辛伟 作品数:5 被引量:19 H指数:3 供职机构: 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室 更多>> 发文基金: 公益性行业(农业)科研专项 安徽省高校省级自然科学研究项目 安徽省自然科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 更多>>
副猪嗜血杆菌安徽株分型及tbpA基因的克隆表达和免疫保护作用的研究 副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)是猪的革拉斯氏病(Glasser's disease)的病原体,猪上呼吸道的一种共栖菌,它可在特定条件下侵入机体而引起以纤维素性多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎... 辛伟关键词:副猪嗜血杆菌 克隆表达 免疫保护 文献传递 副猪嗜血杆菌转铁结合蛋白A基因的分段表达及其免疫原性分析 被引量:3 2011年 本研究旨在获得副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)转铁结合蛋白A基因(tbpA)的表达产物(TbpA),并对其免疫原性进行分析鉴定。采用生物信息学方法预测HPS的TbpA抗原表位,根据GenBank上发表的HPS(SH0165株)tbpA的核苷酸序列设计合成3对引物,用PCR从安徽省HPS分离株(LJ3)tbpA中分段扩增出tbpA1、tbpA2和tbpA3,并连接到pET-32a(+)载体上,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切鉴定和测序确认,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中,进行IPTG诱导表达。利用SDS-PAGE检测目的蛋白,Western blotting分析重组蛋白的免疫活性;通过小鼠免疫攻毒保护试验和血清杀菌力试验,鉴定重组蛋白的免疫原性以及诱导机体产生保护性免疫反应的能力。结果表明,从HPS(LJ3)tbpA中扩增出与预期设计的1 140、897、666bp大小相符的3个片段(tbpA1、tbpA2、tbpA3),扩增产物连接载体得到重组质粒,在大肠杆菌中实现表达,获得大小为62、54、44ku的目的蛋白(rTbpA1、rTbpA2、rTbpA3),均能与HPS阳性血清反应。rTbpA1与甲醛灭活菌体对小鼠免疫攻毒的保护率分别为20%和40%,但rTbpA1引起小鼠平均死亡时间显著延迟,兔抗rTbpA1与兔抗HPS(LJ3)血清具有同样显著的杀菌活性。结果显示,成功表达的rTbpA1、rTbpA2、rTbpA3均具有良好的反应原性,其中rTbpA1更具有良好的免疫原性以及诱导机体产生保护性免疫反应的能力,可望成为副猪嗜血杆菌病疫苗和血清学检测的候选成分。 辛伟 李郁 黄晓慧 魏建忠关键词:副猪嗜血杆菌 J亚群鸡白血病病毒AH09/2株的gp85基因的克隆与原核表达 2010年 利用PCR方法扩增出J亚群禽白血病病毒(ALV-J)AH09/2株的gp85基因全长930 bp DNA片段。经T载体克隆测序并连接到pGEX-6p-1载体上,构建了重组表达质粒pGEX-6P-1-gp85,在IPTG的诱导下进行表达。Western-blot结果分析表明,gp85融合蛋白表达产物分子量大小约61 kDa,并能与ALV-Jenv基因单抗发生特异性反应。这些结果为深入研究GP85蛋白的生物学功能及研制ALV-J检测ELISA试剂盒奠定了基础。 刘迪 王桂军 赵圆圆 辛伟 魏建忠 李郁 孙裴 张训海 秦爱建关键词:J亚群禽白血病病毒 GP85基因 原核表达 安徽省禽白血病感染的血清学调查及gp85基因的扩增 被引量:15 2010年 随机抽取安徽省3个肉种鸡场种鸡及3个地市农贸市场商品鸡的血清样本和泄殖腔拭子,采用ELISA进行鸡白血病检测,并对J亚群鸡白血病病毒抗体阳性鸡群中病鸡的肝组织、全血及上毒细胞提取DNA进行PCR扩增和基因测序。检测结果表明,3个肉种鸡场中J亚群鸡白血病抗体阳性检出率分别为:0、73.50%和15.22%;3个农贸市场商品鸡抗体阳性检出率分别为:12.00%、2.22%和9.10%。3个肉种鸡场A、B亚群鸡白血病的抗体阳性率分别为0、17.93%和1.08%,ALV抗原阳性率分别为2.17%、17.93%和15.22%。PCR检测结果表明,从可疑发病鸡的肝组织和全血中均能扩增出ALV-J gp85特异性片段。结果证实安徽省鸡群中有ALV-J感染,并呈不同程度的流行,应引起高度重视。 刘迪 赵圆圆 丁亮 辛伟 李郁 魏建忠 孙裴 秦爱建 刘光清 王桂军关键词:血清学调查 ELISA PCR 副猪嗜血杆菌转铁结合蛋白A基因的原核表达与鉴定 被引量:3 2012年 为获得副猪嗜血杆菌(HPS)转铁结合蛋白A基因(tbpA)的表达产物,根据GenBank发表的HPS(SH0165株)tbpA的核苷酸序列设计合成1对特异性引物,以HPS血清13型安徽分离株(LJ3)的基因组DNA为模板,利用PCR扩增tbpA基因,然后将其克隆至pET-SUMO载体,构建重组原核表达质粒pET-SUMO-tbpA,通过PCR鉴定和测序确认,将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)中,并进行IPTG诱导表达和His-Ni-resin纯化目的蛋白。经SDS-PAGE检测,获得了110ku的表达产物,与预期大小的转铁结合蛋白A(TbpA)的分子质量一致。Western-blot分析表明,表达产物与HPS阳性血清能发生反应,显示表达产物具有良好的免疫活性。结果表明,成功表达的TbpA为研制HPS新型疫苗和诊断试剂奠定了基础。 黄晓慧 辛伟 魏建忠 连凯琪 郑海学 朱启运 才学鹏 李郁关键词:副猪嗜血杆菌 原核表达