙邱锡尔周彦琦沈锡权
- 关键词：三疣梭子蟹基因克隆
- 甲壳动物RNAi技术研究与应用进展被引量：3
- 2015年
- RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指由双链RNA(double-stranded RNA,ds RNA)诱发的一种使特定基因沉默的现象。作为一种研究基因功能、发现新基因和抗病毒的新型手段,近年来RNAi技术在昆虫、真菌、植物和哺乳动物等的研究中已被广泛应用,但是在甲壳动物研究中尚处于起步阶段。对甲壳动物RNAi技术实施方法做了简要介绍;着重综述了RNAi技术在甲壳动物CHH家族神经肽类基因功能、蜕皮和生长调控机制、配子及性腺发育调控和甲壳动物抗病毒机制研究上的应用进展。
- 邱锡尔朱冬发周彦琦柳志业谢熙
- 关键词：RNAI甲壳动物基因功能抗病毒
- 三疣梭子蟹fps克隆及其在卵巢发育中的表达分析被引量：4
- 2016年
- 法尼基焦磷酸合成酶(FPS)是类异戊二烯生物合成途径中的关键酶,参与甲壳动物甲基法尼酯(MF)等萜类激素的合成。为研究FPS在甲壳动物卵巢发育中的调控作用,采用RT-PCR和cDNA末端快速扩增技术(RACE技术)克隆得到了三疣梭子蟹fps(Ptfps)的序列全长(Gen Bank登录号:KM013803)。结果显示:Ptfps cDNA全长为2 360 bp,开放阅读框长1 290 bp,编码429个氨基酸。生物信息学分析发现PtFPS具有7个异戊烯基转移酶的保守结构域,与已公布的内华达古白蚁FPS同源性最高(达到58%)。实时荧光定量PCR分析结果显示:fps主要在大颚器(MO)中表达,远高于其它组织的表达水平(P<0.01);在第1次卵巢发育过程中,fps的表达水平在Ⅳ期显著升高(P<0.05),之后略有下降;在第2次卵巢发育过程中,fps的表达水平在Ⅲ期显著升高(P<0.05),并在IV期达到最大。以上结果表明fps可能参与三疣梭子蟹卵巢发育的调控。
- 朱韬朱冬发邱锡尔周彦琦柳志业谢熙
- 关键词：三疣梭子蟹克隆卵巢发育
- 三疣梭子蟹腺苷酸转移酶(ANT)基因的克隆与分析被引量：2
- 2016年
- 腺苷酸转移酶(Adenine nucleotide translocase,ANT)是线粒体内膜上负责能量分子传导的转运蛋白,在能量代谢中起着关键作用。为了研究ANT基因在甲壳动物蜕皮中的作用,采用RT-PCR和c DNA末端快速扩增技术(RACE技术)克隆得到三疣梭子蟹ANT基因的序列全长(Gen Bank登录号:KM921660),该序列全长1 414 bp,包括132 bp的5'端非编码区,352 bp的3'段非编码区,具有930 bp的完整开放阅读框(ORF),编码309个氨基酸。将该ANT基因序列推导的氨基酸序列与已公布的其他物种ANT序列进行系统进化树分析发现,三疣梭子蟹ANT基因与其他甲壳动物ANT基因聚为一支,其中与拟穴青蟹ANT一致性高达96%。通过氨基酸序列比对发现,三疣梭子蟹ANT序列具有3个保守的线粒体穿膜功能结构域,是形成能量分子传导的转运通道,催化细胞质中ADP和线粒体内ATP间进行跨膜交换。采用实时荧光定量PCR技术,分析三疣梭子蟹ANT基因的组织差异表达,结果表明ANT基因在三疣梭子蟹肌肉(Ms)中的表达量最高,在其他组织中表达量均较低,具显著差异(P<0.05);在三疣梭子蟹蜕皮周期中,肌肉中ANT基因的表达量A期最高(P<0.05),然后下降,至C期最低,随后又逐渐上升至D1期,在D1期出现第2个峰值后再逐渐下降。研究结果说明ANT基因与三疣梭子蟹肌肉活动密切相关,可能在蜕皮调控中发挥重要作用。
- 李冰玥朱冬发邱锡尔周彦琦柳志业谢熙
- 关键词：三疣梭子蟹克隆
- 三疣梭子蟹AACT基因克隆及其在卵巢发育中的表达分析被引量：4
- 2015年
