谢晓砚
- 作品数：13 被引量：35H指数：3
- 供职机构：四川大学华西第二医院妇产科更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省科技厅科技支撑计划项目长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 建立人卵巢癌动物模型的方法
- 本发明属于生物技术领域，具体涉及建立人卵巢癌动物模型的方法。本发明要解决的技术问题是提供建立人卵巢癌动物模型用组织的处理方法及模型建立方法。本发明提供了建立人卵巢癌动物模型用组织的处理方法，包括如下步骤：1）人卵巢癌细胞...
- 张建军刘珊玲谢晓砚陈新莲王和
- 文献传递
- 人VIGILIN的shRNA真核表达质粒的构建及其对肝癌细胞周期影响的初探被引量：2
- 2008年
- 目的构建靶向人高密度脂蛋白结合蛋白(VIGILIN)的shRNA真核表达载体,并初步探索VIGILIN与人肝癌细胞系HepG2细胞周期是否有关联。方法构建人VIGILIN的shRNA重组质粒,并将重组质粒pSIREN-VIG转染HepG2细胞,采用RT-PCR和Western-blot检测HepG2细胞VIGILIN mRNA和蛋白的表达,并用流式细胞术检测细胞周期是否有所改变。结果1HepG2细胞转染pSIREN-VIG后,VIGILIN的表达被特异、有效地抑制。转染48h后,VIGILIN的表达从mRNA和蛋白的水平都有明显的减少;2VIGILIN表达抑制后,G2/M期细胞所占比例增加:相对于三个对照组(未转染组2.4%,脂质体转染组4.9%和转染pSIREN-GFP组6.5%),实验组(转染pSIREN-VIG组)G2/M期细胞增加到9.4%。结论我们成功的构建了能特异、有效的抑制人VIGILIN表达的shRNA表达质粒,人VIGILIN能够影响到细胞周期的正常运行,导致G2/M期阻滞。
- 谢晓砚魏玲杨文理葛亚俊覃扬
- 关键词：RNA干扰细胞周期
- 人VIGILINN端融合蛋白的表达及亚细胞定位被引量：2
- 2009年
- 目的原核表达人VIGILINN端基因,制备抗人VIGILIN的多克隆抗体,对人VIGILIN作亚细胞定位。方法用PCR扩增人VIGILIN基因N端,克隆到表达载体pGEX-4T-2中,并在大肠杆菌中以IPTG诱导表达。产物经Glutathion Sepharose 4B纯化后免疫新西兰白兔制备抗人VIGILINN端融合蛋白抗体,采用ELISA和Western blot鉴定抗体的效价及特异性。通过细胞免疫荧光染色,观察VIGILIN在细胞中的分布。结果在28℃1、mmol/L IPTG诱导3 h的最优条件下成功表达GST-VIGILIN N端融合蛋白,抗体ELISA滴度为1∶16000,Western blot证实抗体特异性较高,VIGILIN在细胞质和核中均有分布,核中的分布集中在核膜内侧和靠近DAPI染色显著的区域。结论成功表达人VIGILIN N端融合蛋白和制备兔抗人VIGILIN抗体,并应用于亚细胞定位,为研究人VIGILIN的性质和功能奠定基础。
- 魏玲张朝良蒋磊杨文理谢晓砚覃扬
- 关键词：原核表达多克隆抗体亚细胞定位
- 人羊水干细胞分离方法及其生物学特性研究被引量：4
- 2012年
- 目的建立体外培养人羊水来源CD117阳性干细胞的方法,初步探讨CD117阳性干细胞的特性。方法通过孕中期羊膜腔穿刺获得86例羊水标本。采用CD117磁珠分选表达CD117抗原的羊水干细胞。对经过反复冻存的CD117阳性干细胞进行核型分析。分别经成脂诱导和成骨诱导分化,再分别使用油红O染色、茜素红染色。结果从61例标本中成功分离培养出CD117阳性细胞,经核型分析显示其染色体核型正常。CD117阳性细胞经成骨和成脂诱导后,茜素红和油红O染色阳性,说明可以向脂肪细胞和成骨细胞分化。结论基于本研究,孕中期羊水CD117阳性细胞的分选成功率为70.93%。CD117阳性细胞在体外培养中保持形态和遗传学的稳定。在特殊培养条件下,人源羊水CD117阳性干细胞在体外,可以诱导分化成为脂肪细胞和成骨细胞,可能应用于细胞移植和再生医学。
- 关婷陈新莲魏杨君赖怡谢良玉刘之英张雪梅刘洪倩张建军谢晓砚刘珊玲
- 关键词：羊水CD117干细胞分化
- 腺病毒选择性互补复制的方法
- 腺病毒选择性互补复制的方法属生物医学领域，涉及使复制缺陷型腺病毒选择性、互补性地在肿瘤细胞内复制的方法。特点是两种复制缺陷型腺病毒互补性地拥有对方所缺失的一种早期基因，且其中一种复制缺陷型腺病毒的该早期基因由肿瘤特异性启...