- 乙酰Co A酰基转移酶(acetyl-Co A C-acetyltransferase,AACT)是甲羟戊酸途径的初始酶,为了研究该酶在甲壳动物卵巢发育调控中的作用,用RT-PCR和c DNA末端快速扩增(RACE)技术,克隆得到三疣梭子蟹AACT(Pt-AACT)的c DNA全长(Gen Bank登录号:KM033231)。这段序列全长1 630 bp,包括1个101 bp的5'端非编码区,1个395 bp的3'端非编码区和1个1 134 bp的开放阅读框,编码377个氨基酸。对其氨基酸序列进行生物信息学预测,发现Pt-AACT属于疏水性蛋白,无跨膜结构域,存在2个硫解酶特异性保守区。与其他已公布物种的AACT氨基酸序列进行比对,发现与金小蜂、埃及伊蚊等同源性最高(均为72%)。系统进化树结果显示,Pt-AACT与昆虫AACT聚为一支,用实时荧光定量PCR(qRTPCR)技术,分析三疣梭子蟹AACT的组织表达差异及在卵巢发育中的表达变化,结果表明AACT在大颚器中表达量最高,在其余组织中表达量较低,差异显著;在卵巢发育Ⅰ期表达量最高,与其他期存在极显著差异。表明AACT可能在三疣梭子蟹卵巢发育中具有一定调控作用。
- 王凤皎朱冬发邱锡尔谭义川周彦琦柳志业谢熙
- 关键词：三疣梭子蟹基因克隆卵巢发育
- 三疣梭子蟹甲基法尼酯合成关键酶基因在蜕皮中的表达分析
- 甲基法尼酯(methyl farnesoate,ME)是一种类似昆虫保幼激素(JH)的倍半萜,在甲壳动物的生长发育及繁殖过程中起着重要的作用.3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methyl g...
- 谢熙邱锡尔朱冬发
- 关键词：三疣梭子蟹基因表达
- 日本蟳高血糖激素基因的克隆与表达分析被引量：1
- 2014年
- 通过RACE技术克隆获得日本蟳Charybdis japonica高血糖激素基因（CjCHH）全长cDNA序列;运用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）方法分析该基因的组织差异性表达;利用原核表达技术获得CjCHH重组蛋白。序列分析表明：CjCHH cDNA全长1754 bp,包含111bp的5’末端非编码区（UTR）,423 bp的开放阅读框（ORF）,以及1236 bp的3’UTR,该基因可编码140个氨基酸。序列比对结果显示：CjCHH的成熟肽序列与其它甲壳动物CHH的一致性为41%~88%。系统进化树显示：CjCHH与其它梭子蟹科的CHH聚在一起,这与日本蟳所处的分类地位一致。组织差异性表达研究显示：CjCHH在检测的10个组织中均有表达,其中眼柄中表达量最高,肠和Y-器次之,其余组织表达量较低。成功构建了CjCHH重组表达质粒pET-CHH,并在大肠杆菌（Escherichia coli）中获得了高效表达,重组蛋白的相对分子量约11 kDa,与预测的相对分子质量大小相一致,表达水平在5 h的IPTG诱导过程中呈现上升趋势。
- 汤洁朱冬发崔晓雨谢熙邱锡尔
- 关键词：日本蟳CDNA克隆原核表达
- 三疣梭子蟹EcR基因的克隆及表达分析被引量：9
- 2013年
- 为研究蜕皮激素受体（EcR）在甲壳动物生长和生殖过程中的作用，采用反转录PCR（RT-PCR）和cDNA末端快速扩增（RACE）技术，克隆了三疣梭子蟹蜕皮激素受体（PtEcR）基因全长cDNA序列（GenBank登录号：KC354381），运用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）方法，分析该基因在不同组织、蜕皮时期和二次卵巢发育阶段的表达特征。结果表明，PtEcRcDNA全长2231bp，包含1269bpORF，编码422个氨基酸；推导的PtEcR氨基酸序列与已公布的其他甲壳动物EcR进行比对，发现一致性达67％-97％；系统进化树分析PtEcR与其它甲壳动物EcR聚为一支，而昆虫EcR聚为另一支。PtEcR在检测的三疣梭子蟹10个组织中均有表达，其中在Y-器（YO）表达量最高。在蜕皮周期中，自蜕皮后期至蜕皮前期D2亚期PtEcR在YO中的表达量一直较低；至D3亚期和D4亚期，PtEcR表达量显著升高，这与血淋巴中20-羟基蜕皮酮（20E）浓度在D3／D4亚期显著升高相协同，表明PtEcR在三疣梭子蟹蜕皮过程中起着重要的作用。二次卵巢发育阶段，ptEcR在YO和肝胰腺（Hp）中的表达量自Ⅱ期逐渐升高至Ⅳ期达到最高；卵巢（Ov）中，则在Ⅰ、Ⅲ期较低，Ⅱ、Ⅳ期较高，表明PtEcR可能参与卵巢发育和卵黄发生。
- 崔晓雨朱冬发汤洁谢熙邱锡尔
- 关键词：三疣梭子蟹