- 王和刘珊玲陈新莲谢晓砚
- 文献传递
- 长链非编码RNA HOTAIR mRNA在卵巢癌中的表达被引量：18
- 2013年
- 目的探讨长链非编码RNA HOX转录反义RNA(HOTAIR)在卵巢癌组织与正常卵巢组织中的表达差异。方法对44例卵巢癌组织及14例正常卵巢组织样本采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)方法检测长链非编码RNA HOTAIR mRNA的表达。结果卵巢癌组织中HOTAIR mRNA表达高于正常卵巢组织〔(1.26±0.27)vs.(0.14±0.09)〕,差异有统计学意义(P<0.05),病理类型为低度分化及未分化的卵巢癌组织中HOTAIR mRNA表达高于中-低、中-高及高度分化组织〔(1.65±0.41)vs.(0.39±0.14)〕,差异有统计学意义(P<0.05)。结论卵巢癌组织中HOTAIR的表达增高,且癌组织分化越低,HOTAIR表达越高。提示HOTAIR有可能作为发现卵巢癌,并判断其恶性程度的一个分子标志。
- 崔玲谢晓砚王和陈新莲刘珊玲胡丽娜
- 关键词：长链非编码RNA卵巢癌实时荧光定量PCR
- 腺病毒选择性互补复制的方法
- 腺病毒选择性互补复制的方法属生物医学领域，涉及使复制缺陷型腺病毒选择性、互补性地在肿瘤细胞内复制的方法。特点是两种复制缺陷型腺病毒互补性地拥有对方所缺失的一种早期基因，且其中一种复制缺陷型腺病毒的该早期基因由肿瘤特异性启...
- 王和刘珊玲陈新莲谢晓砚
- 文献传递
- 人VIGILIN参与调控肝癌细胞H19和IGF2印记基因表达的研究被引量：2
- 2009年
- 目的探讨人高密度脂蛋白结合蛋白基因(VIGILIN)是否参与肝癌细胞在细胞周期中印记基因H19和胰岛素样生长因子2(IGF2)表达的调控。方法通过流式细胞术检测人肝癌细胞HepG2细胞周期选择周期点,采用RT-PCR、RNA干扰、实时荧光定量RT-PCR检测各周期点VIGILIN、H19、IGF2基因表达。结果①HepG2细胞周期约为20h;其中0～9h、20～28h约为S期,9～20h、28～39h约为G2/M、G1期,并选定6h、20h、43h、60h,分别代表S期中期、G1～S期、S期中期和G1期末;②细胞周期同步化后加入血清,刺激VIGILIN转录,上调VIGILIN的表达,从G2/M至G1期,逐渐增加,G1期末达高峰,S期逐渐减少;与之相反,H19的表达,在S期逐渐增加,在G2/MG1期逐渐减少,在S期中期达到高峰。而IGF2的表达也增加但没有明显的周期性。H19与VIGILIN mRNA表达呈负相关(r=-0.6941,P<0.05)。③用VIGILIN shRNA(pSIREN-VIG shRNA)重组载体转染HepG2细胞48h后,相对于3个对照组(未转染组,脂质体转染组和转染pSIREN-GFP shRNA组),实验组VIGILIN mRNA的表达受到明显抑制,此时,IGF2mRNA表达增加30.13%,H19mRNA表达减少12.08%。结论VIGILIN和H19 mRNA表达与细胞周期有关;VIGILIN参与调控H19、IGF2印记基因的表达。
- 葛亚俊谢晓砚杨博柴新娟张迎春覃扬
- 关键词：MRNA表达细胞周期
- 人vigilin基因全长编码区的分段克隆及鉴定被引量：3
- 2008年
- 目的为了探讨全长VIGILIN、VIGILIN的N端、VIGILIN的C端以及不同KH组合的功能,采取5分段扩增的策略克隆全长vigilin基因。方法根据vigilin基因全长编码区内的限制性核酸内切酶位点,将vigilin基因全长编码区分为5段。从意外死亡健康成人肝组织中提取总RNA,RT-PCR分段扩增目的基因,克隆至pUC118载体,测序,并亚克隆至pUC118载体,对接头部位测序。结果获得8个大小不同的人vigilin基因编码区片段和全长编码区。重组全长vigilin质粒pC118/vigilin(12+345)经测序,与GenBank上登陆的人vigilin cDNA(NM:005336)序列完全一致。结论用分段克隆的方法成功获得了人vigilin基因的全长编码区。
- 杨文理武静谢晓砚魏玲覃扬
- 关键词：克隆
- 转录因子CTCF对人肝癌干细胞及细胞增殖的影响被引量：1
- 2014年
- 目的探讨CCCTC结合因子(CTCF)蛋白对人肝癌细胞(HepG2)的肿瘤干细胞的影响以及对HepG2和CNE1(鼻咽癌细胞系)细胞生存能力的影响。方法构建pEGFP-N1/CTCF、CTCFshRNA和GFPshRNA质粒,转染至HepG2和CNE1细胞后,以RT-PCR及Western blot检测CTCF mRNA和蛋白的表达。采用流式细胞术检测转染CTCF-shRNA质粒后48h的HepG2细胞中携带表面抗原CD90肿瘤干细胞的比例,以转染GFP-shRNA的HepG2细胞和野生型HepG2细胞为对照。采用MTT方法分别检测转染CTCF过表达重组质粒及CTCF-shRNA质粒后24、48、72hHepG2和CNE1细胞的生存能力。结果 pEGFP-N1/CTCF转染后增加HepG2和CNE1细胞中CTCF mRNA和蛋白的表达(与pEGFP-N1相比,P<0.05),CTCF-shRNA转染则降低表达(与GFP-shRNA相比,P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,CD90+细胞的检出率在转染CTCF-shRNA质粒细胞〔(1.733 0±0.417 7)%〕高于野生型HepG2细胞〔(0.575 0±0.062 9)%〕及转染对照GFP-shRNA质粒细胞〔(0.350 0±0.086 6)%〕(P<0.05);MTT实验结果显示CTCF的表达改变对HepG2和CNE1细胞的生存能力的影响不明显(P>0.05)。结论 CTCF可抑制人肝癌干细胞生成,对HepG2和CNE1细胞生长无明显影响。
- 刘秋英谢晓砚魏玲刘俊沈文燕李冉俞小琴覃扬
- 关键词：CTCF细胞增殖
